漳州市葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症筛查情况及其分子遗传学特征

陈宝英 刘文煌 陈田田 林巧云 许德南

福建省漳州市妇幼保健院检验科，福建漳州 363000

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose 6-phosphatede hydrogenase，G6PD）缺乏症属于临床患病率较高的人类酶缺陷遗传病，感染、药物、食用蚕豆等均是诱发该病发生的主要因素，其主要临床表现为高胆红素血症及急性溶血性贫血，疾病发生后有较大的几率会诱发新生儿发生病理性黄疸，病情严重者还会造成核黄疸发生，导致儿童智力发育障碍[1,2]。漳州市自2017 年开始全面开展G6PD 缺乏症的筛查与确诊工作，并对其分子遗传学特征进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年1 月至2021 年12 月在漳州市出生的30 000 例新生儿为研究对象，其中男17 355 例，女12 645 例；采集新生儿足跟血，进行滤纸干血片G6PD 荧光斑点法测定。本研究经漳州市妇幼保健院伦理委员会审批通过，入选新生儿家长均对本研究知情同意。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 根据《新生儿疾病筛查管理办法》[3]，对出生3d 的新生儿采集其足跟外侧血滴在采血滤纸片（浙江博圣生物技术股份有限公司生产）上，使血滴自然渗透，收集4 个血斑。将滤纸片水平放置在室内，做到避光处理，避免臭氧、紫外线的影响，在自然通风条件下晾干。用塑料袋将晾干的血片封装保存，2～8℃冰箱冷藏，送至漳州市新生儿疾病筛查中心进行统一检测。

1.2.2 标本筛查 G6PD 测定试剂盒（荧光斑点法，浙江博圣生物技术股份有限公司）及全自动荧光免疫分析仪[珀金埃尔默医学诊断产品（上海）有限公司]对G6PD 酶活性进行测定。参考值范围：女28.5U/GHB，男22.5U/GHB。如低于上述范围则属于初筛阳性，需联系患儿进一步筛查确诊。

1.2.3 确诊方法 ①基因诊断法确诊[4]：G6PD 基因突变检测试剂盒（厦门至善生物科技有限公司），SLAN-96S 型全自动医用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）分析系统（上海宏石医疗科技有限公司），采用荧光PCR 溶解曲线法检测。试剂盒内有9 种我国主要类型的致病性变异。②G6PD酶活性测定法[5]：取患儿静脉血2ml 置入酶法试剂盒（北京利德曼生化公司）中，采用008AS 全自动生化分析仪（日立公司）进行连续监测速率法检测。参考值范围：G6PD 酶活性值低于1300U/L 即可确诊。上述两种方式任一种诊断阳性即可确诊，而对第二种检测方式诊断阳性而第一种检测方式诊断阴性者，应给予一代基因序列测定探寻有无新的突变位点。

1.2.4 致病性变异分类标准 分为Ⅰ～Ⅳ类[6,7]：Ⅰ类指酶活性测定结果低于正常值下限的10%，属于酶活性严重缺乏，同时患儿存在先天性非球形细胞溶血性贫血；Ⅱ类指酶活性测定结果低于正常值下限的10%，属于酶活性严重缺乏，但未伴有上述类型贫血；Ⅲ类指酶活性测定结果在正常值下限的10%～60%，属于酶活性中度缺乏；Ⅳ类指酶活性测定结果在正常值下限的60%～150%，属于酶活性轻度缺乏。其中酶活性正常参考值为：男≥22.5U/dl，女≥28.5U/dl。

1.3 观察指标

记录30 000 例新生儿中G6PD 缺乏症初筛阳性率及确诊阳性率，分析确诊阳性患儿的分子遗传学特征。

1.4 统计学方法

采用SPSS 26.0 统计学软件对数据进行分析和处理，计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数（百分率）[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 30 000 例新生儿中G6PD 缺乏症初筛阳性率及确诊阳性率情况

2018 年1 月至2021 年12 月间漳州市出生的30 000 例新生儿全部接受滤纸干血片G6PD 荧光斑点法测定，初筛阳性新生儿1522 例，初筛阳性率5.07%。1522 例初筛阳性新生儿全部回院接受基因检测及G6PD 活性酶学诊断，最终确诊1321 例，其中男962 例，女359 例，确诊率4.40%。

2.2 确诊阳性患儿的分子遗传学特征分析

1321 例确诊患儿中，共检出9 种基因突变型，分别为c.517T>C、c.95A>G、c.487G>A、c.1024C>T、c.1376G>T、c.1388G>A、c.392G>T、c.1360C>T、c.871G>A ；其中以c.1024C>T、c.1376G>T、c.1388G>A 为检出率最高的三种基因突变类型，致病性分类情况经Kruskal-WallisH检验，得出三项对酶活性影响差异有统计学意义（P<0.05）；对应患儿数分别为250例、330例、410例，共990例，占比74.94%。c.487G>A、c.1360C>T 两种基因突变类型女性占比高于男性，其余基因突变类型均为男性占比高于女性，差异有统计学意义（P<0.05），酶活性呈轻中度缺乏，见表1。

表1 阳性患儿的分子遗传学特征[n（%）]

2.3 确诊阳性患儿致病性变异分类特点

按照致病性变异分类标准，对确诊的1321 例患儿分类后发现以Ⅳ类为主，共861 例，占比65.18%（861/1321）。女患儿以Ⅳ类居多，男患儿为Ⅱ～Ⅳ类，但以Ⅲ～Ⅳ类为主，见表2。

表2 确诊阳性患儿致病性变异分类特点

3 讨论

红细胞膜的G6PD 缺陷造成还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸合成量降低，该磷酸是谷胱甘肽还原酶辅酶，是红细胞戊糖磷酸途径的重要物质，对红细胞膜的稳定性具有直接的影响作用，还原型谷胱甘肽生成量不足，导致机体无法抵抗氧化损伤，红细胞受到破坏诱发溶血[8,9]，临床将该病称为G6PD缺乏症，属于临床常见遗传病[10-13]。

G6PD 缺乏症是因调控G-6-PD 的基因突变所致，呈现X 连锁不完全显性遗传的特征。由于该病缺乏有效的治疗方法，因此患者应注意避免导致该病发作的诱因，如伯氨喹啉型药物的使用，新生儿疾病筛查是用于该疾病早期诊断的主要方式。

本研究对2018 年1 月至2021 年12 月漳州市出生的30 000 例新生儿进行筛查，最终确诊G6PD缺乏症患儿1321 例，确诊率4.40%；且男性新生儿患病率高于女性，故早期疾病筛查至关重要[14]，与其他地区G6PD 缺乏患病率相比，漳州市新生儿患病率较高，考虑与G6PD 在胚胎早期生物合成中有重要的参与作用有关。G6PD 具有提高细胞对病毒感染敏感度、加速细胞衰老、调节细胞增殖等对胚胎发育造成损害的作用，进而对有核细胞病理生理过程造成影响。同时，本市人口流动性大也是引发患病率增高的主要因素。对1321 例确诊患儿进行的基因检测发现，以c.1024C>T、c.1376G>T、c.1388G>A 为检出率最高的三种基因突变类型，三种基因型是导致漳州地区G6PD 缺乏症发生的主要基因型，与我国常见的3 种突变类型c.1376G>T、c.1388G>A、c.95A>G 有少许差异，考虑与地区差异性有关。基因突变类型中c.1388G>A 占比28.42%（270/950），在所有基因突变中占比最高。因此在儿童基因型筛查中需重视对上述基因型的筛查。从不同性别的患儿基因特征来看，女性 c.487G>A、c.1360C>T 两种基因突变占比高于男性，其余基因突变类型均为男性占比高于女性，因此上述两种基因突变虽然在整体突变中占比较少，但对女性患儿要给予足够重视，与张玲等[15]的观点一致。按照致病性变异分类标准对1321 例确诊患儿分类后发现以Ⅳ类为主，共861 例，占65.18%，说明总体发病情况较轻，重症率低。

综上所述，做好G6PD 缺乏症筛查对漳州市新生儿意义重大。随着对遗传病认知的加深，我国目前已增加对先天性基因疾病的防控力度，了解本地G6PD 缺乏症的发病特点和基因型特性，有利于推动本地G6PD 缺陷新生儿防控工作的顺利进行。