Sysmex XS-1000i血细胞分析仪所用试剂的研发与应用

孙 豪,董晓蒙 ,王淑龙

(1临沂市中医医院,山东 临沂 276000;2山东医学高等专科学校;3山东省疾病预防控制中心)

血细胞分析仪是临床检验科常用仪器之一,在我国各级医院得到普及应用,进口Sysmex品牌约占45%,其所用试剂也需进口,不仅周期长且价格高。为此,笔者查阅相关文献[1-2],针对常用的Sysmex XS-1000i型五分类血细胞分析仪所用试剂进行研究,通过配方设计、反复试验,获得了满意结果。

1 材料与方法

1.1仪器设备与试剂 仪器设备:Sysmex XS-1000i型血细胞分析仪、国产精密pH酸度计、梅特勒电导率仪、国产冰点渗透压计。Sysmex原装试剂:稀释液,SLS、4DL及4DS溶血剂。自研试剂:稀释液(NaCl、KCl、硼砂、硼酸、EDTAK2、液体防腐剂、稳定剂等)、SLS溶血剂(表面活性剂、非离子表面活性剂、稳定剂等)、4DS溶血剂(荧光染料、甲醇等)、4DL溶血剂(表面活性剂、盐酸等)。

1.2方法

1.2.1配方设计与试剂配制 以Sysmex原装试剂的性能指标pH、电导率、渗透压等为依据设计配方,配制自研试剂(稀释液,SLS、4DL及4DS溶血剂),经对比分析选出最佳配方。

1.2.2技术要求 空白值:WBC≤0.3×109/L、RBC≤0.03×1012/L、HGB≤1 g/L、PLT≤10×109/L。定值质控血测定HGB、WBC总数及WBC分类等参数均在允许范围之内。生产工艺技术要求:(1)流程。去离子水-加化学试剂-溶解-混匀-检验-抽滤-分装-检验-包装-成品。(2)条件控制。①去离子水要求10MQ-CM以上;②所用化学试剂均为分析纯以上,并严格按配方配制,溶解后无浑浊、无沉淀;③抽滤要用0.10 μm滤芯;④严格按照规程进行质量检测;⑤包装要牢固可靠,保证长途运输。

2 结果

2.1两种试剂的主要技术指标 两种试剂各项指标基本一致。见表1。

表1 两种试剂的主要指标

2.2两种试剂应用效果比较 随机取门诊病人80份血液标本进行对比测定。两种试剂各测试参数比较无统计学意义。见表2。

表2 两种试剂的应用效果比较

2.3精密度测定 取1份血液标本,用自研与原装试剂分别重复测定80次,计算变异系数(CV值),结果见表3。

表3 两种试剂精密度试验结果比较(n=80)

2.4回收试验 用两种试剂分别对Hb、WBC作高、中、低值三种浓度的回收试验,平均回收率为98%以上。

2.5准确度试验 用自研试剂测定质控血,结果WBC、HGB、%NEU、RBC、PLT、HCT、MCV、MCH、MCHC等均在允许范围内。

2.6吸收光谱测定 吸取1份血各20 μL,分别加入自研和原装溶血剂,用分光光度计,波长450～700 nm行吸光度扫描,两条吸收曲线基本一致,在530～542 nm间有明显的吸收峰。

2.7稳定性试验 同批产品在室温存放12个月后各项技术指标与当时测定结果相比无明显差别。随机取病人血标本20例,用原装试剂与有效期12个月的试剂进行对比测定,结果无显著性差别。另外,用EDTAK2防凝血液标本立即测定与放置4 h测定,结果RBC、PLT及其有关参数无明显变化,WBC总数及分类亦无变化。

3 讨论

使用Sysmex XS 1000i细胞分析仪检测具有样品需求量少、速度快、准确度及检测效率高等优点。但由于原装试剂亦需进口,价格高、进货周期长。因此,急需寻求替代产品。

本文所研发试剂成功解决了上述缺点,经实验对比及实际应用,效果和原装试剂完全相同,且具有以下优点:①试剂配制简便,成本低廉,经济实用,应用前景广阔;②溶血剂不含剧毒的氰化物,且溶血迅速,长时间稳定,WBC分类效果好,测定完后的废液不必进行特殊处理,安全、可靠;③稀释液含有悬浮剂、稳定剂,可使细胞处于良好的悬浮状态,血标本放置4 h仍能测定,对RBC有关的各测定参数、WBC及分类无影响;④国内同类产品中,五分类WBC分布区间过小,分类界限不明显,不能体现真正五分类结果;本文研发的溶血剂采用了独特的表面活性剂和非离子表面活性剂、聚甲烯次甲基荧光染料等,五分类白细胞群散射图明显分开,真正体现出五分类结果,表明已达到国内领先水平。