CCT3在子宫颈病变组织中的表达与临床病理特征关系及诊断价值

李曼，吕丽丽，苌雨环，侯岩岩，王梦格，叶国柳

蚌埠医学院第一附属医院妇产科，安徽蚌埠 233000

子宫颈病变是指在子宫颈部位发生的各种良恶性病变，主要包括子宫颈癌和子宫颈上皮内瘤变（CIN）［1］。子宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展是一个慢性持续过程，由HPV 感染形成CIN，进一步发展为浸润癌［2］。CIN 与子宫颈癌密切相关，低级别上皮内瘤变（LSIL）大部分可消退，高级别上皮内瘤变（HSIL）被公认为是癌前病变。因此，对子宫颈病变的筛查和阻断至关重要［3］。含TCP1的伴侣蛋白亚基3（CCT3）属于伴侣蛋白家族成员，主要参与蛋白质的折叠和空间结构的形成［4］。研究显示，CCT3 在许多肿瘤组织中表达升高，如肺腺癌［5］、头颈部鳞癌［6］、肝癌［7］、乳腺癌［8］等，与肿瘤发生发展及不良预后相关。本研究拟通过分析CCT3 在子宫颈病变中的表达，并探讨其对CIN 和子宫颈癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取蚌埠医学院第一附属医院病理科2017—2020 年存档的子宫颈蜡块组织，包括正常子宫颈组织50 例、CIN 组织90 例（其中LSIL 40例，HSIL 50 例）、子宫颈癌组织90 例。入组标准：CIN 或子宫颈癌经病理检查确诊；术前HPV 分型或定量筛查。排除标准：合并其他肿瘤或重大疾病；术前已行放化疗或药物治疗；临床资料或随访缺失。本研究经蚌埠医学院第一附属医院伦理委员会审批（批号2021KY039），并获得患者知情同意。

1.2 CCT3检测方法 将正常子宫颈、CIN和子宫颈癌组织用石蜡包埋，切4～5 μm厚切片，经过烘干、脱蜡和水化，在柠檬酸钠缓冲液中抗原修复15 min；过氧化氢孵育10 min后洗涤3次；加入封闭液继续孵育5 min阻断非特异性结合。加入CCT3抗体（1∶200），4 ℃孵育过夜，洗涤3次后与二抗孵育结合。再次洗涤，DAB显色，苏木素复染，常规脱水，透明，封片，阅片。显微镜下随机选取5个视野，按照染色强度和细胞阳性率进行评分。染色强度评分：淡黄色为1分，黄色为2分，棕色为3分；细胞阳性率评分：1%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，76%～100%为4分。将两项得分相乘，＜4分为CCT3阴性，≥4分为CCT3阳性。

1.3 统计学方法 采用R3.6.3 软件和SPSS22.0软件进行数据处理，Graphpad Prism 8 软件绘图。计量资料多组间比较采用方差分析；计数资料以频数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。ROC 曲线分析CCT3在不同子宫颈病变中的诊断价值，通过联合诊断实验进行检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CCT3在不同子宫颈病变组织中的表达比较 免疫组化结果显示，CCT3 主要定位于胞质，呈棕褐色，在正常子宫颈、CIN 和子宫颈癌组织中的染色程度依次增强。CCT3 在正常子宫颈、CIN、子宫颈癌组织中的阳性表达率分别为34.00%、58.89%、80.00%，CIN 和子宫颈癌组织高于正常子宫颈组织，子宫颈癌组织高于CIN组织（P均＜0.01）。

2.2 CCT3 与子宫颈病变临床特征的相关性 在CIN 患者中，CCT3 表达与HPV 高 危 型感染（P＜0.001）和分级（P=0.017）有关，见表1；在子宫颈癌患者中，CCT3表达与HPV高危型感染（P=0.013）、分级（P=0.026）和淋巴结阳性（P=0.025）有关，见表2。

表1 CIN组织中CCT3表达与患者临床病理特征的关系

表2 子宫颈癌组织中CCT3表达与患者临床病理特征的 关系

2.3 CCT3 对子宫颈病变的诊断效能 CCT3 对CIN 诊断预测的ROC 曲线下面积（AUC）为0.702，P＜0.001，灵敏度为58.89%，特异度为66.00%；CCT3对子宫颈癌诊断预测的AUC 为0.802，P＜0.001，灵敏度为66.00%，特异度为80.00%。

2.4 CCT3 联合HPV 高危型感染对子宫颈癌的预测价值 将90 例CIN 和90 例子宫颈癌资料合并，CCT3 联合HPV 高危型感染对子宫颈癌的预测价值见表3、4。CCT3 联合HPV 高危型感染检测能显著提高对子宫颈癌预测的敏感度（92.22%）和特异度（58.89%）。

表3 子宫颈病变中CCT3表达和HPV高危型感染的情况（例）

表4 CCT3联合HPV高危型感染对子宫颈癌的预测价值（%）

3 讨论

子宫颈病变的进展是一个循序渐进的过程，CIN 是子宫颈癌发生发展的关键阶段，HPV 持续感染是关键因素［9］。目前对子宫颈病变的筛查通常采用“三阶梯”：即HPV 和子宫颈液基细胞学检测、阴道镜检查和子宫颈活检。HPV 筛查大大提高了CIN和子宫颈癌的检出率，但是它无法区分一过性感染和慢性感染，持续性感染更可能最终发展为子宫颈癌；阴道镜检查的结果通常以子宫颈活检为准，作为三阶梯中最关键的一步，子宫颈活检取决于病理科医生的主观判断，不同医生可能会给出不同的组织学结论［10］。所以，仍需找到其他方式适当介入来提高对子宫颈病变筛查的准确率，生物标志物就是一种趋势。

CCT3作为一种伴侣蛋白，以肌动蛋白和微管蛋白为底物，以ATP 依赖的方式促进真核细胞中约10%的蛋白质空间结构正确折叠和功能稳定发挥［11-12］。当CCT3 的ATP 结合位点发生突变时，可导致胞质内未翻译的mRNA 积聚和降解，使蛋白质水平和定位发生变化［13］。当CCT3 数量或质量发生变化时，对蛋白质结构和功能的调节保护作用将会消失，并可促进体细胞的快速进化，甚至形成恶性转化，导致肿瘤发生［14］。CCT3参与肿瘤发病的研究近几年被广为报道，HOU 等［15］发现在CCT3 肝细胞癌中表达上调，可以通过影响细胞周期和DNA 复制参与肝细胞癌的发生发展，LIU 等［16］认为CCT3 可以作为肝癌的潜在生物标志物，在诊断能力上甚至优于甲胎蛋白。CCT3 还可以作为miR233 的靶点，影响乳腺癌的临床分期和不良预后。关于CCT3 在子宫颈癌中的研究也有报道，DOU 等［17］发现CCT3 与子宫颈腺癌的进展有关，抑制CCT3 可以通过抑制纤维连接蛋白1（FN1）从而促进子宫颈腺癌细胞的凋亡和周期阻滞，CCT3可以作为子宫颈癌一种新的有前景的生物标志物。

本研究发现CCT3 的表达随着子宫颈病变的严重程度而呈逐渐上调，CCT3 在CIN 中表达较正常子宫颈组织升高，在子宫颈癌中表达量继续升高。更进一步研究发现，CCT3的表达与子宫颈病变患者的HPV 高危型感染有关。这或许是CCT3 参与了HPV与癌基因和抑癌基因相互作用的过程，当然，这需要更多的研究去挖掘其中的机制。值得一提的是，我们分析CCT3 在HSIL 中表达较LSIL 中增高显著，在LSIL 和正常子宫颈中表达无明显差异，这和我们临床的干预治疗是一致的。此外，CCT3的表达可以将CIN 和子宫颈癌与正常子宫颈区分开来，这表明了CCT3对子宫颈病变具有较好的诊断价值。将CCT3的表达与HPV 高危型感染联合，能显著提高对子宫颈病变患者进展为子宫颈癌的预测能力。

综上所述，CCT3 在CIN 和子宫颈癌中表达上调，具有较好的诊断潜力，有可能为子宫颈癌的早期筛查提供一些参考。