上饶地区RhD阴性献血者表型及不规则抗体鉴定分析

汪全民，万琳

（江西省上饶市中心血站输血研究室，上饶 334000）

随着临床输血事业的不断发展，对人类红细胞血型系统的认识和研究更加深入，发现Rh血型系统的复杂性以及对临床输血的重要性，ABO血型系统因较少产生不规则抗A、抗B且同型输注，对临床安全输血困扰较少，而Rh血型系统除D抗原同血型输注外，对其它有重要临床意义的抗原（C、c、E、e）未进行同型相输，多次输注Rh抗原不匹配的血液极易产生不规则抗体，研究发现，Rh血型系统中D抗原免疫原性最高，其次为E抗原[1]，抗原抗体不匹配输血可引起溶血性输血反应[2]。因此，采供血机构检测献血者RhC、c、E、e抗原和血型不规则抗体，对血站合理化储存稀有血型血液，满足特殊患者的用血需求有重要现实意义。为了提高临床安全输血，减少患者输血反应，获取上饶地区Rh阴性献血者Rh表型及不规则抗体的构成，本文通过回顾分析近两年本血站检验科送检的初筛RhD阴性献血者检测结果，旨在为临床安全输血提供支持和依据，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象2020年7月至2021年6月本血站检验科送检的初筛RhD阴性标本299例，年龄18～60周岁的健康无偿献血者（剔除重复献血者）。

1.2 仪器与试剂KA-2200型离心机（日本Kubota公司）；DHW-600型电热恒温水箱（北京国华医疗器械厂）；抗D（IgG+IgM）试剂（英国Millipore公司）；RhD(IgM)血型定型试剂、抗D(IgG)试剂、单克隆IgM抗血清抗C、抗c、抗E、抗e、抗体筛选红细胞、抗体特异性鉴定谱细胞、多特异性抗人球蛋白试剂（上海血液生物医药有限责任公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 Rh(D）阴性确认RhD(IgM)血型试剂应用梯度板盐水法筛选献血者，初筛RhD阴性献血者使用抗D(IgG)和抗D（IgG+IgM）试剂进行Rh(D）阴性确认，以排除弱D和部分D，按照试剂说明书的操作要求在试管中滴加抗D试剂1至2滴，再滴加2%～5%的待检红细胞1滳，1000 g离心15秒观察结果，如无凝集在37℃恒温水箱中孵育30分钟，按间接抗人球蛋白试验（IAT）进行测定。

1.3.2 Rh血型抗原检测 应用试管盐水法，单克隆抗C、抗c、抗E、抗e血清检测RhD阴性献血者红细胞相应抗原，按照试剂说明书操作要求在各试管中分别加入抗血清1滴和2%～5%的被检者红细胞1滴，室温反应10分钟后，1000 g离心15 s观察结果。

1.3.3 抗体筛查及鉴定 参照《全国临床检验操作规程》（第4版）的方法对标本进行抗体筛查及鉴定[3]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 22.0软件进行分析，男性与女性献血者不规则抗体阳性通过四格表检验进行比较分析，P＜0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 初筛检出299份RhD阴性标本经Rh(D）阴性确认D变异型8份（2.68%），RhD阴性291份。见表1。

2.2 Rh表型检测情况291份RhD阴性标本C、c、E、e抗 原 表 现 型 分 别 是ccdee（50.5%）、Ccdee（36.8%）、CCdee（8.9%）、ccdEe（2.4%）、CcdEe（1.0%）、CCdEe（0.4%）表1。RhD阴性献血者E、C抗原阳性率见表2。

表1 291份RhD阴性标本C、c、E、e抗原表现型分布

表2 RhD阴性献血者E、C抗原构成比

2.3 不规则抗体鉴定结果299例RhD阴性标本中检出不规则抗体8例（2.68%），抗体特异性鉴定结果见表3。

表3 8例不规则抗体阳性结果分布

2.4 男女献血者不规则抗体结果比较分析P＞0.05性别差异无统计学意义，见表4。

表4 献血者男女不规则抗体阳性比例结果分析

2.5 3 例IgG抗-D抗体献血者调查随访情况（1）献血者余某，女，53岁，B型Ccee，25年前因手术输血一次，有妊娠史，孕有RhD阳性子女2名；（2）献血者曹某，女，24岁，B型ccee，无输血史，有妊娠史，孕有RhD阳性子女1名；（3）献血者刘某，女，55岁，O型ccee，1987年因剖腹产输血一次，有妊娠史，丈夫血型RhD阳性，孕有小孩一名，RhD血型不详。

3 讨论

临床输血是救治患者的重要治疗手段，输血存在一定的风险性，提高输血的安全性一直是临床关注的重点[4]。对于稀有血型受血者，快速找到相合的血液至关重要，这就需要采供血机构根据不同的ABO血型及Rh表型合理化储存血液。本次调查的RhD阴性献血者中，ABO血型分布特点为O＞A＞B＞AB,与相关文献报道的分布频率一致[5-6]，ABO血型在Rh表型中的分布频率与总体分布频率基本一致，有利于血库合理储存相应血液。对于Rh阴性血型表现型目前发现共有8种,而本次调查的291名RhD阴性献血者Rh表现型检出6种，以ccdee（50.5%）为主，其次是Ccdee（36.8%)，CCdee（8.9%）、ccdEe（2.4%）、CcdEe（1.0%）、CCdEe（0.4%），未检出稀有ccdEE和CCdEE表型，本地区Rh表现型分布特点与相关文献报道类似[7-9]。调查发现（表2），RhE抗原阳性率在RhD阴性献血者中较低（3.78%），而RhC抗原阳性率与抗原阴性率较接近，由此表明，RhD阴性患者输注D阴性血液时，在Rh表型未同型输注时，产生抗C抗体的概率大大高于产生抗E抗体。因此，对于需要反复输血治疗的RhD阴性患者，RhC同型输注比RhE同型输注更有意义，避免因多次抗原刺激从而产生抗C抗体，造成后期可能无法找到完全匹配的血液进行输注，只能冒险输注不完全相合的血液[10]。ccdee和Ccdee两种表型合计87.3%，Rh阴性血液输血电子配血，这两种血型匹配度高，因此，血站建立一支固定的Rh表型献血者队伍，特别是Rh稀有表型，可为临床大部分稀有血型患者用血实现电子配血，以满足Rh阴性患者安全用血的需求，为患者及时安全输血提供支持。

不规则抗体相对ABO血型系统中规律产生抗A、抗B抗体而言的非意料之中的意外抗体，其主要通过母婴血型不合引发妊娠及输血等免疫刺激而产生的IgG类抗体[11-12]。此次调查的299例标本不规则抗体筛查阳性8例（2.68%），略高于文献报道的在健康人群中检出率为0.3%～2.0%[13]，可能与调查的标本量少造成结果偏差有关。本次调查的8例不规则抗体阳性中，7例女性献血者，其中3例IgG类抗-D抗体，经随访调查可知，产生IgG类抗-D抗体的均有妊娠史的女性，其中两位有输血史，另一位无输血史，但孕有RhD阳性子女一名。据文献报道，RhD阴性个体经由输血、怀孕等接触D抗原后,产生抗体的几率明显大于其他血型抗原[14]。另外，产生IgG抗-E和IgG抗-C的两位女性献血者，年龄分别是22岁和44岁，因未能取得联系，不能确定产生的原因，其Rh表型分别是Ccdee和ccdee，RhE抗 原 和RhC抗 原 的 表 达 与RhD关系密切，在本次调查的RhD阴性献血者中，RhE抗原表达极低（3.78%），而在RhD阳性人群中，RhE抗原阳性率为45.36%[9]，因此，在女性妊娠RhD阳性胎儿概率极高的情况下，同样怀孕RhE阳性胎儿的概率也较高，提示，RhD阴性女性因妊娠刺激产生抗-E抗体的可能性较大。不同的是，RhC在RhD阴性人群中抗原表达阳性率较高（47.08%），在RhD阳性人群中，RhC抗原阳性率高达89.94%[9]，同理说明，在RhD阴性女性人群中，因妊娠刺激产生抗-C抗体的概率可能比RhD阳性妊娠刺激产生抗-C的概率更高。

本次调查的女性献血者抗体阳性比例（4.46%）高于男性（0.7%），连续校正卡方检验P＞0.05，性别差异无统计学意义，可能与不规则抗体阳性例数较少有关。据文献报道，女性献血者不规则抗体阳性率明显高于男性[15]，随着年龄的增长，女性献血者妊娠次数的增加，胎母血型不合的免疫刺激的机会更多，产生不规则抗体的概率更大，同时发生新生儿溶血病的风险增高。因此，筛查女性献血者不规则抗体有其必要性，特别是输注非红细胞制品的患者，输注前应筛查不规则抗体或次侧交叉配血，避免发生不规则抗体阳性血液输给具有相应抗原的患者体内,造成溶血性输血反应,甚至危及患者的生命[16]。

综上，分析献血者Rh表型和不规则抗体的构成及分布，有利于完善Rh献血者资料库，对于稀有血型患者实现电子配血和精准输血进行前期探索，为采供血机构合理化储存稀有血型的血液提供数据支持，便于多次输血的患者同表型输注，以满足稀有血型患者的安全输血需求。