MACC1、c-met及ERCC1的表达在结直肠癌病理评估中的应用价值研究

曹 明，怀建国，杨小苗

（芜湖市第一人民医院病理科，安徽 芜湖 241000）

结直肠癌现已成为我国常见的恶性肿瘤之一。近年来随着国人生活水平的提高以及饮食习惯的改变，结直肠癌的发病率逐年升高。现阶段，结直肠癌最主要的治疗方式仍然是外科根治性手术辅以术后化疗。约半数的结直肠癌患者在确诊时病情即已处于晚期，后期的随访表明有超过一半的患者因肿瘤复发或远处广泛转移而死亡[1]。结肠癌转移相关基因1（MACC1）是2009 年由美国学者Stein 等研究发现的，该基因与结肠癌的发生及转移密切相关[2]。随后的研究发现MACC1 与肝细胞生长因子受体（c-met）的表达呈正相关[3]，二者参与了结肠癌的发生及发展。传统结直肠癌术后病理评估大多是基于病理组织学，具有相对的主观性。本研究对结直肠癌根治标本癌组织及癌旁组织进行MACC1 和c-met 表达检测，以了解二者在结直肠癌术后标本病理评估中的应用价值，进而丰富结直肠癌术后病理评估内容，为临床后续治疗提供一定的参考。核苷酸切除修复交叉互补基因1（ERCC1）是核苷酸切除修复途径的重要成员，抑制ERCC1 的表达可有效抑制恶性肿瘤的增殖[4]。一些研究已表明ERCC1 的表达是影响多种恶性肿瘤患者预后的重要因素[5-7]。然而，结直肠癌中ERCC1 的表达与患者预后之间的关系，学者之间尚存在争议。有研究发现，结直肠癌ERCC1 高表达提示患者预后较差，因其影响化疗效果[8]。同时，又有一些研究认为ERCC1 的表达情况与结直肠癌患者的预后无关[9-10]。本研究对结直肠癌根治标本进行癌组织ERCC1 表达检测，评估不同临床病理特征条件下ERCC1 的表达情况，为其在化疗评估中的应用提供一定的参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

分析2019 年至2021 年在我院行结直肠癌根治性手术治疗的103 例患者的临床病理资料，其中男60 例，女43 例；年龄26 ～87 岁。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学（免疫组化）法检测癌组织中MACC1、c-met、ERCC1 及癌旁组织中MACC1、c-met的表达 103 例结直肠癌患者行根治性手术治疗后，取每例患者癌组织2 块，癌旁组织（以手术标本吻合口为癌旁组织）1 块。使用10% 中性福尔马林固定标本，随后进行常规处理，并行免疫组化染色，染色采用二步法。MACC1 抗体、c-met 抗体由美国Bioss 公司提供，抗体稀释浓度1:400 ；ERCC1 抗体由福建迈新公司提供，克隆号8F1，为即用型抗体；二步法Elivision Plus 免疫组化试剂盒、DBA 试剂盒均由福建迈新公司提供。

1.2.2 MACC1、c-met、ERCC1 的免疫组化染色结果判读 结果判读由2 名具备高级职称的病理科医师进行，每张切片随机选择10 个视野，单个视野计数100个肿瘤细胞，计算染色阳性肿瘤细胞百分比。MACC1阳性大部分表达于肿瘤细胞胞质，少部分表达于肿瘤细胞胞核；c-met 阳性表达于细胞膜、细胞质；ERCC1 阳性则表达于细胞核。肿瘤细胞染色百分比评分：肿瘤细胞无表达为0 分，阳性肿瘤细胞百分比≤10% 为1 分，阳性肿瘤细胞百分比为11% ～50%为2 分，阳性肿瘤细胞百分比为51% ～75% 为3 分，阳性肿瘤细胞百分比＞75% 为4 分。肿瘤细胞免疫组化染色强度评分：无着色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。最后计算上述两项评分的乘积，MACC1、c-met 免疫组化结果判读，如乘积＞3 分为阳性，乘积≤3 分则为阴性[11]；ERCC1免疫组化结果判读，乘积＞2 分为阳性，乘积≤2 分则为阴性[12]。MACC1、c-met、ERCC1 染色阳性结果如图1-3 所示。

图1 MACC1 阳性（×100，表达于肿瘤细胞胞质）

图2 c-met 阳性（×100，表达于肿瘤细胞胞质）

图3 ERCC1 阳性（×100，表达于肿瘤细胞胞核）

1.3 统计学方法

选用SPSS 19.0 统计学软件对数据进行处理，计数资料以率（%）表示，组间比较行χ² 检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同组织中MACC1 及c-met 阳性表达率的比较

结直肠癌组织中MACC1、c-met 的阳性表达率均明显高于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.0001）。详见表1。

表1 不同组织中MACC1 及c-met 阳性表达率的比较[例（%）]

2.2 不同临床病理特征患者结直肠癌组织中MACC1及c-met 阳性表达率的比较

不同性别、年龄患者结直肠癌组织中MACC1、c-met 的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同病理大体类型、肿瘤T 分期、分化程度、淋巴结转移情况患者结直肠癌组织中MACC1、c-met 的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表2。

表2 不同临床病理特征患者结直肠癌组织中MACC1 及c-met 阳性表达率的比较[例（%）]

2.3 不同临床病理特征患者结直肠癌组织中ERCC1阳性表达率的比较

不同性别、年龄、病理大体类型、肿瘤T 分期患者结直肠癌组织中ERCC1 的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同分化程度、淋巴结转移情况患者结直肠癌组织中ERCC1 的阳性表达率比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表3。

表3 不同临床病理特征患者结直肠癌组织中ERCC1 阳性表达率的比较[例（%）]

3 讨论

MACC1、c-met 通过参与调控肝细胞生长因子（HGF）/c-met 信号通路，促进结直肠癌等恶性肿瘤的发生、发展[13]。本研究依据上述理论基础，通过检测结直肠癌患者癌组织中MACC1、c-met 的表达情况，进而分析MACC1、c-met 的表达与不同临床病理特征之间的关系，以了解MACC1、c-met 免疫组化检测在结直肠癌患者术后病理评估中的应用价值。本研究发现，癌组织中MACC1、c-met 的阳性表达率远高于癌旁组织，该结果与过往其他研究[14]基本一致。MACC1 基因包含7 个外显因子与6 个内含因子，共有2559 个核苷酸，位于人类7 号染色体（7p21.1）内。MACC1 的特殊功能区域中，ZU5、SH3 区域可介导特定蛋白质的产生，另一区域则可引导细胞凋亡。当MACC1 与c-met 激活HGF/c-met 信号通路后，可促进结直肠癌等恶性肿瘤的发生、发展[15]。因而，结直肠癌组织中MACC1、c-met 呈高表达状态。肿瘤T 分期、肿瘤分化程度及淋巴结转移情况是过往评估结直肠癌术后病理特征的核心内容，也是传统病理评估的重要组成部分。但上述病理评估均依据病理形态学，具有一定的主观性。过往大量的研究提示，肿瘤T 分期较晚、肿瘤分化程度低及出现淋巴结转移的患者预后较差。HGF/c-met 信号传导通路在正常情况下，参与胚胎发育以及组织修复等正常生理过程，当MACC1 与c-met 出现异常结合后，可导致HGF/c-met信号通路激活，促进结直肠癌的发生、发展[15]。本研究发现肿瘤T 分期为T3或T4、肿瘤分化程度低、出现淋巴结转移的患者癌组织中MACC1、c-met 的阳性表达率均明显升高，提示MACC1、c-met 既参与了结直肠癌的发生，又促进了结直肠癌的发展，进一步表明MACC1、c-met 在结直肠癌等恶性肿瘤发生、发展中起到了较为关键的作用，与先前的研究结果[16]较为一致。同时，本研究还发现溃疡型结直肠癌患者癌组织中MACC1、c-met 的阳性表达率高于隆起型结直肠癌患者，而过往研究未提示这一现象。该现象可能对解释溃疡型与隆起型结直肠癌患者的预后差异具有一定的价值，上述改变有待进一步深入研究及探讨。

现阶段，FOLFOX 方案为结直肠癌术后标准的化疗方案之一，有效率较高，一般超过40%[17]。铂类药物通过使DNA 螺旋形成交联物，促使肿瘤细胞凋亡[18]。过往的研究显示，ERCC1 表达在非小细胞肺癌[19]等恶性肿瘤患者中有预后评估价值，但其在结直肠癌患者预后评估中的价值仍有争议[8-10]。进一步探寻ERCC1 在结直肠癌患者预后评估中的作用，具有一定的临床价值。就理论而言，ERCC1 高表达患者的肿瘤细胞具有较高的DNA 修复能力，因此可使铂类药物的抗癌作用降低，进而导致ERCC1 高表达的患者预后不良。一项包含2076 例患者的研究表明，ERCC1 高表达的患者具有较短的无进展生存期和总生存期[8]。本研究发现，肿瘤分化程度低、出现淋巴结转移的患者，其癌组织中ERCC1 的表达较高。在传统病理评估中，肿瘤分化程度低、出现淋巴结转移等现象，均提示不良预后，而ERCC1 的高表达可能进一步加剧这种不良预后，这与传统病理评估是相佐证的。同时，免疫组化检测结果具有相对的客观性，因而ERCC1 在结直肠癌的术后病理评估中具有潜在的应用价值。由于本研究对结直肠癌患者随访的时间尚短，因此ERCC1 在结直肠癌化疗评估中的作用有待进一步的观察。

综上所述，相对于癌旁组织，结直肠癌组织中MACC1、c-met 的 表 达 明 显 增 高，MACC1、c-met在结直肠癌的发生、发展中具有重要作用。同时，MACC1、c-met 高表达与传统病理评估中的不良预后因素均有一定的相关性，免疫组化检测相对于病理组织学具有相对的客观性，相应的检测可进一步完善病理评估，因而具有一定的临床参考及应用价值。ERCC1 检测结果与传统病理评估结果有一定的相关性，其病理评估价值有待后续工作的进一步探讨及研究。