Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌中的表达及意义

邓姣 陈宽冰

(中国医科大学附属盛京医院外科第二胸外科,辽宁 沈阳 110020)

乳腺癌作为一类发病率较高的外科常见病，也是对女性患者而言较为常见的恶性肿瘤性疾病，尽管在近年来的研究中发现，随着诊断及治疗技术的不断提升，乳腺癌早期救治率有所提升，生存期有所延长，但其总体病死率仍然未观察到明显降低，严重危害着女性患者的生理健康。有研究报道指出，乳腺癌本身的发生发展是一个多因素共同作用，且多阶段的过程，在疾病发生发展中多伴随着不同的病理特征，但其具体发生发展机制仍无定论，仍然需要进一步的分析及探讨〔1〕。细胞增殖核抗原(Ki-67)作为一个用于判断细胞增殖及凋亡的有效指标，在乳腺癌治疗及预后评估方面具有重要的意义〔2〕。人表皮生长因子受体(Her)-2表达被认为是一种能够在细胞内外执行不同生理功能的指标，在既往的研究报道中被证实与细胞的增殖、迁移及分化具有密切的关系，同时还可对细胞的凋亡进行抑制，促进增加肿瘤细胞的侵袭性〔3〕。而细胞外基质金属蛋白酶(MMP)诱导因子(CD147)作为一种糖基化程度较高的跨膜蛋白，在原发性乳腺癌及卵巢癌等组织中具有较高的表达水平，且在其病理表现中发挥了重要的作用。本研究则就癌组织中Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌患者中的表达水平及意义进行分析，旨在为疾病的诊断及治疗提供可参考价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取自2019年7月至2021年4月在中国医科大学附属盛京医院接受乳腺癌手术切除术的105例患者的病理组织标本作为乳腺癌组，将距离肿瘤边缘>5 cm的乳腺组织作为癌旁正常组。该组患者年龄60～75岁，平均(68.47±4.14)岁。纳入标准：患者均在医院行临床症状及体征、影像学及病理学检查后确诊；属于乳腺浸润性导管癌诊断标准；无患侧乳腺手术史；尚未进行放疗、化疗或者激素类药物治疗；具有完整的临床资料。排除标准：合并心脑肝肾等重要脏器功能障碍或者损伤；合并存在结缔组织疾病；存在恶性肿瘤疾病史；因各种原因导致的中途出院放弃治疗所导致的临床资料缺失。

1.2试剂与仪器 Ki-67单克隆抗体、Her-2单克隆抗体及CD147单克隆抗体，上述抗体均购买自北京中杉生物技术开发有限公司。华速 HS-2205轮转手动切片机(山东博宇医疗器械有限公司)。徕卡DM750正置显微镜(上海跃河生物科技有限公司)。I-Solution形态学分析系统(加拿大IMT公司)等。

1.3实验方法 样本均给予常规脱蜡至水、透明、包埋、切片，切片的厚度为4 μm，在石蜡切片之后给予常规二甲苯脱蜡处理，酒精梯度水化，抗原修复，冷却等，随后在3%H2O2，37℃的环境中孵育，5%的正常山羊血清37℃封闭处理，向其中加入50 μl一抗，放入至-4℃环境中保存过夜；第二日复温，向其中加入二抗，即链霉素亲和素-生物素复合物液，二氨基苯基碘显色5 min；采用苏木精对其实施染色处理后，二甲苯透明，中性树胶封片，再烤干〔4〕。标本均在同一个条件下采用免疫组织化学(SABC)方法对其进行染色处理，之后再设置阴性和阳性对照。分别在乳腺癌组及癌旁正常组中随机选取10个视野(×400倍)，阳性表达的评估标准：在经过染色之后的胞质及薄膜可以观察到棕黄色或者黄褐色的沉淀物。

1.4判定指标 按照美国临床肿瘤学会/美国病理学家协会(ASCO/CAP)相关病理指南公式〔5〕，结合DAKO Hercept Test评分系统判断如下：(-)无细胞染色或者<10%细胞膜呈现出了较弱染色；(+)表示10%细胞膜部分呈现出了较弱染色；()表示10%细胞膜呈现出完全较弱或者中等染色；()为10%的细胞膜呈现出了完全强染色。按照阳性细胞占全部观察细胞的半定量情况进行分级，分级标准：以(-)、(+)、()作为阴性表达，()作为阳性表达〔6〕。

1.5观察指标 采用免疫组织化学法测量并对比乳腺癌组与癌旁正常组标本中Ki-67、Her-2及CD147的表达水平，并将上述指标表达水平与临床病理关系进行分析；对Ki-67、Her-2及CD147的表达水平采用Spearman相关性分析，对全部患者实施为其1年的乳腺癌手术后随访，对随访后乳腺癌患者的生存情况进行统计，生存的患者为生存组，死亡的患者为死亡组，对比Ki-67、Her-2及CD147的表达水平在不同生存情况下表达的差异性。

1.6统计学处理 采用SPSS23.0软件进行χ2检验、t检验、Spearman相关性分析。

2 结 果

2.1两组组织标本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值对比 乳腺癌组组织标本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值显著高于癌旁正常组(P<0.05)。见表1。

表1 两组组织标本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白光度值对比

2.2Ki-67、Her-2及CD147蛋白表达与临床病理指标的关系 Ki-67、Her-2及CD147蛋白表达分别在肿瘤>5 cm、病理类型为浸润性导管癌、组织分型为中低分化、有淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、有脉管侵袭的患者中具有更高的阳性表达率，差异有统计学意义(P<0.05)。 Ki-67、Her-2及CD147阳性表达在不同肿瘤患侧中未呈现出明显的差异性(P>0.05)。见表2。

2.3生存组与死亡组组织标本中Ki-67、Her-2及CD147的蛋白阳性表达对比 死亡组组织标本中Ki-67、Her-2及CD147蛋白阳性表达水平显著高于生存组(P<0.05)。见表3。

表2 Ki-67、Her-2及CD147蛋白表达与临床病理指标的关系(n=105，n)

表3 生存组与死亡组组织标本中Ki-67、Her-2及CD147阳性表达对比〔n(%)〕

2.4Ki-67、Her-2及CD147的相关性 Ki-67与Her-2、CD147呈正相关(r=0.614，0.711；均P<0.05)；Her-2与CD147呈正相关(r=0.641，P<0.05)。

3 讨 论

尽管对乳腺癌患者实施积极有效的手术、放化疗及靶向给药等方法治疗可在一定程度上抑制乳腺癌的进展，但绝大多数患者的整体预后仍然较差，治疗后仍然存在着一定的复发率及转移率，同时也是导致患者死亡率增高的重要原因〔7〕。

Ki-67作为一种由10号染色体长臂所属基因转录翻译而成，在一般正常情况下可表现在除去G0期及G1早期以外的各个细胞分裂阶段，多用于反映细胞当前的增殖状态〔8〕。有研究资料显示，Ki-67多与肿瘤细胞的增殖及转移具有密切的相关性，同时也与患者的预后相关，由此认为，通过对Ki-67进行检测可用于检测当前肿瘤进展状态。Her-2作为一种位于17号染色体q21区上的人类表皮生长因子受体家族成员，在一般情况下，Her-2的表达水平较低，且处于一个非激活的状态下，而一旦需要Her-2蛋白中的酪氨酸在发生磷酸化后，则会通过介导细胞内的磷酸化、DNA合成代谢等一系列功能，而由此表现出较高的表达水平，此时也会导致肿瘤细胞快速增殖，导致癌症的发生及发展〔9，10〕。CD147被认为是一种属于IgSE类的细胞黏附分子(CAM)，在细胞内可对基质细胞的MMPs生产产生一定的刺激作用，并对细胞外基质(ECM)的降解与重建可产生刺激效果，加快癌细胞的进一步侵袭与转移〔11〕。另外，有研究报道指出，CD147也属于一种与炎症反应、肿瘤进展等诸多病理过程相关的多功能分析，可从多个方面影响乳腺癌的发生〔12，13〕。

本研究就癌组织中Ki-67、Her-2及CD147在老年女性乳腺癌患者的表达水平及意义进行分析，结果与既往研究〔14，15〕报道基本一致。在观察预后表现上证实了Ki-67、Her-2及CD147蛋白阳性可对乳腺癌患者的预后带来诸多不利影响，在临床工作中可将三者作为分析并判断老年乳腺癌患者肿瘤浸润、转移及预后的重要指标〔16，17〕。 而Ki-67、Her-2及CD147之间是否会互相促进机制尚无定论，在接下来的研究中仍然需要深入分析〔18〕。

综上，Ki-67、Her-2及CD147在乳腺癌组织中多呈现出表达异常的情况，三者之间互相呈现出了明显的正相关性，且上述指标与乳腺癌病理特征、生存预后具有一定的关系。在接下来的研究中可深入对Ki-67、Her-2及CD147与乳腺癌发生发展之间的关系进行分析，为后续乳腺癌的治疗及预后判断提供可靠可参考依据。