30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂分析方法研究

张 钊，张常庆，侯 影，余德勉，梁观凤

(上海悦联生物科技有限公司，上海 201215)

啶氧菌酯[1]是由先正达公司开发的一种甲氧基丙烯酯类杀菌剂，具有保护、渗透、内吸性和良好的熏蒸活性，对作物安全，被叶片吸收后会随水流在木质部运输系统中流动，并可从叶片表面的气相流动中吸收进叶片，其作用机理为通过阻断细胞色素b和c1之间的电子转移，抑制病菌线粒体呼吸，破坏病菌的能量合成及循环。主要用于防治麦类的叶面病害如叶枯病、叶锈病、颖枯病、褐斑病、白粉病等。

戊唑醇[1]是由拜耳公司开发研制的具内吸、保护、治疗和铲除活性的三唑类杀菌农药，能迅速被植物有生长力的部分吸收并主要向顶部转移，不仅具有杀菌作用，还可促进植物生长，对病菌的作用机理为抑制其细胞膜上麦角甾醇的去甲基化，使得病菌无法形成细胞膜，从而杀死病菌。可有效地防治禾谷类作物的多种锈病、白粉病、网斑病、根腐病、赤霉病、黑穗病、种传轮斑病及早稻纹枯病等。

将啶氧菌酯和戊唑醇以适当比例混配成制剂，同时具有保护和治疗作用，杀菌谱广，活性高，可有效应对多种病菌；且具有渗透、内吸和扩散分布能力，有效成分在植物中能有效再分配及充分传递，使防治和保护作用更全面；同时还能促进植物生长，使之根系发达，叶色浓绿，植株健壮，有效分蘖增加，从而提高产量。

有关啶氧菌酯的分析方法[2-3]和戊唑醇的分析方法[4-6]已有相关报道，但两者混配悬浮剂的分析方法还未见报道，本文采用反相高效液相色谱法，对30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂(10%+20%)中有效成分啶氧菌酯和戊唑醇同柱分析和定量，经过实验验证，此方法操作快速、简便，精密度和准确度均能满足定量分析要求，能适用于产品质量控制和相关分析的研究。

1 材料仪器

1.1 样品和试剂 甲醇：色谱纯；水：二次重蒸蒸馏水；啶氧菌酯标样：已知啶氧菌酯含量≥98.0%；戊唑醇标样：已知戊唑醇含量≥98.0%，流动相：甲醇∶水=75∶25，经0.45 μm孔径的滤膜，并在超声波浴槽中脱气10 min。

1.2 仪器 高效液相色谱仪：具紫外可变波长检测器；色谱柱：Φ4.6 mm×150 mm不锈钢柱，内装Kromasil C18/5 μm为填充料的不锈钢柱。

1.3 高效液相色谱操作条件 流量：1.0 mL/min，柱温：室温(温差变化≤2℃)，检测波长220 nm，进样体积：20 μL，保留时间：啶氧菌酯约5.5 min，戊唑醇约7.0 min。

上述操作条件是典型的，可根据仪器的特点对操作参数做适当调整，以期获得最佳效果，典型的啶氧菌酯(戊唑醇)高效液相色谱图(图1)。

图1 30%啶氧菌酯.戊唑醇悬浮剂高效液相色谱图

2 试验方法

2.1 标准溶液配制 称取啶氧菌酯标样0.05 g和戊唑醇标样0.10 g(精确到0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇超声振荡5 min使样品溶解，恢复至室温后用甲醇定容，摇匀；再用移液管准确吸取5 mL至50 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀，备用。

2.2 试样溶液配制 称取0.33 g(精确到0.000 2 g)样品，置于50 mL容量瓶中，加入适量甲醇超声振荡5 min使样品溶解，恢复至室温后用甲醇定容，摇匀；再用移液管准确吸取5 mL至50 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，摇匀，用0.45 μm滤膜过滤，滤液备用。

2.3 试样的测定 在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻2针的响应值变化<1.5%后，按照标样溶液，试样溶液，试样溶液，标样溶液的顺序进行测定。

2.4 试样中有效含量的计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中的峰面积分别进行平均，试样中啶氧菌酯(戊唑醇)的质量分数X(%)分别按式(1)计算：

(1)

式中：

A1—标样溶液中啶氧菌酯(戊唑醇)峰面积的平均值；

A2—试样溶液中啶氧菌酯(戊唑醇)峰面积的平均值；

m1—啶氧菌酯(戊唑醇)标样的质量，g；

m2—试样的质量，g；

P—标样中啶氧菌酯(戊唑醇)的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 溶剂的选择 根据两种待测物质的溶解度性质，选择甲醇作为溶剂。

3.2 流动相和检测波长选择 通过二极管阵列检测器对啶氧菌酯标样和戊唑醇标样进行200～800 nm范围内的吸收光谱扫描(图2～3)，由光谱信息(图2～3)并结合分析中助剂杂质干扰因素(图4)，选定检测波长为220 nm。在甲醇、水中调节比例，将啶氧菌酯和戊唑醇进行有效分离，同时避免助剂和杂质干扰，最后确定为甲醇∶水=75∶25作为流动相，在此条件下对30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂中啶氧菌酯、戊唑醇峰纯度扫描，30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂中啶氧菌酯、戊唑醇的峰纯度均>99.9%，30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂中啶氧菌酯、戊唑醇有效成分出峰位置无明显物质干扰，符合定量分析要求。

图2 30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂中啶氧菌酯HPLC-DAD特异性扫描图

图3 30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂中戊唑醇HPLC-DAD特异性扫描图

图4 30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂制剂空白图

3.3 分析方法的线性相关试验 准确配制一系列不同浓度的啶氧菌酯和戊唑醇标样溶液，然后分别按本标准中2.3测定步骤进行分析检测，分别以啶氧菌酯和戊唑醇的质量浓度为横坐标，啶氧菌酯和戊唑醇的峰面积为纵坐标，计算一元线性回归方程。线性相关性测定试验数据(表1)。

表1 分析方法的线性线性实验结果

啶氧菌酯一元线性回归方程：y=74.880 38x+0.022 76，相关系数：R=0.999 97。

戊唑醇一元线性回归方程：y=39.835 31x+0.083 70，相关系数：R=0.999 92。

3.4 分析方法的精密度相关试 任取一批30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂，按本标准中2.3测定步骤连续测定啶氧菌酯、戊唑醇质量分数10次，分别计算其平均值、标准偏差、变异系数。精密度测定试验数据(表2)。

表2 分析方法的精密度实验结果

从啶氧菌酯、戊唑醇精密度测定试验结果中可以看出，啶氧菌酯的标准偏差为0.01%，< Horwitz公式修正值1.904 6，变异系数为0.14%，戊唑醇的相对标准偏差为0.02%，

3.5 分析方法的准确度相关试 选取已知含量的30%啶氧菌酯.戊唑醇悬浮剂样品，准确称取5份，并分别加入定量的啶氧菌酯、戊唑醇标样，然后按2.3测定步骤测定啶氧菌酯、戊唑醇标样的加入量，同理论值进行比较，计算回收率。准确度测定试验数据(表3)。

表3 分析方法的准确度实验结果

按照本标准规定的方法进行检测试验，啶氧菌酯回收率在99.42%～100.35%之间，平均回收率为99.96%，戊唑醇回收率在99.75%～100.17%之间，平均回收率为100.01%。

4 结论

实验结果表明，本文建立高效液相色谱分析方法能对30%啶氧菌酯·戊唑醇悬浮剂中有效成分进行分离测定，且具有良好的线性、精密度和准确度，操作简便，符合农药产品的质量分析要求，适用于产品的质量检测和控制，可以作为啶氧菌酯和戊唑醇混配制剂的分析方法。