卵巢癌组织hsa-miR-28表达及其临床意义

李琼英,郭玲,王恺彬

(1.宝鸡市中心医院 妇科,陕西 宝鸡 721000; 2.咸阳市第一人民医院 病理科, 陕西 咸阳 712000)

卵巢癌是女性常见的一种恶性肿瘤,其发病率在全国女性生殖系统恶性肿瘤中占据第3位[1]。由于卵巢癌早期常无典型症状,且恶性程度相对较高,因此符合手术指征的患者及时接受根治术是延长其生存时间的有效手段,但患者术后复发情况存在较大差异,一旦复发将严重影响其生命安全和生活质量[2-3]。因此,研究卵巢癌根治术后复发相关影响因素具有重要意义。微小核糖核酸(miRNAs)作为一种微小内源性的非编码RNA分子,可通过转录或翻译靶标mRNA来调节一个或多个靶基因的表达,继而影响生物学过程[4]。近年来研究[5]发现,miRNA可作为癌基因或抑癌基因在癌症发生发展过程中发挥重要作用,可为恶性肿瘤的治疗提供一个较好的治疗靶点。有研究[6]报道,miR-28-3p在肾癌、肝癌等肿瘤中均发挥一定作用,且与肿瘤的远处转移及侵袭密切相关。另有试验[7]发现,miR-28-5p在体外通过抑制N4BP1促进卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的进程,抑制细胞凋亡。但目前关于内含子型微小核糖核酸-28(hsa-miR-28)在卵巢癌中的表达水平及其是否与卵巢癌临床病理特征和预后有关国内外却鲜有报道。因此,本研究检测卵巢癌组织hsa-miR-28表达水平,分析其与临床病理特征及根治术后复发的关系,为临床早期诊断及改善预后提供参考,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

经宝鸡市中心医院伦理委员会批准(批号:201702-005),选取2017年3月至2019年3月宝鸡市中心医院收治的行根治术治疗的138例卵巢癌患者作为卵巢癌组,选取同期行腹腔镜治疗的120例卵巢良性病变患者作为对照组。纳入标准:(1) 卵巢癌组均符合《2016 NCCN卵巢癌临床实践指南(第1版)》[8]卵巢癌诊断标准,均行卵巢癌根治术(全子宫+双侧附件切除)且经术后病理学检查证实为卵巢癌,均为首次发病,术前均未接受过放疗、化疗等治疗;(2) 对照组均行腹腔镜手术且经术后病理学检查证实为良性卵巢病变,术前未接受相关治疗;(3) 患者均对本研究知情同意。排除标准:(1) 合并心、肝、肾等重要脏器功能障碍者;(2) 合并其它部位肿瘤者;(3) 合并其它自身免疫性疾病、凝血功能障碍者;(4) 合并精神疾病或认知功能障碍者;(5) 因各种原因不能全程参与本研究者。卵巢癌组患者年龄35～75岁,平均(53.78±10.42)岁,绝经97例;对照组年龄32～71岁,平均(52.85±9.72)岁,绝经81例,两组具有可比性(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 hsa-miR-28水平检测 收集卵巢癌组和对照组手术切除的卵巢组织各100 mg,放置于液氮罐中冻存,采用Trizol试剂法参照说明书提取总RNA。采用红荣微(上海)生物工程技术有限公司提供的反转录试剂盒(货号:RR036A),严格按照说明书对提取的总RNA进行反转录,将RNA反转录合成cRNA后进行聚合酶链反应,反应条件:预反应(95 ℃,9 min)-变性(95 ℃,10 s)-退火(60 ℃,15 s)-延伸(72 ℃,3 min),共40个循环。hsa-miR-28引物序列:上游5′-CGCGCACTAGATTGTGAGCT-3′,下游5′-CGCGCACTAGATTGTGAGCT-3′;内参U6引物序列:上游5′-CGACAAGACGATCCGGGTAAA-3′,下游5′-GGTTGAGGAGTGGGTCGAAG-3′。采用2-ΔΔCt计算hsa-miR-28表达量。

1.2.2 资料收集及随访 收集卵巢癌组患者年龄、绝经状态、组织学类型、分化程度、国际妇产科联合会(FIGO)分期、肿瘤直径、卵巢组织hsa-miR-28表达量、术后化疗等临床资料。出院后通过电话、门诊复诊方式对患者进行3年随访,记录患者复发情况,根据复发情况将患者分为复发组和未复发组。复发判断标准[9]:(1) 卵巢癌肿瘤标志物糖类抗原125持续升高;(2) 影像学辅助检查提示有肿块;(3) 出现排除其它原因的腹水。只要符合任何1项及以上,则判断为卵巢癌复发。

1.3 统计学处理

2 结 果

2.1 卵巢癌组与对照组卵巢组织hsa-miR-28表达水平的比较

卵巢癌组卵巢组织hsa-miR-28表达水平低于对照组(2.24±0.62vs.4.12±0.73,t=22.368,P<0.001)。

2.2 不同病理特征卵巢癌患者卵巢组织hsa-miR-28表达水平的比较

不同组织学类型、肿瘤大小患者卵巢组织hsa-miR-28表达差异无统计学意义(P>0.05),低分化、FIGO分期Ⅲ期卵巢癌患者hsa-miR-28表达水平低于高/中分化、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05),见表1。

表1 不同病理特征卵巢癌患者卵巢组织hsa-miR-28表达水平比较

2.3 卵巢癌复发情况及复发与未复发组卵巢组织hsa-miR-28表达水平比较

随访3年期间患者无失访,138例卵巢癌患者中有49例复发,其中有9例死亡,余89例均未复发,复发率为35.51%(49/138)。复发组卵巢组织hsa-miR-28表达水平低于未复发组(1.43±0.41vs.2.66±0.65,t=11.950,P<0.001)。

2.4 卵巢癌根治术后复发的影响因素分析

复发组年龄、绝经状态、组织学类型及最大肿瘤直径与未复发组相比差异均无统计学意义(P>0.05),复发组低分化、FIGO分期Ⅲ期占比均高于未复发组(P<0.05),复发组术后化疗患者占比及hsa-miR-28表达水平低于未复发组(P<0.05),见表2。

表2 卵巢癌根治术后复发影响因素的单因素分析 例

将上表统计检验P<0.10的变量作为自变量、术后3年内有无复发作为因变量纳入到Cox回归模型中,变量赋值如下:分化程度高/中分化=0,低分化=1;FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期=0,Ⅲ期=1;术后化疗有=0,无=1;hsa-miR-28表达水平为实测值。分析结果显示,hsa-miR-28低表达、低分化、FIGO分期Ⅲ期均是卵巢癌根治术后复发的危险因素,术后化疗是其保护因素(P<0.05),见表3。

表3 卵巢癌根治术后复发影响因素的Cox多因素分析

3 讨 论

卵巢癌的发病机制较为复杂,临床上早期症状不典型,随着病情的发展,晚期可出现下腹不适、腹胀、食欲下降等消化道症状。目前临床上主要的治疗方式为手术切除、化疗及放疗,总体预后较差[10-11]。招锦兰等[12]报道早期上皮性卵巢癌术后5年复发率为57.78%,本研究中卵巢癌患者根治术后3年复发率为35.51%,均可证实卵巢癌术后复发率较高。因此,探索与卵巢癌相关的癌基因分子有助于进一步了解疾病,对早期诊断及治疗具有重要意义。

本研究结果显示,卵巢癌患者卵巢组织hsa-miR-28表达水平低于卵巢良性病变组织,且低分化、FIGO分期Ⅲ期卵巢癌患者hsa-miR-28表达水平均低于中/高分化、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期的患者,说明hsa-miR-28水平在卵巢癌患者中降低,提示其表达水平与卵巢癌发生发展密切关联。hsa-miR-28是近年来新发现的一种miRNA,其作为内含子型miRNA,定位于人的3号染色体LIM区域LPP(Lipoma Preferred Partner)基因,其表达变化可影响下游靶基因及相关信号通路的功能变化[13]。有研究显示,miR-28在肾癌、肝癌、结直肠癌、胃癌等多种癌症中呈现低表达,且大量研究表明miR-28在促进细胞凋亡、抑制增殖和转移等生理过程中具有广泛的调控作用[14-15]。袁海川等[16]研究显示,在前列腺癌患者血清样本中miR-28的表达量显著降低,并与前列腺癌的组织学分级和病理分期密切相关,其在前列腺癌早期诊断中可作为生物标志物。本研究结果还发现,卵巢癌根治术后3年内复发患者hsa-miR-28表达水平比未复发患者低,与李淑军等[17]研究报道的一致,均提示miR-28低表达可增加癌症术后复发风险。miR-28可抑制原癌基因HOVB3的表达,将细胞周期阻止在G1期,从而抑制癌细胞增殖转移[18]。另有研究[19]显示,miR-28-5p可通过升高靶基因 BECN1的表达来促进癌细胞自噬,抑制癌细胞增殖,从而发挥抗肿瘤作用。故hsa-miR-28在卵巢癌根治术后低表达可减弱对癌细胞增殖迁移的抑制能力,导致术后残留的微小肿瘤灶迅速增殖转移,增加局部复发风险。本研究进一步通过Cox分析证实了hsa-miR-28表达水平降低可能是卵巢癌根治术后复发的危险因素。

此外,本研究还发现低分化、FIGO分期Ⅲ期是卵巢癌根治术后复发的危险因素,术后化疗是其保护因素,与既往报道[20-21]相符。分析原因为:低分化癌组织扩散性更强,易较早发生转移,且不易被发现,从而使患者根治术后复发率升高;分期高的肿瘤往往较大,恶化程度较严重,临床上局部侵犯明显,癌细胞更易侵入血管和淋巴组织,且局部侵犯增加了手术难度及局部病变残留的风险,因而增加了术后复发的风险;化疗是卵巢癌术后最重要的辅助治疗手段,能够降低肿瘤负荷,清除残余癌病灶,降低术后复发风险。

本研究发现hsa-miR-28在卵巢癌组织中呈低表达,其与卵巢癌临床病理特征及根治术后复发密切相关,hsa-miR-28低表达、低分化、FIGO分期Ⅲ期均是卵巢癌根治术后复发的危险因素,提示hsa-miR-28表达可能为临床评估卵巢癌分化程度、临床分期、预后提供一定的指导作用。但本研究仍存在一定的局限性,样本量选取较小,hsa-miR-28在卵巢癌中具体作用机制、对疾病进展及预后的评估价值也需进一步深入探讨。