苍耳中甾族化合物研究

★ 张祖良 盛天露 颜蓉 陈钟文 刘华（.樟树市人民医院药剂科 江西 樟树 3300；.江西中医药大学药学院 南昌 330004）

苍耳Xanthium mongolicumKitag.为菊科苍耳属一年生草本植物，临床常用于治疗类风湿性关节炎、鼻炎、疱疹和癌症等［1］。药典记载苍耳草味苦、性寒，有小毒，具有散风寒、祛风湿、解毒杀虫的功效［2］。现代研究表明苍耳草具有抗菌、抗肿瘤、抗炎、镇痛及抗氧化等药理活性［3］。

课题组前期在美国得州大学西南医学中心发现江西产苍耳草乙醇提物经大孔树脂乙醇洗脱部位具有抑制程序性细胞坏死的生理活性［4］，并对其有效部位进行了系统的化学成分分离，经NMR、MS 等波谱技术鉴定其结构。课题组此前已报道分离了14 个化合物［4］，此次又分离得到6 个甾族化合物，分别鉴定为豆甾醇（1）、stigmasta-4,22-dien- 3-one（2）、stigmastan-4-en-3-one（3）、7-oxo-stigmasterol（4）、β-谷甾醇（5）、β-谷甾醇棕榈酸酯（6），其中化合物2，3，4，6 为首次从苍耳属中分离得到。

那么，到底怎样去理解文化?我曾给文化作了一个定义性的说明:文化是相对稳定的人为的程序和为人的取向的统一。文化的根本在于人为的程序和为人的取向这样一种关系。为此我先后写过几篇文章，对这个观点加以论证。这也可以看作是一个假说。因为关于文化的定义非常多。任何一个新的文化定义，都可以作为一种假说提出来。我关于文化的定义也可以说是一个假说，问题是需要加以论证。我一直试图作进一步的论证。前年我出的一本书，题目叫《社会的文化程序》，就是把整个社会看作由文化程序来调控的过程。

1 材料

2695 Alliance Separations Module 型高效液相色谱仪和1525 型制备高效液相色谱仪［Lichrospher C18制备液相色谱柱（30 mm × 250 mm，10 μm）］（美国Waters 公司）；Inova-600 型超导核磁共振波谱仪（美国Varian公司）；AB Triple QUAD 4500质谱仪（美国AB SCIEX 公司）；WFH-203（ZF-1）型三用紫外分析仪（上海精科实业有限公司）；AE100 型电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）。

本系统设计的体温数据采集节点采用便携式佩戴，在数据采集的过程中为了避免脉冲干扰。设计了基于SVM的改进型Kalman滤波算法。卡尔曼滤波器主要运用算法估计原理，在和被提取信号有关的量测量之间提取出所需要的信号[12]，以K-1时刻的最优估计x(k-1|k-1)为准，预测K时刻的状态变量x(k|k-1)，同时又对该状态进行观测，得到观测变量z(k)，再在预测与观测之间进行分析从而得到K时刻的最优状态估计x(k|k)。当系统启动时不存在x(k-1|k-1)等值，对此需要设定初值。如果在程序中设定固定的值，同时如果采集的数据一开始就含有干扰信号，卡尔曼滤波无法进行有效滤波。

水彩作品《纽约北园》（又名《纽约公园》）在1932年的《艺彀》（初集）刊出图片时为无款（并误将画面上下颠倒），可知此款为后补（图9）。

化合物1：无色针状晶体（氯仿），ESI-MSm/z：413.1［M+H］+，分子式为C29H48O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.69（3H，s，H-18），0.79（3H，t，J=6.8 Hz，H-29），0.84（3H，d，J=6.4 Hz，H-26），0.85（3H，d，J=6.4 Hz，H-27），1.01（3H，s，H-19），3.51（1H，m，H-3），5.01（1H，dd，J=15.1，8.4 Hz，H-23），5.15（1H，dd，J=8.5，15.1 Hz，H-22），5.33（1H，d，J=5.08 Hz，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.43（C-1），29.52（C-2），72.03（C-3），42.53（C-4），140.98（C-5），121.80（C-6），32.09（C-7），32.03（C-8），51.38（C-9），36.78（C-10），21.68（C-11），39.95（C-12），42.46（C-13），57.08（C-14），24.56（C-15），29.09（C-16），56.18（C-17），12.29（C-18），19.58（C-19），40.68（C-20），21.46（C-21），138.83（C-22），129.69（C-23），51.43（C-24），31.87（C-25），21.93（C-26），19.19（C-27），25.58（C-28），12.49（C-29）。结合质谱信息，氢谱、碳谱数据与文献［5］对比一致，鉴定该化合物为豆甾醇。

2 提取与分离

化合物2：无色针状晶体（氯仿），ESI-MSm/z：411.6［M+H］+，分子式为C29H46O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.72（3H，s，H-18），0.81（3H，d，J=6.2 Hz，H-27），0.81（3H，t，J=7.4 Hz，H-29），0.84（3H，d，J=6.3 Hz，H-26），1.01（3H，d，J=6.7 Hz，H-21），1.19（3H，s，H-19）为6 个甲基质子信号，13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：35.62（C-1），34.13（C-2），199.82（C-3），123.88（C-4），171.85（C-5），32.92（C-6），32.05（C-7），35.77（C-8），53.82（C-9），38.63（C-10），21.33（C-11），39.85（C-12），42.33（C-13），56.82（C-14），24.26（C-15），28.93（C-16），56.23（C-17），12.32（C-18），17.82（C-19），41.23（C-20），21.32（C-21），138.26（C-22），129.58（C-23），51.68（C-24），32.03（C-25），21.26（C-26），19.06（C-27），25.46（C-28），13.56（C-29）。结合质谱信息，且氢谱、碳谱数据与文献［6］对比一致，鉴定该化合物为stigmasta-4，22-dien-3-one。

化合物3：无色油状（氯仿），HR-ESI-MSm/z：413.1778［M+H］+，分子式为C29H48O。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.72（3H，s，H-18），0.83（3H，d，J=6.5 Hz，H-27），0.83（3H，d，J=7.6 Hz，H-26），0.86（3H，t，J=7.3 Hz，H-29），0.91（3H，d，J=6.5 Hz，H-21），1.18（3H，s，H-19），5.72（3H，s，H-4）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：35.68（C-1），33.87（C-2），199.63（C-3），123.84（C-4），171.88（C-5），32.82（C-6），32.08（C-7），35.63（C-8），53.82（C-9），38.62（C-10），21.11（C-11），39.66（C-12），42.49（C-13），55.84（C-14），24.23（C-15），28.21（C-16），56.20（C-17），11.94（C-18），17.38（C-19），36.13（C-20），18.73（C-21），33.96（C-22），26.06（C-23），45.82（C-24），29.65（C-25），19.82（C-26），19.05（C-27），23.24（C-28），12.09（C-29）。结合质谱信息且氢谱、碳谱数据与文献［7］对比一致，鉴定该化合物为stigmastan-4-en-3-one。

乙酸乙酯部（E3，59.67 g）使用乙醇溶解后，经硅胶柱以二氯甲烷∶甲醇（150∶1～0∶1）进行梯度洗脱，每个比例冲洗4 个柱体积。运用薄层色谱法对冲洗下的流分进行展开，将具有相同Rf值的流分进行合并，得CA-1～11 组分。CA-1～4 均约为15 mg，CA-5（12 g），CA-6（7 g），CA-7（9 g），CA-8（10 g），CA-9（9 g），CA-10（19 g），CA-11（21 g）。对CA-11、CA-10 分别运用高效液相色谱进行分离，最终得到了化合物4（5.43 mg）和化合物6（4.26 mg）。

化合物4：白色无定型粉末（甲醇），HR-ESIMSm/z：449.3398［M+Na］+，分子式为C29H46O2。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.68（3H，s，H-18），0.78-0.87（9H，m，H-26，27，29），1.02（3H，d，J=6.4Hz，H-21），1.20（3H，s，H-19），3.67（1H，m，H-3），5.02（1H，dd，J=14.9，8.5Hz，H-23），5.17（1H，dd，J=15.3，8.5Hz，H-22），5.59（1H，d，J=1.8Hz，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ:202.72（C-7），164.89（C-5），138.24（C-22），129.64（C-23），126.27（C-6），70.69（C-3），54.84（C-17），51.37（C-24），50.18（C-9），50.09（C-14），45.54（C-8），43.13（C-13），41.96（C-4），40.41（C-20），38.73（C-12），38.44（C-10），36.50C-1），31.34（C-16），26.56（C-15），25.52（C-28），21.57（C-21），21.36（C-11），21.21（C-26），19.15（C-27），17.46（C-19），12.40（C-29），12.35（C-18）。结合质谱信息且氢谱、碳谱数据与文献［8］对比一致，鉴定该化合物为7-oxo-stigmasterol。

苍耳药材于2017年7月采于江西南昌，由江西中医药大学刘贤旺教授鉴定为菊科苍耳属植物苍耳Xanthium mongolicumKitag.的地上部分，凭证标本保存于江西中医药大学标本室（ ZY-20170701）。

3 结构鉴定

2,2-联苯基-1-苦基肼基（DPPH）和维生素C均购自上海麦克林生化科技有限公司；LH-20 羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20，瑞典GE Healthcar公司）；柱色谱及薄层色谱用硅胶（200 目，青岛海洋化工厂产品）；水杨酸钠（天津市大茂化学试剂厂）；硫酸亚铁（西陇化工股份有限公司）；H2O2（西陇化工股份有限公司）；DPPH（东京化成工业株式会社）；半制备HPLC 用甲醇为色谱纯（西陇化工股份有限公司）；提取分离用试剂均为分析纯；水为娃哈哈纯净水。

自然阴干的10 kg 药材粉碎后过筛，95%乙醇冷浸提取，每次7 d，提取3 次，合并提取液，减压回收溶剂后得到提取物总浸膏800 g。总浸膏以适量乙醇溶解，拌样，装入已处理好的大孔树脂柱中，依次以不同浓度乙醇梯度洗脱，得到水洗脱部位（A，200 g）、30%乙醇洗脱部位（B，80 g）、50%乙醇洗脱部位（C，120 g）、70%乙醇洗脱部位（D，60 g）和90%乙醇洗脱部位（E，150 g）。90%乙醇洗脱部位E（150 g）经硅胶柱分别以石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇按15 个柱体积顺序洗脱，减压回收溶剂得到石油醚部（E1，0.67g）、二氯甲烷部（E2，47.28 g）、乙酸乙酯部（E3，59.67 g）、甲醇部（E4，20.92 g）。

风险投资在近年“共享经济”的飞速发展中被人所熟知，是投资中介向特别有潜能的高新技术产业投入风险资本后，实现利益共享、风险共担的一种投资方式。大学生创业遇到的最大问题就是资金不足。以Dormi为例，在校创业阶段，有政府提供的项目资金与学校举办相关活动的奖金。在转型进入更大市场时，依靠前期盈利与创始团队家庭支持是不够的，必须寻求社会资金的帮助。对于风险投资公司来说，他们也希望寻找到有发展潜力的中小型项目，通过早期“资本换股权”，从而在未来公司成熟后以更高价格将股权卖出获得收益[2]。

甲醇部（E4，20.92 g）经硅胶柱，以石油醚∶乙酸乙酯（9∶1～0∶1）梯度洗脱，得到E4-1～11 组分。E4-10 经硅胶柱以石油醚∶丙酮（9∶1～0∶1）洗脱，得到化合物1（256.18 mg）、化合物2（58.23 mg）、化合物3（4.56 mg）和化合物5（3.25 g）。

为落实 《生态文明体制改革总体方案》，探索绿色金融发展有效路径，2016年8月，中国人民银行、财政部等七部门印发 《关于构建绿色金融体系的指导意见》，提出支持和鼓励绿色投融资的一系列激励措施。2017年6月，国务院常务会议决定在浙江、江西、广东、贵州、新疆5省（区）选择部分地方建设绿色金融改革创新试验区，充分发挥绿色金融在调结构、转方式、促进生态文明建设、推动经济可持续发展等方面的积极作用。党的十九大报告明确指出推进绿色发展，加快建设绿色生产和消费的法制和政策导向，构建市场导向的绿色技术创新体系，发展绿色金融，壮大节能环保产业、清洁生产产业、清洁能源产业发展。

化合物5：白色针状结晶（氯仿），ESI-MSm/z：415.2［M+H］+，分子式为C29H50O。加入10%硫酸-乙醇溶液，样品呈紫色斑点。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：0.68（3H，s，H-18），1.03（3H，s，H-19），0.83（3H，d，J=6.9 Hz，H-26），0.82（3H，d，J=6.9 Hz，H-27），0.85（3H，d，J=7.3 Hz，H-29），0.91（3H，d，J=6.5 Hz，H-21），3.49（1H，m，H-3），5.44（1H，dd，J=5.1 Hz，1.6 Hz，H-6）。13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.13（C-1），31.57（C-2），71.62（C-3），42.89（C-4），140.21（C-5），122.09（C-6），31.63（C-7），31.62（C-8），50.49（C-9），36.46（C-10），21.48（C-11），39.25（C-12），42.29（C-13），56.86（C-14），24.69（C-15），28.68（C-16），56.65（C-17），12.53（C-18），19.63（C-19），36.32（C-20），18.79（C-21），34.31（C-22），26.45（C-23），45.89（C-24），29.4（C-25），18.79（C-26），19.12（C-27），23.48（C-28），12.03（C-29）。结合质谱信息且氢谱、碳谱数据与文献［9］对比一致，鉴定该化合物为β-谷甾醇。

化合物6：无色针晶（三氯甲烷），分子式为C45H80O2。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.37（1H，d，J=4.6 Hz，H-6），3.54（1H，m，H-24），2.36（2H，t，H-4），2.35（2H，m，H-2'），1.08（3H，s，H-19），0.81-0.92（15H，m，H-12，16，16'，26，27），0.69（3H，s，H-18）13C-NMR（150 MHz，CDCl3）δ:12.00（C-18），12.12（C-29），14.27（C-16'），18.92（C-21），19.17（C-27），19.54（C-19），19.97（C-26），21.23（C-11），22.87（C-15'），23.21（C-28），24.61（C-15），24.88（C-3'），26.32（C-23），28.39（C-16），29.29（C-25，4'，5'，6'），29.51（C-7'），29.62（C-8'），29.83（C-9'），29.85（C-10'-13'），31.79（C-2），32.05（C-14'），32.07（C-8），32.12（C-7），34.09（C-22），34.15（C-2'），36.29（C-20），36.65（C-10），37.39（C-1），39.92（C-12），42.43（C-4），42.47（C-13），45.98（C-24），50.27（C-9），56.19（C-17），56.91（C-14），71.97（C-3），121.87（C-6），140.90（C-5），178.72（C-1'）。结合质谱信息且氢谱、碳谱数据与文献［10］对比一致，鉴定该化合物为β -谷甾醇棕榈酸酯。

4 讨论

甾族化合物是广泛存在于生物体组织内的一类重要天然有机化合物，具有多种药理活性。此次报道的6 个甾醇类化合物，如豆甾醇及其衍生物，能促进产生血纤维蛋白溶酶的激素因子，可作为血纤维溶解触发素，起到预防血栓症的作用和治疗高血压、冠心病等心血管疾病。豆甾醇具有抗骨性关节炎［11］、降低胆固醇、抗炎、抗氧化、抗肿瘤［12］等活性，还可与在水中能形成分子膜的脂质、植物生长激素结合，生成植物激素。近年来，经动物实验表明，豆甾醇可抑制化学致癌剂诱发的大肠癌［13］。血小板活化因子（platelet activating factor，PAF）是一种与炎症、过敏、哮喘、风湿等有关的脂类介质。寻找抑制剂可能为发现治疗以上疾病的新药提供依据。以PAF 引起的血小板聚集实验发现化合物stigmastan-4-en-3-one 具有中等强度的抑制PAF 活性，IC50为2.63×10-5mol/L［14］。

本项研究不仅丰富了苍耳属植物的化学成分库，而且这些化合物药理活性的多样性表明该类成分值得进一步研究。后期将对分离得到的甾族化合物展开一系列药理活性筛选，为拓宽苍耳的药用价值奠定了一定的物质基础。