基于Hp 影响Wnt/β-catenin信号通路探讨李可学术思想之三畏汤对瘀毒内结型胃癌机制的影响

李明阳 赵海东 张文福

1 Hp 影响Wnt/β-catenin 信号通路的机制探讨

胃癌是一种起源于胃上部皮肤的恶性肿瘤。在我国,胃癌的发病率仅次于肺癌,死亡率居第三位。全球每年约有120 万胃癌新发病例,其中中国约占40%。早期胃癌在中国的比例很低,只有20%左右,发现时大多处于晚期,总体5 年生存率不到50%。近年来,随着胃镜检查的普及,早期胃癌所占率逐步增加,而且,它已经威胁到了人类的健康,而导致胃癌最重要的因素是幽门螺杆菌(Hp)感染,全世界80%的胃癌都跟Hp 感染有关,胃癌Ⅰ类致癌因子在1994 年就已经被世界卫生组织(WHO)定位,另外Hp 感染患者发生胃癌的风险是非感染患者的4～6 倍［1-3］。目前中晚期胃癌治疗的方法还是以外科及放化疗为主的综合治疗,但是,大多数患者中,无论是保守治疗还是通过手术治疗,其效果都不太理想,因此,寻找胃癌发生的关键因素,运用中医药参与改善患者的临床症状和预后是目前可以探讨的方法之一。胃癌的发生方式通常包括慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、正常胃黏膜、慢性萎缩性胃炎、增生和胃癌。其与肿瘤基因肿瘤抑制基因失活、过活化或者是调控失败,凋亡和抗凋亡基因表达失衡等。从现在研究来看,Fas/Fas 配体、Notch、c-Jun 氨基末端激酶、核因子-κB、Wnt 等与细胞增殖和生长有关的细胞信号转导通路和胃癌的发生、发展是有关的。调节细胞增殖、分化、迁移、凋亡等生理活动的关键信号其中之一就是Wnt 通路。经典的Wnt/β-catenin 途径是配体蛋白与LDL 受体相关蛋白5/6 和卷曲相关蛋白结合在细胞膜表面形成三聚体。抑制Axin、GSK-3β、腺瘤性息肉病(Adenomatous polyposis coli)和腺瘤性息肉病(Adenomatous polyposis coli)的活性。APC 基因降解复合物与β-catenin 的稳定结合抑制了β-catenin 的降解。β-catenin 转移到细胞核后与T 细胞转录因子/淋巴增强子相互作用,激活下游靶基因。Wnt/β-catenin 信号通路激活的核心是β-catenin 在细胞质中积累,然后转移到细胞核,通路成分的任何改变都可能导致信号转导异常。与β-catenin 结合的基因组成的降解复合物的稳定性抑制了β-catenin 的降解。在正常的胃上皮细胞中,所有细胞中基本都有Wnt 配体蛋白,但Wnt 信号通路只是在胃窝底部被激活。这是因为肌层黏膜中的成纤维细胞可以分泌特定的壁层和基底反应蛋白(RSPOs)［4-6］。RSPOs 是一个新发现的稳定Wnt 受体和增强Wnt/β-catenin 信号通路的分泌蛋白家族。生理上,Wnt/β-catenin 信号通路激活E3 泛素连接酶和下游靶基因,介导配体/卷曲蛋白/LDL 受体相关蛋白5/6 三聚体泛素的内吞和降解,下调信号转导。这种负反馈是平衡Wnt 信号的重要机制。然而,RSPOs与富亮氨酸重复G 蛋白偶联受体结合成二聚体,消除了RNF43/ ZnRF3 对Wnt/β-catenin 通路的抑制,导致通路的持续激活。因此,可以认为Wnt/β-catenin信号通路是维持胃内细胞稳态的关键信号通路,Wnt/β-catenin 信号通路的激活是胃癌发生的关键驱动因素。参与肿瘤细胞周期的调控,促进肿瘤细胞的增殖和间充质转化,在上皮细胞的发育、侵袭转移乃至胃癌的抵抗中发挥重要作用。Hp 感染在一定程度上激活Wnt/β-catenin 信号通路。加速胃癌的发生进展和术后肿瘤的复发率,在很大程度上决定了胃癌患者的预后。

2 胃癌分型探讨

有关胃癌,在古代医书中,《归章远行》中就有记载“肿瘤”一词,《黄帝内经》中有“噎膈、反胃、膈塞”类似于癌症的症状,如记载“隋,巢元芳”之致病证,分别论述了“祛块”、“积块”、“食扼”、“反胃”等疾病,其中包括癌症的症状,疾病的病因病机《黄帝内经》认为,主要是情绪失调、内客感冒。《苏文·同论真假论》中说:“膈完全闭锁,上下梗阻为突忧之病。”《藏经:溃疡与巫果论》认为“脏腑含毒而不流”是致癌的重要原因。按照中医辨证分型原则,中医内科学将胃癌分为：肝胃不和、瘀毒内结、痰湿凝滞、脾胃虚寒、胃热伤阴五个证型,中晚期胃癌主要是痰湿凝滞、瘀毒内结型,而瘀毒内结是其发展的最终结果,多发生在脏腑、阴阳、气血失调的基础上,在气虚、外邪侵入、痰、湿、气、瘀、毒等中风的基础上,随着时间的推移,逐渐积累。其临床特点是胃包块,表面粗糙、坚硬如石,并伴有脏腑虚证的表现。且由于胃癌患者全身状况差,加之放化疗副作用较大,因此探索有效的中医药诊治手段对于瘀毒内结型等中晚期胃癌患者的预后有重要的临床意义。而中医药在改善胃癌患者临床症状、提高生存质量、延缓肿瘤的进展、减轻化疗的毒副作用、减少耐药、减少复发率等多方面发挥着重要作用。

3 李可三畏汤治疗瘀毒内结型中晚期胃癌机制

李可老中医认为：本病当属奇经八脉病变,缘由正气先虚,痰湿内生、寒伤督脉,真阳失运,日久,浊阴僭居阳位,湿痰死血,深伏督脉要冲,而成有形癥积,本病因虚成实,治当养正消积,扶正温阳为先,遵伤寒、金匮之理,邪之来路即邪之去路。故李可老中医在此原则下拟定三畏汤治疗瘀毒内结型中晚期胃癌疗效显著,药物组成：红参、五灵脂、公丁香、郁金、肉桂、赤石脂。此方由三对畏药相伍,相畏相成,功能“益气活血、启脾进食、温肾止久泻、久带、消寒胀,宽胸利气,定痹散结消癥”,方中人参与五灵脂均气味甘、无毒；人参其性微寒,归脾、肺、心、肾四经；《神农本草经》曰：主要补五脏,镇定精神,安定灵魂,止惊,消邪,亮眼喜益。五灵脂性温,《本草衍义补遗》曰：能行血止血。二药相配,人参得五灵脂补气而不滞邪,五灵脂配人参祛瘀而不伤正,一补一通,用于虚中夹瘀之症,具有益气活血,启脾进食,化积消癥,化瘀定痛之效。其中公丁香气味辛而性温,《雷公炮制药性解》曰：入脾、胃、肺、肾四经。《日华子本草》记载：“治口气,反胃……消痃癖,除冷劳”。郁金气味苦而性寒,《唐本草》记载：“主血积,下气,生肌止血,破恶血,血淋,尿血,金疮”。二者均无毒,相配伍具有温通理气,开郁止痛,宽胸利膈,消胀除满,启脾醒胃之功。肉桂,《玉楸药解》云：“气味甘、辛,气香,性温,入足厥阴肝经,温肝暖血,破瘀消癥,退腰腿寒湿,驱腹胁疼痛”；《神农本草经》记载：“主百病,养精神,和颜色,为诸药先聘通使”。赤石脂气味甘性平,无毒,陈修园云“赤石脂气平禀金气,味甘得土味,手足太阴药也……石脂具湿土之质,而有燥金之用,所以主之。”二药相合,能益阳消阴,宣导百药,温中定痛,收敛止泻,活血消肿。三对畏药相配伍,相畏相成,具有相得益彰之功,入煎剂,安全无副作用［7-9］。

4 李可三畏汤相畏相需药理研究

根据现代中药药理研究：①人参的主要成分为人参皂苷,并含有人参多糖、单糖、寡糖。此外,还含有多肽、氨基酸、挥发油等。“人参皂苷可抑制ADP、凝血酶、AA 诱导的血小板聚集和抑制凝血酶诱导的纤维蛋白原转化为纤维蛋白,从而抑制血栓形成。”“人参皂苷和人参多糖是人参提高免疫功能的有效成分。”“人参皂苷Ro 可明显抑制乙酸和角叉莱胶引起的大鼠足肿胀,降低炎症组织中的羟脯氨酸浓度,对急慢性炎症有明显的抑制作用。”故人参具有抗血栓、增强免疫功能、抗炎及抗肿瘤等多种作用。②五灵脂中含多量的树脂、尿素、尿酸及维生素A 类物质。五灵脂水提物可抑制血小板聚集,降低全血、血浆粘度；乙酸乙酯提取物具有抗炎作用。“五灵脂与人参配伍,血瘀模型动物的全血粘度、血细胞比容和红细胞电凝时间均有明显改善。临床应用：人参五苓联合治疗胃溃疡、慢性胃炎等。此外,临床上两者相配用于治疗肿瘤,对小鼠恩氏腹水癌细胞(EBC)有抑制作用,并能延长小鼠存活时间,且效果明显优于人参单用。③公丁香含挥发油,油中主要成分是丁香油酚、乙酰丁香油酚；其水提取物、醚提取物均有镇痛抗炎作用；其煎剂对葡萄球菌、链球菌及大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等有抑制作用；另有抗血小板聚集、抗凝、抗血栓形成等作用。④郁金含有挥发油、姜黄素、姜黄酮等化学成分。入煎剂可降低全血粘度,抑制血小板聚集,醇提物可降低血浆纤维蛋白含量。此外,郁金能抑制很多种细菌,特别是革兰氏阴性菌比革兰氏阳性菌更受抑制。还具有一定的抗炎镇痛作用。⑤肉桂中含有挥发油(桂皮油),主要成分为桂皮醛,此外还有肉桂醇、肉桂酸等。其中肉桂提取物及桂皮醛有抗血小板聚集、抗凝血酶作用；肉桂酸具有使人肺腺癌细胞逆转的作用；桂皮油对革兰阴性菌及阳性菌有抑制作用。⑥赤石脂主要含四水硅酸铝,并含相当多的氧化铁等物质。这些物质可以保护胃肠黏膜,吸附消化道内的有毒物质、细菌毒素及代谢产物,以免胃肠道出血,显著缩短家兔血浆再钙化时间［10-12］。

虽然三畏汤临床应用广泛,但目前对其是否具有抗Hp 感染、抗凝血、增强免疫力及抗肿瘤等作用尚无研究。而我们通过长期临床实践证实,该方用于瘀毒内结的恶性肿瘤及放化疗患者,具有增效减毒,祛瘀散结,改善患者恶病质,防治肿瘤复发的作用。本课题拟研究三畏汤是否影响Hp 从而参与瘀毒内结型胃癌Wnt/β-catenin 信号通路的调节,为该方治疗胃癌提供参考依据。