顶空-气相色谱法测定桂利嗪原料中4种有机溶剂的研究

敦 康，郭永辉，付 莉，柴倩雯，隋思强，张俊朋，王若琳

（1.河北省药品审评中心，河北 石家庄 050091 ；2.河北省药品医疗器械检验研究院，河北 石家庄 050071；3.河北省药品职业化检查员总队，河北 石家庄 050091；4.河南省食品药品检验所，河南 郑州 4500083；5.河北科技大学材料科学与工程学院，河北省柔性功能材料重点实验室，河北 石家庄 050018）

桂利嗪是一种钙通道拮抗剂，能通过阻止血管平滑肌钙内流使血管扩张，从而改善脑部供血。目前，桂利嗪多用于治疗缺血性脑血管病，包括脑血栓形成、脑动脉硬化等[1-7]。桂利嗪现行标准《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）2020 年版二部桂利嗪品种项下，未对桂利嗪原料药中的有机溶剂进行质量控制，无法保证其安全性和有效性[8]。目前，关于桂利嗪质量控制的研究文献及报道较少。我们采用气-质联用的方法检测到桂利嗪原料药中含有有机溶剂异丙醇，同时结合桂利嗪的合成工艺中使用到甲醇、乙醇、丙酮作为溶剂[9-15]，这些有机溶剂残留会对人体健康造成一定危害，因此有必要建立桂利嗪中有机溶剂甲醇、乙醇、丙酮和异丙醇的检测方法，以用于其质量控制，更好地保障患者的用药安全。国外药典未对桂利嗪原料中的有机溶剂进行质量控制，同时未见相关文献对桂利嗪原料中的残留溶剂进行研究。结合目前有机残留溶剂的主要测定方法为顶空-气相色谱法[16-22]，我们根据国际人用药品注册技术协调会（ICH）的指导原则和《中国药典》2020 年版四部气相色谱法及残留溶剂的相关规定，采用顶空-气相色谱法对上述4 种有机溶剂的检测条件进行了研究，现报道如下。

1 仪器与试剂

气相色谱仪：Agilent 7896，美国安捷伦科技公司；XS105 电子天平，瑞士METTLER TOLEDO 公司。甲醇对照品：LiChrosolv，l1057307943；乙醇对照品：国药集团化学试剂有限公司，20190618；丙酮对照品：天津福晨化学试剂有限公司；异丙醇对照品：山东禹王和天下新材料有限公司，2020030601；4 种对照品的纯度均为100%；N,N-二甲基甲酰胺：色谱纯，美国默克公司；试验用水为超纯水；桂利嗪原料药：批号分别为180119061、GL21901001、CIN/11171111-01。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

CP9210-wax（30 m×320 μm×1.8 μm）色谱柱，载气：N2；流速：2 mL/min；分流比：20:1；检测器：FID 检测器；检测器温度：250 ℃；进样口温度：200 ℃；进样方式：顶空；顶空平衡时间：30 min ；顶空加热温度：100 ℃；定量环温度：105 ℃；传输线温度：110 ℃；程序升温：起始温度为35 ℃，维持5 min，以每分钟3 ℃的速率升温至50 ℃，维持2 min，再以每分钟20 ℃的速率升温至200 ℃，维持7 min。

2.2 溶液的配置

2.2.1 供试品溶液 取桂利嗪原料药约0.2 g，精密称定，置于顶空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，振摇使溶解，压盖密封，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液 取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇各适量，精密称定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀释制成每1 mL 约含甲醇1.5 μg、乙醇66 μg、丙酮4 μg、异丙醇24 μg 的混合溶液，精密量取5 mL，置于顶空瓶中，压盖密封，作为对照品溶液。

2.2.3 空白溶液 精密量取N,N- 二甲基甲酰胺5 mL置于顶空瓶中，压盖密封，作为空白溶液。

2.3 专属性试验

精密量取对照品溶液5 mL，置于顶空瓶中，密封。进样，记录气相色谱图，色谱图见图1。

精密量取N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，置于顶空瓶中，密封。进样，记录气相色谱图，色谱图见图2。与对照品溶液相比，在甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇出峰位置无FID 响应。说明本色谱条件下各峰之间能够实现良好分离，该方法专属性好，能够用于有机溶剂的检测。

图2 N,N- 二甲基甲酰胺溶剂气相色谱图

2.4 重复性试验

取批号180119061 和CIN/11171111-01 样品各约0.2 g，精密称定，置于顶空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，振摇使溶解，密封。每个样品平行制备6 份，记录气相色谱图，按外标法以峰面积计算。结果见表1。结果表明该试验的重复性良好。

表1 重复性结果

2.5 线性关系试验

取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇各适量，精密称定，用N,N-二甲基甲酰胺定量逐级稀释制成标准曲线工作溶液，分别精密量取5 mL，置于顶空瓶中，进样，记录气相色谱图。以浓度为Y 轴，峰面积为X 轴，拟合线性方程。结果见表2。结果表明甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇的浓度在0.2 ～96 μg/mL 范围内与峰面积呈良好线性关系。

表2 线性及范围测定结果

2.6 检出限与定量限

取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇各适量，精密称定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀释，测定检出限与定量限，结果见表3。

表3 检出限与定量限测定结果

2.7 精密度试验

取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇各适量，精密称定，用N,N- 二甲基甲酰胺定量稀释制成每1 mL 约含甲醇1.5 μg、乙醇66 μg、丙酮4 μg、异丙醇24 μg的混合溶液，精密量取5 mL，置于顶空瓶中，密封。平行制备6 份，记录气相色谱图。结果见表4。结果表明该方法的精密度良好。

表4 精密度测定结果

2.8 加标回收试验

取甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇各适量，精密称定，用N，N-二甲基甲酰胺稀释成低、中、高三个浓度的混合溶液。取桂利嗪样品（批号180119061）约0.1 g，精密称定，精密加混合溶液5 mL，密封。每个浓度平行制备3 份。同时配制混合对照溶液，记录气相色谱图，按外标法计算。结果见表5。结果表明甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇四种物质的回收率良好，表明该方法测定桂利嗪中有机溶剂的准确度高。

表5 回收率测定结果

续表

2.9 供试品测定

取桂利嗪原料药约0.2 g，精密称定，置于顶空瓶中，精密加N,N- 二甲基甲酰胺5 mL，密封，振摇使溶解，按上述色谱条件测定溶剂残留，测定结果见表6。参照《中国药典》2020 年版四部通则0861 残留溶剂测定法中的药品限度，甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇限度分别为0.3%、0.5%、0.5%、0.5%。3 批原料药中残留溶剂远低于限度要求。

表6 残留溶剂测定结果（%）

3 讨论

3.1 供试品测定结果

在供试品测定中，我们使用了3 个厂家的产品作为供试品，3 个厂家分别使用了3 种不同的生产工艺。工艺一使用了甲醇、乙醇和丙酮作为溶剂，工艺二和工艺三分别使用了乙醇和异丙醇作为溶剂。因此我们最终将甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇作为残留溶剂进行检测，建立了桂利嗪中残留溶剂甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇的检测方法。

3.2 色谱柱的选择

我们选择了非极性、弱极性、中等极性和强极性四种不同极性的色谱柱进行了考察，根据考察结果选择聚乙二醇（PEG-20M）（或极性相近）为固定液的毛细管柱，使各组分按照极性由小到大的顺序出峰，这样极性相差较大的甲醇和丙酮就能够实现良好的分离，因此本试验选择CP9210-wax 作为色谱柱。

3.3 升温程序的选择

根据文献和我们的实践经验判断，如果使用恒柱温气相色谱分析法，结果会使低沸点组分很快流出，峰形窄且易重叠，高沸点组分流出很慢，峰形扁平且拖尾，结果不利于定量测定，拖延分析时间。因此本研究采用程序升温气相色谱法，为了使甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇达到良好的分离，利用其沸点不同的特性，设定升温程序，改变初始温度和升温速率来实现良好的分离。

3.4 顶空条件的选择

为了使待测物能够气化充分，本研究选择了顶空进样法，通过改变顶空瓶的平衡时间和温度使待测物充分气化。平衡温度分别设定为80、100、120 ℃，平衡时间分别设定为20、30、40 min，根据交叉试验结果选择100 ℃为平衡温度，30 min 为平衡时间，待测物能够在顶空瓶中达到平衡，测定结果准确稳定。

综上所述，本试验建立的顶空- 气相色谱法测定桂利嗪原料药中4 种有机溶剂的准确度高，操作简单，可以有效控制产品质量，为相关质量标准的制定提供了参考，为企业提高药品质量提供了方法和参考。