IGF2 基因的多态性与辽宁黑猪生产性能的关联分析

尚丽娟

（辽宁省阜新蒙古族自治县现代农业发展服务中心，辽宁阜新 123100）

辽宁黑猪是由东北民猪与巴克夏猪杂交后经过40余年驯化而形成的地方品种，其分布广、数量多，是辽宁省杂交猪的主要母本。该品种具有适应性强、繁殖力高、肉质好等优良特性[1]。

胰岛素样生长因子2（insulin-like growth factor 2，IGF2），也被称为生长调节素A，是胰岛素—胰岛素样生长因子—释放生长因子家族的成员之一，与胰岛素结构上同源，是啮齿类动物中促进有丝分裂的主要生长因子[2,3]。

本文采用聚合酶链式反应-单链构像多态性分析法（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）分析方法对猪IGF2 基因进行多态性的检测[4]。

1 试验设计

1.1 试验材料

2011 年8 月采用沈阳农业大学猪场将纯种辽宁黑猪和杜洛克猪作为试验材料进行耳静脉采血，每头试验猪均采2mL 左右的血，采后的血液放在10%的EDTA 抗凝管中保存。每管血液对应每头猪的耳号进行编号。最后尽快将采集好的血液带回实验室在-20℃的条件下进行保存备用。利用全血基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA。

生产性能试验在检测出不同基因型的猪群中选择体重在60kg 左右的地方猪种辽宁黑猪和引进猪种杜洛克猪共36 头。按照基因型将其均分为3 组，每组6头，公母各半。1～3 组为黑猪组，4～5 组为杜洛克猪组。分别记录各组平均日增重、平均日采食量，并计算料重比。

1.2 主要试剂

全血基因组DNA 提取试剂盒（购自沈阳宝泰克生物有限公司），Taq DAN 聚合酶，DNA Ladder2000（分子量为2000、1000、750、500、250、100bp，DNA Maker（Ⅰ,Ⅱ），以上试剂均购自大连生物有限公司。本次试验引物是利用Oligo（6.0）分析软件，根据猪基因组序列（AY044828）对IGF2 基因exon7，exon8 和exon9 区域进行引物设计，引物由沈阳宝泰克生物工程有限公司提供，引物信息见表1。

表1 引物信息

1.3 PCR 扩充

PCR 反应的条件：首先93℃预变性3min，变性然后进入循环条件，共进行34 个循环，最后72℃延伸10min，4℃保存。

PCR 产物的检测：取PCR 扩增产物（表2）和加样缓冲液（1μL）混合好后加入点样孔中。130V 电泳30min。最后在凝胶成像系统中观察结果，并在成像分析系统上扫描，拍照保存图片。

表2 IGF2 基因的50μL PCR 组分

1.4 扩增产物PCR-SSCP 分析方法

取PCR 产物（1μL）放在PCR 管中与5μL 变性Buffer 混匀，93℃变性10min，迅速冰浴1min 然后用加样器加样。开始在220V 电压下电泳10min，然后在140V（电压不能高于120V，否则有可能使条带跑弯）电泳12h，取下凝胶进行银染。

1.5 数据处理

猪群各基因的基因型频率及基因频率的计算猪群各基因的基因型频率及基因频率的计算方法参见文献[5]。

生产性能测定结果（平均日增重、平均日采食量、料重比）根据固定效应模型，用SAS v6.12 软件进行单因素的协方差分析。

2 结果与分析

2.1 PCR 扩增结果

用所设计的引物对不同猪种的基因组进行扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测后，结果表明，扩增片段与目的片段大小一致，且特异性好，可进行SSCP 分析。

2.2 SSPC 检测结果

PCR 扩增产物进行SSCP 检测，结果在扩增的片段上发现了3 个基因型，分别是AA、AB、BB，结果见图1。

图1 PCR 扩增结果

2.3 IGF2 基因频率和基因型频率分析

由表3 可知，IGF2 基因杂合子基因AB 在辽宁黑猪中出现的频率最高，而在引进猪种杜洛克猪中纯合子AA 基因频率最高。BB 基因型均是两个猪种中出现频率最低的基因型。由此可以看出，等位基因A 均为辽宁黑猪和杜洛克猪的优势等位基因。

表3 IGF2 基因频率和基因型频率分析

2.4 IGF2 基因的多态性对猪生产性能的影响

由表4 可知，IGF2 基因的不同基因型对辽宁黑猪日增重的影响没有达到显著水平（P＞0.05）。对采食量的影响达到了显著水平（P＜0.05）。AA 型的辽宁黑猪采食量最小，且直接影响到料重比的结果，IGF2 基因的不同基因型对辽宁黑猪料重比的影响也达到了显著水平（P＜0.05）。因此，AA 型辽宁黑猪的料重比的值最小，AB 型辽宁黑猪的料重比最大。

表4 猪IGF2 基因的不同基因型对猪生产性能指标的影响

IGF2 基因的不同基因型对杜洛克猪日增重、平均日采食量、料重比的影响均达到了显著的水平（P＜0.05）。AA 型杜洛克猪的日增重最大，料重比最小，BB 型杜洛克猪的日增重最小，料重比最大。

辽宁黑猪的日增重明显低于引进猪杜洛克猪的日增重，且料重比明显高于杜洛克猪。

3 结论与讨论

3.1 IGF2 基因的多态性

本次试验利用SSCP 方法对辽宁地方猪种辽宁黑猪和引进猪种杜洛克猪IGF2 基因的多态性进行分析，发现了猪的IGF2 基因的多态性，即AA 型、AB 型和BB 型。杂合子AB 基因在辽宁黑猪中出现的频率最高，而在引进猪种杜洛克猪中纯合子AA 基因出现的频率最高。BB 基因型均是两个猪种中出现频率最低的基因型。由此可以看出，等位基因A 均为辽宁黑猪和杜洛克猪的优势等位基因。

3.2 猪IGF2 基因对生产性能指标的影响

本次试验结果表明，IGF2 基因的不同基因型对杜洛克猪日增重、平均日采食量、料重比的影响均达到了显著水平。日增重、料重比直接影响了经济效应，所以测量生产性能指标对其有重要意义。AA 型的辽宁黑猪日增重最高，采食量最低，直接影响其料重比。所以3 种基因型相比经济效应较好的为AA 型。但和引进猪种杜洛克猪相比，AA 型的日增重明显低于引进猪种。从经济效应方面看，地方猪种的经济效应不如引进猪种的经济效应。