BCCIP蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

崔 倪,王延楠,单悦展,周远航，倪劲松,冯 野*，房学东*

(1.吉林大学中日联谊医院 胃肠外科，吉林 长春130033；2.吉林大学第一医院二部 病理科，吉林 长春130031)

BCCIP(BRCA2 And CDKN1A Interacting Protein)是一种进化保守蛋白，参与维持基因组稳定性和细胞周期进程，以具有不同C末端结构域的BCCIPβ及BCCIPα两种类型存在于人类中。BCCIP基因表达是肿瘤抑制中重要的BRCA2辅助因子，其作为肿瘤抑制因子在多种肿瘤中起作用。已有研究证实，BCCIP基因在卵巢癌、肾细胞癌及结直肠癌等组织中表达降低，研究也表明，BCCIP的低表达状态成为肝细胞癌患者生存率低的独立预后因素[1-2]。然而其他研究发现，BCCIPβ在食管鳞状细胞癌中高表达，并与肿瘤分级，肿瘤细胞增殖和侵袭显著相关，可能作为一种致癌基因促进了食管癌的进展，导致其不良预后[3]。 目前BCCIP基因在肿瘤中表达的研究结果不尽相同，且有关BCCIP在胃癌中表达的研究甚少。我们的研究旨在分析BCCIP在胃癌中的表达及其与临床相关指标之间的相关性，进而探讨BCCIP表达对胃癌预后的意义。

1 材料与方法

1.1 标本来源

本研究随机选取2017年1月至2018年10月间吉林大学第一医院二部病理科原发性胃腺癌110例石蜡标本，并选取同一个患者癌旁正常胃粘膜组织作对照。其中男性患者87例，女性患者23例，患者平均年龄61.71岁，所选病例患者术前均无放化疗，标本切片经2名病理医生复阅。

1.2 实验方法

免疫组化染色(IHC)采用S-P免疫组织化学染色方法，使用全自动免疫组化仪(Thermo Fisher)进行染色，分析110例胃癌组织和正常胃粘膜组织中BCCIP、Ki67和突变型P53的表达：

将所选病例石蜡标本切成2 μm切片，置于烘干箱70度烤片1 h；二甲苯溶液中浸泡20 min脱蜡到乙醇浸泡15 min，用纯水冲洗酒精；将切片放入含EDTA缓冲液的高压锅中加热修复2.5 min，用凉水冷却后转移到PBS缓冲液中浸泡20 min；滴加80 μl过氧化氢液封闭10 min；滴加一抗试剂孵育1 h，PBS缓冲液清洗；滴加二抗试剂，孵育30 min；用DAB显色液显色5 min；苏木素中染色复染2.5 min，后经分化、反蓝、脱水和透明及封片；将染色组织切片放于光学显微镜(Olympus)下观察、记录、采集图像。

1.3 结果判定

BCCIP表达主要定位于细胞核，以棕黄色颗粒沉着判为阳性。评分采用双评半定量法：A:阳性细胞百分率<10%：0分，11-25%：1分，26-50%：3分，>50%：4分；B：依据组织染色程度进行评分：不着色：0分，浅黄色：1分，棕黄色：3分。再计算着色范围与染色程度的和，两项相加后，所得分数<3，判为阴性(-)；2-3，判为弱阳性(+)；4-5，判为中等阳性(++)；≥6，判为强阳性(+++)。

P53和Ki-67的判读方法：每张组织片随机选取10个高倍镜视野，计数阳性细胞的百分率，阳性细胞≤10%，判为阴性；阳性细胞>10%，判为阳性。

1.4 统计学分析

采用SPSS软件分析系统，采用配对秩和检验分析BCCIP在胃癌组织及正常胃粘膜组织中的表达差异；秩和检验分析胃癌中BCCIP的表达与各项临床指标(肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤分期)之间的关系；Spearman相关分析法分析胃癌中BCCIP的表达与各项临床指标(患者性别、年龄、肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤分期)及Ki67和P53的相关性。

2 结果

2.1 BCCIP在胃癌组织中的表达

BCCIP在正常胃粘膜组织及胃癌组织中的表达主要表达于细胞核(图1)。在110例胃癌组织中有104例BCCIP阳性表达，阳性表达率为94.55%，其中26例强阳性表达，38例中等阳性表达，40例弱阳性表达，6例阴性表达；110例正常胃粘膜组织中BCCIP的阳性表达率为100%，BCCIP强阳性表达69例，中等阳性表达33例，弱阳性表达8例，阴性表达0例。110例标本中有68例(61.82%)BCCIP在胃癌中的表达强度低于其相配对的正常胃组织，且BCCIP在胃癌和正常组织中表达的差异具有统计学意义(P<0.01，见表1)。

图1 BCCIP在胃癌和正常胃粘膜组织中的表达(200×)

表1 胃癌组织及正常胃粘膜组织中BCCIP的表达

2.2 BCCIP与肿瘤分化程度的关系

免疫组化结果显示，BCCIP在不同分化程度胃癌中的表达程度的差异显著，(P<0.01见图2，表2)。16例高分化胃癌中，10例BCCIP强性阳性表达，4例中等阳性表达，2例弱阳性表达，0例阴性表达；56例中分化胃癌中，10例BCCIP强阳性表达，21例中等阳性表达，24例弱阳性表达，1例阴性表达；38例低分化胃癌中，6例BCCIP强阳性表达，13例中等阳性表达，14例弱阳性表达，5例阴性表达。

图2 BCCIP在胃癌组织中的表达(200×)

表2 BCCIP的表达与胃癌分化程度的关系

2.3 BCCIP与肿瘤分期的关系

10例T1分期中7例BCCIP强阳性表达，1例中等阳性表达，2例弱阳性表达，0例阴性表达；15例T2分期中2例BCCIP强阳性表达，10例中等阳性表达，3例弱阳性表达，0例阴性表达；76例T3分期中14例BCCIP强阳性表达，25例中等阳性表达，33例弱阳性表达，4例阴性表达；9例T4分期中3例BCCIP强阳性表达，2例中等阳性表达，2例弱阳性表达，2例阴性表达。胃癌中BCCIP的表达在不同肿瘤分期中表达差异显著(P<0.05，见表3)。

2.4 BCCIP与淋巴结转移的关系

78例有淋巴结转移标本中12例强阳性表达，26例中等阳性表达，34例弱阳性表达，6例阴性表达；32例无淋巴结转移标本中，14例强阳性表达，12例中等阳性表达，6例弱阳性表达，0例阴性表达。胃癌中BCCIP在有淋巴结转移组和无淋巴结转移组的表达差异显著(P<0.01，见表4)。

表3 BCCIP的表达与胃癌肿瘤分期的关系

表4 胃癌中BCCIP的表达与淋巴结转移的关系

2.5 P53、Ki67在胃癌组织中的表达

P53和Ki67在胃癌组织中阳性表达于细胞核(见图3)。P53在110例胃癌标本中有55例阳性表达，55例阴性表达，阳性率50%；P53在110例正常胃粘膜组织中有1例阳性表达，99例阴性表达，阳性率0.91%，P53在正常组的表达高于胃癌组，统计分析结果显示P53在胃癌组与正常组表达的差异显著，具有统计学意义(P<0.01，见表5)。P53在胃癌中的表达与患者年龄、性别、肿瘤分期无关，与淋巴结转移正相关(r=0.413，P<0.01)；与分化程度负相关(r=-0.290，P<0.01，见表6)。Ki67在110例胃癌中有106例阳性表达，4例阴性表达，阳性率96.36%；在110例正常胃粘膜组织中有45例阳性表达，65例阴性表达，阳性率40.9%。与正常胃粘膜组织相比，Ki67在胃癌中表达明显升高(P<0.01，见表5)；110例胃癌中Ki67的表达与患者年龄、性别及肿瘤分期无关，与淋巴结转移正相关(r=0.372，P<0.01)；与分化程度负相关(-0.224，P<0.05，见表6)。

图3 Ki-67、P53在胃癌组织中的表达(200×)

表5 胃癌及正常组织中P53及Ki67的表达

2.6 BCCIP与P53、Ki67及临床指标的相关性分析

采用Spearman相关分析显示胃癌中BCCIP的表达与胃癌患者性别、年龄无关；与肿瘤分期、淋巴结转移、Ki67、P53的表达负相关(r=-0.226，-0.355，-0.198，-0.311，P<0.05)；与肿瘤分化程度正相关(r=0.292，P<0.01；见表6)。

表6 胃癌组织中BCCIP与P53、Ki-67及临床指标的相关性分析

3 讨论

胃癌是全球癌症相关死亡率的主要原因，预后不良，晚期胃癌的中位总生存期≤12个月。导致胃癌发展的因素包括环境、遗传及其他诱发因素，并且幽门螺杆菌的感染是主要因素之一。开展对于正常细胞稳态至关重要的信号传导途径的研究有助于开发靶向治疗的新型药物。遗传学研究揭示相关基因的表达改变可能在促进胃癌发生的易感性方面发挥了重要作用[4]。哺乳动物的BCCIP基因最初被鉴定为BRCA2相互作用蛋白，BCCIP在DNA修复，DNA复制应激抑制，细胞周期调控，有丝分裂和核糖体生物发生中具有关键作用[5]。多项研究报道BCCIP是肿瘤抑制基因，在多种肿瘤中表达下调，包括胶质母细胞瘤、肾细胞癌、卵巢癌、乳腺癌等，其表达减低与肿瘤发生及进展相关。然而也有研究报道称BCCIP在食管鳞状细胞癌中表达增加，可能是患者预后不良的标志物。有关BCCIP在胃癌中的表达情况的研究尚未见报道。为了探索BCCIP与胃癌的关系，我们通过免疫组织化学染色方法，分析了BCCIP在胃癌中表达的情况。结果显示BCCIP在胃癌中的表达强度明显低于与之同源的正常胃粘膜组织，两组间BCCIP表达差异显著。

为了探究BCCIP在胃癌中表达的潜在作用，我们进一步分析了胃癌中BCCIP的表达与临床指标之间的相关性，发现胃癌中BCCIP的表达与患者性别、年龄无关；与肿瘤分期、淋巴结转移及Ki67、突变型P53的表达负相关；与肿瘤分化程度正相关。本研究结果与lin Z等人在肝细胞癌中的研究结果相似，BCCIP在肝细胞癌(HCC)中表达下调，其表达水平与HCC多种临床病理因素呈负相关，包括肿瘤分级，肿瘤分期和Ki67的表达[4]。这提示BCCIP可能成为胃癌预后良好的指标之一。

Ki-67是癌症的重要预后标志物，其增殖指数超过10%-14%表示高危预后类别[6]。为此我们分析了Ki67在胃癌中的表达，并分析其与BCCIP在胃癌中的相关性。我们的研究显示，胃癌中Ki67的表达与患者年龄、性别及肿瘤分期无关，与淋巴结转移正相关；与肿瘤分化程度及BCCIP的表达负相关。这一研究结果与Liu G等人研究相似，即Ki67在胃癌中表达上调，并与淋巴结转移、肿瘤大小、TNM分期及患者预后不良有关[7]。并且在我们的研究中还发现胃癌中BCCIP的表达与Ki67呈负相关，然而，这与Chen L等人在食管鳞癌(ESCC)中的研究结果相反，他们发现BCCIP在食管鳞状细胞中表达升高，并与Ki67呈正相关，同时与肿瘤分级、肿瘤侵袭性显著相关，表明了BCCIP也是一种致癌基因，并与ESCC不良预后有关[3]。

综上所述，本研究结果表明BCCIP与胃癌的临床指标之间具有一定的相关性，有望成为一种为临床判断胃癌预后的新型标记物，但目前仍需更多的前瞻性临床实验研究来验证BCCIP的表达异常对评估胃癌预后的意义。