lncRNA SOX2OT在胃癌中的表达及其与预后的关系

寇耀,贾映东,杨宁波

(遂宁市中心医院 胃肠外科,四川 遂宁 629000)

胃癌是常见的消化系统恶性肿瘤,早期症状不明显,50%的患者在确诊时已处于晚期[1]。临床上大约30%的胃癌患者在行根治性胃切除术后会复发,仅靠手术难以治愈,提高胃癌患者的治疗效果是该病研究的重点[2]。因此,探索胃癌发生、发展相关指标,对胃癌个体化治疗及预后预测有重要意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一组重要的转录RNA分子,长度大于200核苷酸,已有研究证实大量lncRNAs在胃癌等多种肿瘤中表达失调[3]。lncRNA SOX2重叠转录本(lncRNA SOX2 overlapping transcript,lncRNA SOX2OT)是一个位于SOX2基因内含子区域的新型lncRNA,在结直肠癌、食管鳞状细胞癌、骨肉瘤、肺癌、非小细胞癌、肝细胞癌等多种肿瘤中异常表达,并扮演关键角色[4-5]。韩玲等[6]关于卵巢癌的研究结果显示,卵巢癌组织中lncRNA SOX2OT高表达与TNM分期、淋巴结转移以及肿瘤大小有关,而敲除lncRNA SOX2OT后,卵巢癌细胞侵袭受抑制。近期一项研究[7]显示,lncRNA SOX2OT在胶质母细胞瘤中能够促进替莫唑胺耐药性。本研究通过探讨胃癌组织中lncRNA SOX2OT的表达水平,并分析lncRNA SOX2OT与患者预后的关系,以期为胃癌的临床治疗、预后评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2017年1月至2018年4月收治的胃癌患者105例为研究对象,经术后组织病理学证实为原发性胃癌。术中收集组织标本,肿瘤组织在癌中心部位取样,距胃癌组织5 cm外的正常胃黏膜为癌旁组织,所取样本迅速置于液氮中,随后贮存在-80 ℃冰箱。患者年龄≥60岁70例,<60岁35例,男61例,女44例。肿瘤直径于术前7 d行内镜超声造影测量,直径≥5 cm 48例,<5 cm 57例。肿瘤分化程度依据胃癌诊疗规范[8]分为低分化36例,中、高分化69例;肿瘤原发部位为胃底49例,胃体56例; TNM分期[9]Ⅰ～Ⅱ期64例,Ⅲ～Ⅳ期41例;淋巴结转移32例,无转移73例。

纳入标准:(1) 初次诊断为胃癌;(2) 入组前无放疗或化疗史;(3) 临床资料完整;(4) 经胃镜及组织病理学检查确诊;(5) 行胃癌根治术;(6) 患者及其家属自愿参加。排除标准:(1) 合并心脑血管病者;(2) 合并胃肠道梗阻、穿孔者;(3) 器官移植的患者;(4) 胃镜检查禁忌者;(5) 合并其他恶性肿瘤者。本研究经我院伦理委员会批准(批号2016-1209),取得患者及其家属知情同意,并签署知情同意书。

1.2 胃癌组织中lncRNA SOX2OT检测方法

使用总RNA提取试剂(total RNA extraction reagent,Trizol)试剂(货号:12183555,美国英杰Invitrogen公司)提取总RNA,然后使用超微量核酸蛋白分析仪(型号:K5500plus,北京凯奥科技发展有限公司)检测RNA质量,OD260/OD280在1.8至2.0之间的样品可以用于反转录;使用Super-M-MLV反转录试剂盒(货号:PR6502,北京百泰克生物技术有限公司)进行反转录,使用SYBR Green染料(货号:SY1020,北京索莱宝科技有限公司)在实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)仪(型号:Exicycler 96,韩国BIONEER公司)采集lncRNA SOX2OT反应信号。引物均由上海生工生物公司合成,引物序列见表1。以GAPDH为内参,使用2-ΔΔCt法计算lncRNA SOX2OT相对表达量。

表1 引物序列Tab 1 Primer sequences

1.3 随访

患者出院后采用电话、入院复查方式随访,准确记录患者生存情况,共随访3年,截止于2021年5月。

1.4 统计学处理

2 结 果

2.1 lncRNA SOX2OT在胃癌组织中的表达

胃癌组织lncRNA SOX2OT的表达水平为3.49±0.57,显著高于癌旁组织的表达水平(1.16±0.32),差异有统计学意义(t=36.524,P<0.001)。

2.2 lncRNA SOX2OT表达水平与胃癌患者临床特征的关系

以癌组织lncRNA SOX2OT表达水平的均数3.49为界限,将患者分为lncRNA SOX2OT高表达组(56例)及lncRNA SOX2OT低表达组(49例)。lncRNA SOX2OT高表达组与lncRNA SOX2OT低表达组间胃癌患者年龄、性别、饮酒比例、肿瘤位置、吸烟比例相比,差异无统计学意义(P>0.05);lncRNA SOX2OT高表达组肿瘤直径≥5 cm、低分化胃癌、Ⅲ～Ⅳ期、淋巴结转移比例显著高于lncRNA SOX2OT低表达组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 lncRNA SOX2OT水平与患者临床特征关系 例Tab 2 Relationship between lncRNA SOX2OT level and clinical characteristics of patients cases

2.3 胃癌组织中lncRNA SOX2OT表达水平与患者预后的关系

所有胃癌患者术后随访3年,105例患者中生存68例,死亡37例,总生存率64.76%。Kaplan-Meier显示,lncRNA SOX2OT高表达组的3年生存率为55.35%,低于lncRNA SOX2OT低表达组的75.51%(Log rankχ2=4.451,P=0.031)。见图1。

图1 lncRNA SOX2OT水平与患者生存时间关系Fig 1 Relationship between lncRNA SOX2OT level and survival time of patients

2.4 胃癌患者预后的单因素及多因素Cox分析

以年龄(≥60岁=1、<60岁=0)、吸烟史(是=1、否=0)、性别(女性=1、男性=0)、肿瘤直径(≥5 cm=1、<5 cm=0)、饮酒史(是=1、否=0)、分化程度(低分化=1、中/高分化=0)、肿瘤位置(胃体=1、胃底=0)、淋巴结转移(有=1、无=0)、TNM分期(Ⅲ～Ⅳ期=1、Ⅰ～Ⅱ期=0)及lncRNA SOX2OT表达(高表达=1、低表达=0)为自变量,以预后为因变量(死亡=1、生存=0),纳入单因素Cox分析,结果显示,分化程度、TNM分期、lncRNA SOX2OT表达与胃癌患者预后相关(P<0.05),见表3。多因素Cox回归分析结果显示,分化程度为低分化、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、lncRNA SOX2OT高表达是影响胃癌患者预后的危险因素(P<0.05),见表4。

表3 影响胃癌患者预后的单因素Cox分析Tab 3 Single factor Cox analysis affecting prognosis of gastric cancer patients

表4 影响胃癌患者预后的多因素Cox分析Tab 4 Multivariate Cox analysis of prognosis of gastric cancer patients

3 讨 论

全球癌症统计数据显示,胃癌是全球第二大致死疾病,该类癌症与1/12的死亡病例相关[10]。由于胃癌发病早期症状不明显,加之患者缺乏早诊早治意识,导致初诊即处于中晚期的病例数仍处于较高比例[11-12]。D2根治术后辅助化疗是亚洲晚期胃癌的传统治疗方式,该术式的5年相对生存率仅为17.90%～54.20%[13]。近年来,胃癌的治疗方式中引入了新辅助化疗,患者在术前接受化疗后肿瘤分期明显降低,使肿瘤完全切除率增加,但是也存在着过度治疗以及延误手术的风险[14]。既往研究显示,lncRNA与胃癌的病理过程及预后效果密切相关[15]。因此,探索胃癌发病相关lncRNA及其临床意义,能够为病理机制解析、预后判定提供新的角度。

lncRNA SOX2OT是一种位于人类染色体3q26.3位点的新型lncRNA,在多种疾病中异常表达,在调节多种肿瘤行为中起重要作用,例如在膀胱癌、胰腺癌、结直肠癌中高表达,促进肿瘤细胞增殖、分化、迁移,发挥致癌作用[16]。lncRNA SOX2OT还与肿瘤耐药性有关。郭飘婷等[17]有关大肠癌的研究发现,lncRNA SOX2OT通过调节miR-30a的表达,间接上调SOX2表达水平,最终导致HCT-116大肠癌细胞耐药性增强。但lncRNA SOX2OT在胃癌中的研究较少,鉴于lncRNA SOX2OT在肿瘤中的重要作用,有必要探究胃癌组织中lncRNA SOX2OT表达与患者临床病理特征及预后的关系,以期为胃癌的临床治疗提供参考。本研究结果显示,胃癌组织中lncRNA SOX2OT表达水平高于癌旁组织,说明lncRNA SOX2OT可能参与胃癌发生发展。Feng等[16]的研究发现,lncRNA SOX2OT在结直肠癌中上调表达,并且lncRNA SOX2OT的表达与TNM分期相关。另有研究显示,lncRNA SOX2OT表达与卵巢癌肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移有关[18]。本研究以胃癌组织中lncRNA SOX2OT表达水平均数为界限将其分为lncRNA SOX2OT高表达组与低表达组,探究lncRNA SOX2OT表达与胃癌临床病理特征关系。结果显示,lncRNA SOX2OT的高表达与TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤直径、淋巴结转移有关,提示lncRNA SOX2OT参与了胃癌的侵袭进展过程,进一步证实了lncRNA SOX2OT在胃癌发展过程中扮演的促癌角色。在肺鳞癌中lncRNA SOX2OT表达水平较肺腺癌细胞中上调,高表达lncRNA SOX2OT的患者生存时间较短,发挥致癌作用[19]。另有研究[20]显示,膀胱癌中lncRNA SOX2OT高表达与肿瘤分期及患者不良预后呈正相关,抑制lncRNA SOX2OT的表达会延缓肿瘤生长,减少体内转移。本研究采用Kaplan-Meier法分析了lncRNA SOX2OT表达与胃癌患者预后的关系,发现lncRNA SOX2OT高表达组3年生存率(55.35%)低于低表达组(75.51%),说明lncRNA SOX2OT水平可能一定程度反映胃癌患者生存情况,其表达水平较高者预后较差。本研究Cox分析结果显示,Ⅲ～Ⅳ期、低分化胃癌、lncRNA SOX2OT高表达是影响患者预后的危险因素。然而,lncRNA SOX2OT调控肿瘤进展中的分子机制非常复杂,有研究发现lncRNA SOX2OT通过靶向微小RNA(miRNA)参与人各种肿瘤的发生。来自癌细胞外泌体的lncRNA SOX2OT,可以靶向miR-194-5p介导的RAC1信号通路,促进非小细胞肺癌[5]。提示lncRNA SOX2OT可能通过调控miRNA或mRNA表达,参与胃癌发生、发展过程,lncRNA SOX2OT在调控胃癌进展中至关重要,并可能是胃癌治疗最有潜能的靶点。

综上所述,lncRNA SOX2OT在胃癌组织中表达水平升高,并与淋巴结转移、TNM分期、肿瘤直径、肿瘤分化程度以及预后有关,lncRNA SOX2OT高表达患者3年生存率较低,且lncRNA SOX2OT高表达是影响胃癌预后的危险因素。然而,本研究纳入的样本量有限,易产生偏差,从而影响研究结果,下一步将扩大入组例数,进一步阐明lncRNA SOX2OT对胃癌患者预后的影响,并借助细胞或动物模型探究lncRNA SOX2OT参与胃癌发展的调控机制。