纤维蛋白的两种特殊染色效果比较

谢文林，唐翠兰，连家燕

（1 中山大学附属第七医院病理诊断中心，深圳 518107；2 中山大学附属第一医院病理科，广州 510080）

纤维蛋白（fibrin）具有嗜酸性，常见于纤维蛋白性炎症为主的疾病（大叶性肺炎、白喉、纤维蛋白性心包炎及结核性胸膜炎等）；在弥漫性血管内凝血（DIC）时，HE 染色不易观察的微小血栓主要成分是纤维蛋白；恶性高血压和胃溃疡底的动脉壁纤维蛋白样变，急性风湿病、肾小球沉积物性质的判定等都可以观察到纤维蛋白呈阳性反应[1]。由此可见，纤维蛋白染色在临床病理诊断中具有非常重要的意义。本文对15 例富含纤维蛋白的石蜡包埋组织同时进行改良Masson 染色与Mallory 磷钨酸苏木精染色（PTAH 染色），探讨更有利于临床病变组织中纤维蛋白观察的染色方法。

材料与方法

1 材料

选取中山大学附属第七医院及中山大学附属第一医院2018‐2022 年病理送检组织中富含纤维蛋白病例共15 例，所选标本均经4%中性缓冲甲醛溶液固定，常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋，连续切片4 张，切片厚度3～5 μm。

2 染色方法

2.1 改良Masson 染色

常规切片，脱蜡至水后，置于Bouin 液后放入微波炉中高火加热15 min，流水冲洗5～10 min，Weigert铁苏木素染液染色10 min，蒸馏水洗，1%盐酸酒精镜下分化，返蓝液返蓝30 s，流水冲洗2 min，丽春红酸性品红液染色10 min，蒸馏水稍洗，磷钼酸液染5 min，镜下观察染色情况，倒去磷钼酸，直接加苯胺蓝液染5 min，1%冰醋酸分化组织1 min，95%酒精稍洗3 次，无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

2.2 PTAH 染色

常规切片，脱蜡至水后，滴入酸化高锰酸钾液氧化5 min，流水冲洗1 min，2%草酸漂白1 min，流水冲洗1 min，磷钨酸苏木素液浸染20～24 h，95%乙醇迅速洗去多余染液，无水酒精脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。

结 果

HE 染色，纤维蛋白呈红染的细丝、相互连接成网状，也可相互融合形成粗大的纤维蛋白网（图1A）；改良Masson 染色，纤维蛋白、红细胞呈红色，胶原纤维呈蓝色，细胞核呈蓝褐色（图1B）；PTAH 染色，纤维蛋白、细胞核和红细胞呈深蓝色，胶原纤维呈棕红色（图1C）。

图1 显示病理组织纤维蛋白的两种特殊染色效果比较。A，HE 染色；B，改良Masson 染色；C，PTAH 染色；比例尺，50 μmFig.1 Comparison of the effects of two special staining methods for demonstrating pathological tissue fibrin.A, HE staining; B, modified Masson stain‐ing; C, PTAH staining; scale bar, 50 μm

讨 论

显示纤维蛋白的PTAH 染色法，其染色机制是较为奇特的，单一染液能染出两种主要的颜色即蓝色和棕红色。但这种方法存在着试剂配制及染色时间较长的缺点，磷钨酸苏木精液常常要孵育24 ～48 h，时间过长，一些加急的病例组织处理起来会比较麻烦，给临床病理诊断带来极大不便。PTAH 染色试剂配制也比较繁琐，在日常工作中，当磷钨酸苏木精配制完成后常需数月的氧化成熟才能使用，加入氧化剂如高锰酸钾或H2O2虽然可以代替自然氧化加快试剂的成熟，但是这会导致磷钨酸苏木精液不稳定，染色力容易失效，且PTAH 染色为进行性染色，染色时间过长容易出现过染现象，此方法需要在染色过程中把片子取出并在显微镜下观察着色程度，给染色工作带来了极大的不便。从染色效果上看，PTAH 染色没有Masson 三色染色那般鲜艳，背景对比较不清晰。当一种染色方法无法满足临床高效率运作的时候，我们就要寻找一种显示纤维蛋白效率更高，效果更好，染色更为方便的染色方法。

Masson 染色是结缔组织最常用的特殊染色方法，主要用于区分胶原纤维和肌原纤维，在某些疾病中，也可以用于认识和区分病理性沉着物如纤维蛋白。Masson 染色较PTAH 染色方法试剂配制及染色时间缩短，染色效果更鲜艳，背景对比更清晰，Masson 染色使纤维蛋白、红细胞呈红色，胶原纤维呈蓝色，红蓝对比鲜明，定位清晰，阅片的时候更让人赏心悦目。传统Masson 染色染色前玻片常常需要置入Bouin液室温作用一晚或置入37 ℃水浴箱中媒染2 h，为了提高纤维蛋白的染色效率，简化染色步骤，优化显色效果，我们对传统Masson 染色进行了改良，染色过程中添加了微波加热的步骤，经过数次的对比实验，把Bouin 液放入微波炉中高火加热15 min，这项实验具体参数的确定，不仅缩短了反应时间，还取得了更为鲜艳的染色效果。微波是一种高频率的电磁波，其波长短，穿透力强，辐射时产生的热效应能使染料的极性分子发生震荡而加速运动，在染色的过程中，微波可加速组织与染料的结合，因而具有染色时间短、着色性高的特点[2]。

经过比较和实践，我们认为改良Masson 染色显示纤维蛋白效果明显优于PTAH 染色，且染色时间较短，操作简便，易掌握，结果可靠，值得在临床病理中广泛推广使用。