慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多样性研究及临床意义

薛 魁

蚌埠医学院第二附属医院口腔科，安徽 蚌埠 233000

慢性牙周炎（chronic periodontitis）是一种常见的口腔疾病，严重时可能会导致牙齿脱落和牙周组织被破坏，该疾病的发生和发展与口腔微生物群落密切相关。近年来，通过对慢性牙周炎患者与牙周健康人唾液微生物的多样性进行研究，人们逐渐认识到了微生物对牙周炎的重要作用。比较慢性牙周炎患者与牙周健康人唾液微生物的组成，可以发现它们之间的差异，并能进一步探索微生物与疾病发生和发展之间的关系[1]。牙周病是造成全球慢性疾病最重要的口腔疾病之一，是一个非常重大的公共卫生问题[2]。慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多样性研究在临床上具有重要意义。因此，本文针对慢性牙周炎患者与牙周健康人唾液的微生物多样性及其临床意义展开研究。

1 相关介绍

1.1 慢性牙周炎的定义

慢性牙周炎是一种常见口腔疾病，主要是由牙龈周围的细菌感染导致的牙周组织的长期炎症反应。该疾病通常是由牙齿菌斑（牙菌斑）积累和不良口腔卫生习惯引发的[3]。牙周炎的早期症状包括牙龈红肿、易出血、口腔异味和牙龈疼痛。如果不加治疗，炎症就会持续存在，导致牙龈脱离牙齿，形成牙周袋（牙龈下袋），最终导致牙齿松动、牙齿移位甚至牙齿脱落。

1.2 唾液微生物多样性的重要性

唾液微生物多样性指口腔微生物种类的丰富程度。首先，健康的口腔微生物群落是保持口腔健康的关键。多样化的微生物群落可以保持平衡状态，抑制有害菌的生长，预防口腔疾病。其次，一些特定的唾液微生物有助于预防龋齿[4]。最后，多样化的唾液微生物群落可以与有害菌争夺营养资源和生存空间，从而抑制它们的生长。某些微生物还可以产生抗菌物质，能对抗有害菌生长。

2 慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多样性研究

2.1 实验材料

研究慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多样性，需准备如下实验材料。

慢性牙周炎患者样本：收集已被诊断为慢性牙周炎患者的唾液样本。

牙周健康人样本：收集没有患牙周炎及其他口腔疾病的健康人的唾液样本作为对照组。

唾液收集工具：包括唾液采集器和试管等。唾液采集器可以用专业的唾液采集器或无刺激性的唾液刺激剂，如柠檬、橙皮等。

实验室用品：离心机、微量吸头、冰箱、离心管和离心管架等。

实验室设备：高通量测序设备、PCR 仪、电泳仪等。这些设备可用于对唾液微生物DNA（脱氧核糖核酸，DeoxyriboNucleic Acid）的提取、扩增、测序和分析。

数据分析工具：包括生物信息学分析软件和统计学分析软件。用于分析测序数据，确定微生物的存在及其丰度，并对其进行差异分析和统计学处理。

在开展唾液微生物多样性研究时，需充分保护样本的质量和隐私，合理使用实验材料，并遵循相关伦理原则，确保实验操作的严谨性和准确性，从而获取可靠的研究结果。

2.2 实验步骤

第一步：受试者选择。从慢性牙周炎患者和牙周健康人中筛选合适的受试者，确保其符合研究的诊断标准与排除标准，并获取受试者的知情同意书。本次研究选取同一地区的3 名牙周炎患者（A 组）与三名健康人员（B 组），共6 人。

第二步：唾液采集。实验开始前，要求在受试者未进食、漱口或刷牙的情况下采集其唾液样本。使用唾液采集器或无刺激性唾液刺激剂，让受试者自行采集约2～5 mm 的唾液样本，并将样本置于收集器具中。

第三步：样本处理。将采集的唾液样本转移到离心管中，并进行离心操作，以分离唾液液相和沉淀物。将唾液液相转移到新的离心管中，进行下一步处理。

第四步：DNA 提取，使用商用DNA 提取试剂盒，从唾液液相中提取微生物DNA。按照试剂盒的说明书或提取方法的操作步骤进行操作，并确保所提取DNA 的质量和浓度能满足后续分析的需要。

第五步：PCR 扩增。根据研究目的，选用适当的引物对微生物的16S rRNA 基因或其他感兴趣的基因片段进行PCR 扩增。设置合适的对照组，进行扩增反应，并使用负对照检验扩增试剂的污染情况。

第六步：高通量测序。使用Illumina MiSeq 或其他高通量测序平台对扩增后的PCR 产物进行高通量测序。根据测序平台的操作流程，将样品序列化，并对其进行质量控制和过滤，以获得可靠的测序数据。

第七步：数据分析。采用适当的生物信息学工具和统计学方法，对测序数据进行分析与解读，包括微生物丰度计算、物种组成分析、多样性指数计算、差异分析及生物学功能预测等。根据分析结果，对慢性牙周炎患者与牙周健康人的唾液微生物多样性进行对比和研究。

第八步：结果解释和讨论。根据实验结果，解释慢性牙周炎患者与牙周健康人的唾液微生物组成的差异，以及可能对疾病发生和发展起作用的微生物群落。讨论与现有研究结果的一致性，并提出临床意义。

2.3 结果与分析

本次实验结果采用多样性指数计算，多样性指数可以衡量唾液微生物群落的物种丰富度和均匀度。常用的指数有Shannon 指数、Simpson 指数、Chao1 指数等。对慢性牙周炎患者和牙周健康人的唾液微生物群落进行多样性指数计算，可以评估不同人群微生物多样性的差异性，并与疾病的发生和发展进行关联分析。本次实验结果如表1 所示。

从以上结果可知，B 组Shannon 指数和Simpson指数相对偏高，证明B 组唾液微生物群落的物种多样性和均匀度较高；B 组的Chao1 指数和ACE 指数也相对较高，证明B 组唾液微生物群落的物种丰富度也较好。不断重复实验进行确定，可以为慢性牙周炎的诊断、治疗和预防提供更准确的指导，有助于促进个体化的口腔健康管理和疾病干预。

3 慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多样性研究的临床意义

3.1 早起筛查和诊断

首先，对慢性牙周炎患者与牙周健康人唾液微生物的多样性进行比较，可以鉴别并筛查潜在的牙周炎风险。早期发现炎症倾向的人群，有助于对其及时采取干预措施，以阻止牙周炎的发展。其次，唾液微生物多样性的研究能为慢性牙周炎的诊断提供支持。个体间唾液微生物的差异可以作为牙周炎的生物学标志物，帮助医生鉴别牙周炎的发生和程度。通过分析唾液微生物组成的变化，可以判断牙周炎的类型及病情的严重程度。

3.2 慢性牙周炎的临床管理

首先，通过分析慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多样性的差异，可以指导制定个体化的治疗方案。了解患者口腔微生物的组成状况，有助于选择合适的治疗方式，如为口腔提供卫生指导、局部抗菌治疗、机械洁治等，以恢复口腔健康和控制炎症。其次，治疗慢性牙周炎后，比较治疗前后患者唾液微生物多样性的变化，可以评估治疗效果。医生可以将微生物多样性的改善和菌群组成的变化作为衡量治疗效果的指标，判断是否达到了预期的治疗目标。

3.3 预后评估与干预效果监测

首先，通过分析慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物的多样性，可以评估患者的预后情况。唾液微生物多样性在治疗后能得到恢复和稳定，预示其着对口腔健康的维持和对牙周炎的长期控制。其次，定期监测患者唾液微生物的多样性可以评估治疗干预的效果。治疗后，如果微生物多样性得到了改善且能维持稳定，就表明治疗措施对患者的口腔健康产生了积极影响。

3.4 预防和健康促进

第一，了解牙周健康人唾液微生物多样性的特征，可以帮助制定良好的口腔健康标准。通过与患者进行比较和分析，可以筛选出患牙周炎潜在的高风险个体，并采取相应预防措施，如口腔卫生教育、定期洗牙和口腔检查，早期干预和预防牙周炎。第二，研究牙周健康人唾液微生物的多样性，能为促进健康提供指导。了解健康人群的微生物多样性特征，有助于建立健康的口腔微生态模型，并提供相应的口腔保健建议。

4 结论

慢性牙周炎是一种常见的慢性炎症性疾病，广泛存在于全球各个年龄段的人群中。该疾病的主要特征是牙齿周围的牙龈组织发生持续性的炎症反应，导致牙周组织被破坏和牙槽骨被吸收。慢性牙周炎给患者的口腔健康和全身健康都带来了一系列负面影响。近年来，研究人员开始关注牙周炎患者与牙周健康人唾液微生物多样性的差异，并认为唾液微生物的组成与牙周炎的发生和发展密切相关。因此，本文对慢性牙周炎患者和牙周健康人唾液微生物多样性及其临床意义进行研究，希望可以进一步加深人们的相关认知。