高效液相色谱—质谱联用法测定苹果中9种氨基甲酸酯及其代谢物农药残留量

张 璇，闫 征

(山西省检验检测中心，食品药品安全防控山西省重点实验室，山西 太原 030025)

甲奈威、灭多威、异丙威、抗蚜威、克百威(3-羟基克百威)、涕灭威(涕灭威砜、涕灭威亚砜)是广谱类杀虫剂，在苹果的栽培种植过程中也普遍使用，已有的液相色谱检测方法因其干扰强、前处理过程复杂，假阳性结果时有发生，所以本文采取提取液中加入无水MgSO4，NaCl，柠檬酸钠后振摇离心，上清液中加入无水MgSO4和PSA，继续振摇离心，上清液过膜后使用液质联用仪检测的方法，大大降低了苹果基质的干扰性，节约前处理试剂使用量，缩短前处理和检测时间，提高准确率。

1 材料与方法

1.1 前处理材料

1.1.1 样品来源 运城市、临汾市、晋中市的苹果生产基地。

1.1.2 试剂与标准品 乙腈、甲醇(迪马科技，色谱纯)，PTFE0.22 μm滤膜(Agela Technologies)，提取盐包均质子(安捷伦科技～5982-5650CH)，净化盐包(安捷伦科技～5982-5056)，甲奈威、灭多威、异丙威、抗蚜威、克百威(3-羟基克百威)、涕灭威(涕灭威砜、涕灭威亚砜)，浓度均为1 000 mg/L(天津环境监测中心)。

1.1.3 主要仪器 Agilent1290-6470液质联用仪；TP-2101电子天平；TKA MS3旋涡混匀器；低速离心机SC-3612。

1.2 检测方法

1.2.1 提取 称取10.00 g试样放入50 mL离心管中，加入一颗均质子和一个提取盐包，再加入10.0 mL乙腈，剧烈振摇1 min，放入离心机用4 200 r/min的转速离心5 min。

1.2.2 净化 从50 mL离心管中吸取6.0 mL上清液，加入到10 mL离心管中，离心管中加入净化盐包，涡旋1 min后用4 200 r/min离心5 min，离心后移取上清液用0.2 μm滤膜过滤，待测。

1.2.3 标准溶液配制 准确移取1.00 mL甲奈威、灭多威、异丙威、抗蚜威、克百威(3-羟基克百威)、涕灭威(涕灭威砜、涕灭威亚砜)单个农药标准溶液，用甲醇做溶剂，配制成100 mg/L的农药单个储备液，然后继续准确移取1.00 mL 9种农药储备液，用甲醇做溶剂，配制成10 mg/L的农药混合标准储备液(储存在-16℃冰箱中)，上机前，用初始流动相将10 mg/L的农药混合标准储备液依次稀释为5、10、20、50、100、200 μg/L的混合工作液。

1.3 仪器条件

1.3.1 液相色谱条件 色谱柱：C18柱100×2.1 mm，填料细度1.8 um；柱温：35℃；进样量：1.0 uL；溶剂A：0.1%甲酸-5 mmol/L乙酸铵的水溶液；溶剂B：甲醇。

时间A(%)B(%)μL(min)0.009010300.01.009010300.06.00298300.08.00298300.08.109010300.013.009010300.0

1.3.2 质谱条件 电离方式：电喷雾电离(ESI)；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测(MRM)；离子源参数参考条件：毛细管电压：3500 V，离子传输毛细管温度：350℃，载气温度：280℃，载气流量：8 L/min，氮气流量：40 psi，鞘气温度：330℃，鞘气流量：11 L/min。

表1 9种农药的母离子、子离子、源内碎裂电压、碰撞能量、碰撞池加速电压

1.4 标准曲线的绘制 将配制好的0.005、0.01等一系列的6个浓度点的工作使用液依据1.3章的仪器条件，以质量浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标做工作标准曲线，每个浓度5次重复。

1.5 回收率和精密度的测定 在空白苹果样品中分别添加5、10、20 μg/kg的3个水平的9种农药的混合工作溶液，每个水平重复7次，按1.3的仪器条件测定回收率及相对标准偏差(RSD)，(表2)。

表2 9种农药的线性方程、相关系数、定量限、回收率及相对标准偏差(n=7)

2 结果与分析

2.1 提取溶剂的选择 依据极性的大小和相似相溶的原则，选择丙酮、甲醇、乙酸乙酯、乙腈对样品进行提取。丙酮、甲醇和乙酸乙酯可以提取更多的色素。使用乙腈提取，成本低，回收率满意。

2.2 净化条件的选择 现行的净化方法是吸附剂(PSA/C18/GCB)，查阅相关资料和进行了大量的实验发现，900 mg硫酸镁和150 mg PSA组合的净化效果优而且吸附农药少，回收率满意。

2.3 质谱条件优化 根据9种农药的化学性质和分子量等在SRM模式下对电喷雾电压、离子源温度、鞘气压力、辅助气流速等质谱条件进行优化。得到特征子离子信息，选择相对丰度较高的两个子离子，对碰撞能量、电子管透镜电压进行优化。

2.4 液相色谱条件优化 流动相加入0.1%甲酸和中性的乙酸铵缓冲盐，加入甲酸能提高离子化效率，当乙酸铵浓度为5 mmol/L，甲酸浓度为0.1%时七种农药的的峰形和保留时间均较好，响应也较高。且甲醇-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)配制简单、重现性好、对环境污染小，综合考虑选择甲醇-水(0.1%甲酸+5 mmol/L乙酸铵)作为流动相。

2.5 线性方程、检出限和定量限 用初始流动相作为9种农药的标准品稀释液，依次稀释为5、10、20、50、100、200 μg/L一系列6个浓度点的混合标准溶液，用液相色谱-质谱联用仪进行检测，外标法定量。9种农药的6个浓度与峰面积有良好的线性关系。在最低添加浓度5 μg/kg下，回收率满意，所以这9种农药的线性方程、定量限(表2)。

2.6 方法的回收率和精密度 结果表明，在5～20 μg/kg 3个添加水平下，平均回收率为88.9%～94.4%，相对标准偏差为3.4%～9.3%，定量限为0.005 mg/kg，说明本方法灵敏度高，稳定性好，可作为苹果中9种氨基甲酸酯类农药的检测方法。图1为标准溶液谱图，图2为样品添加谱图，图3为空白样品谱图。

2.7 计算公式

式中：w：试样中农药残留量，mg/kg；

C：标准溶液浓度，mg/L；

A1：试样溶液的峰面积；

A：标准溶液的峰面积；

V：加入溶剂体积，mL；

m：样本质量，g。

3 实验谱图

图1 标样谱图

图2 苹果添加谱图

图3 苹果空白谱图