白花地胆草酚类成分的研究

张梦瑶， 黄 强， 黄云峰， 华会明， 张 涛， 邹忠梅

(1.天津中医药大学，天津 300000；2.中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193；3.沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016；4.广西中医药研究院中药资源研究所，广西 南宁 530022)

白花地胆草ElephantopustomentosusL.为菊科地胆草属多年生草本植物，广泛分布于海南、台湾、广东以及福建等地[1]，其味苦、辛，性寒，具有清热、解毒、凉血、利湿功效[2]，主要含有倍半萜、酚类、三萜、甾体等化学成分，有着抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗氧化等活性，但目前相关研究侧重于萜类，对酚类涉及较少[3-7]。因此，本实验对白花地胆草酚类成分进行研究，共从中分离得到15个该类化合物，其中化合物1～5、8～14为首次从地胆草属植物中分离得到，化合物6为首次从白花地胆草中发现。

1 材料

AM600型核磁共振仪(德国Bruker公司)；LTQ Orbitrap XL型液质联用质谱仪(美国Thermo Fisher公司)；Waters 2535型semi-PHPLC色谱仪，配置2489型UV检测器(美国Waters公司)；YMC-Pack ODS-A型色谱柱(日本YMC公司)；Heating Both Ⅱ490型旋转蒸发仪(瑞士Buchi公司)；真空隔膜泵(德国Ilmvac公司)；SHB-B型循环水式真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；JY02S型紫外分析仪(北京君意设备有限公司)。柱色谱、薄层色谱用硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20(美国GE Healthcare公司)。白花地胆草于2018年5月采自广西省容县，经广西中医药研究院中药资源研究所黄云峰研究员鉴定为菊科地胆草属植物白花地胆草ElephantopustomentosusL.干燥全草，标本(编号SCI-NCL003130-3)保存于中国医学科学院药用植物研究所国家中药化合物库。甲醇、乙腈为色谱纯(美国Thermo Fisher公司)；其他试剂均为分析纯(北京化工厂)。

2 提取与分离

取白花地胆草全草15 kg，粉碎后用10倍量95%乙醇加热回流提取2次，每次2 h，合并提取液，减压浓缩得总浸膏830 g，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水进行萃取，得到石油醚部位Fr.A(350 g)、乙酸乙酯部位Fr.B(117 g)、正丁醇部位Fr.C(150 g)、水部位Fr.D(185 g)。

对乙酸乙酯部位进行硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脱，合并得到Fr.B1(1.03 g)、Fr.B2(10.88 g)、Fr.B3(3.01 g)、Fr.B4(5.06 g)、Fr.B5(13.92 g)、Fr.B6(51.33 g)、Fr.B7(29.79 g)。Fr.B6经MCI柱色谱，甲醇-水(60∶40～100∶0)洗脱，通过TLC合并得到Fr.B6.1(32.9 g)、Fr.B6.2(5.8 g)、Fr.B6.3(11.24 g)，Fr.B6.1(32.9 g)经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇(100∶0～0∶100)梯度洗脱，通过TLC合并得到Fr.B6.1.1(0.03 g)、Fr.B6.1.2(0.37 g)、Fr.B6.1.3(0.15 g)、Fr.B6.1.4(0.35 g)、Fr.B6.1.5(1.06 g)、Fr.B6.1.6(2.02 g)、Fr.B6.1.7(7.08 g)、Fr.B6.1.8(16.96 g)，Fr.B6.1.7(7.08 g)经半制备HPLC(50%甲醇-0.1%甲酸)得到化合物9(18 mg)、10(18.7 mg)、11(10.7 mg)，将Fr.B6.1.7.3经半制备HPLC(30%乙腈-0.1%甲酸)得到化合物12(2.3 mg)、14(3 mg)，Fr.B6.1.7.5(507 mg)经半制备HPLC(35%甲醇-0.1%甲酸)得到化合物2(5.4 mg)、13(70 mg)、15(30 mg)，Fr.B6.1.7.1经半制备HPLC(18%乙腈-0.1%甲酸)得到化合物1(39 mg)、5(10.2 mg)、6(5.0 mg)，Fr.B6.1.7.2(1 750 mg)经制备HPLC(55%甲醇-0.1%甲酸)、半制备HPLC(32%乙腈-0.1%甲酸)得到化合物3(2 mg)、4(16.3 mg)，Fr.B6.1.7.4(1 930 mg)经Sephadex LH-20、半制备HPLC得到化合物7(1.9 mg)、8(2.3 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色无定型粉末，HR-ESI-MSm/z：325.126 1[M-H]-，分子式C16H22O7。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.08(1H，d，J= 8.2 Hz，H-6)，6.72(1H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-5)，6.83(1H，d，J= 2.0 Hz，H-3)，5.95(1H，m，H-8)，4.98～5.11(1H，m，H-9)，3.84(3H，s，H-10)，4.85(1H，d，J= 7.2 Hz，H-1′)，3.87(1H，dd，J= 12.0，1.6 Hz，H-6′)，3.69(1H，m，H-6′)，3.31～3.49(6H，m，H-7，2′，3′，4′，5′)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：146.3(C-1)，150.7(C-2)，114.0(C-3)，136.4(C-4)，122.1(C-5)，118.1(C-6)，40.8(C-7)，139.0(C-8)，115.9(C-9)，56.6(C-10)，103.0(C-1′)，74.9(C-2′)，78.2(C-3′)，71.3(C-4′)，77.8(C-5′)，62.4(C-6′)。以上数据与文献[8]报道基本一致，故鉴定为丁香酚苷。

化合物2：黄色无定型粉末，HR-ESI-MSm/z：405.118 0[M-H]-，分子式C20H22O9。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.50(2H，d，J= 6.9 Hz，H-3′，7′)，7.40(2H，m，H-4′，6′)，7.33(1H，m，H-5′)，7.26(1H，t，J= 8.3 Hz，H-5)，6.74(1H，dd，J= 8.3，0.9 Hz，H-4)，6.59(1H，dd，J= 8.3，0.9 Hz，H-6)，5.38(1H，s，H-1)，4.94(1H，d，J= 7.6 Hz，H-1″)，3.86(1H，dd，J= 12.1，2.3 Hz，H-6″)，3.68(1H，dd，J= 12.1，2.3 Hz，H-6″)，3.35～3.44(4H，m，H-2″，3″，4″，5″)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：170.0(C-1)，110.8(C-2)，158.2(C-3)，107.7(C-4)，134.0(C-5)，111.5(C-6)，159.8(C-7)，68.1(C-1′)，137.4(C-2′)，129.2(C-3′)，129.5(C-4′)，129.2(C-5′)，129.5(C-6′)，129.2(C-7′)，102.7(C-1″)，74.9(C-2″)，78.0(C-3″)，71.2(C-4″)，78.3(C-5″)，62.5(C-6″)。以上数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定为3-O-β-D-吡喃葡萄糖-7-羟基苯甲酸苄酯。

化合物3：黄色油状，HR-ESI-MSm/z：547.137 9[M-H]-，分子式C26H28O13。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.45(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.36(2H，s，H-2′，6′)，6.97(1H，d，J= 1.3 Hz，H-2″)，6.80(1H，dd，J= 8.2，1.3 Hz，H-6″)，6.74(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5″)，6.23(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，5.75(1H，m，H-3)，5.05(1H，dd，J= 8.3，2.9 Hz，H-4)，4.38(1H，m，H-5)，3.81(6H，s，H-3′，5′-OCH3)，3.77(3H，s，H-8)，2.42(1H，dd，J= 14.5，3.7 Hz，H-2)，2.23(1H，m，H-2)，2.14-2.15(2H，d，J= 9.5 Hz，H-6)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：75.3(C-1)，36.9(C-2)，70.2(C-3)，75.9(C-4)，66.1(C-5)，41.6(C-6)，176.2(C-7)，53.1(C-8)，121.5(C-1′)，108.2(C-2′，6′)，148.8(C-3′，5′)，141.8(C-4′)，167.2(C-7′)，56.7(C-3′，5′-OCH3)，127.6(C-1″)，114.9(C-2″)，146.8(C-3″)，148.6(C-4″)，116.4(C-5″)，123.1(C-6″)，147.4(C-7″)，114.8(C-8″)，168.4(C-9″)。以上数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定为4-咖啡酰-3-芥子酰奎宁酸甲酯。

化合物4：黄色固体，HR-ESI-MSm/z：543.153 0[M-H]-，分子式C27H28O12。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.62(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′)，7.55(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.06(2H，d，J= 2.0 Hz，H-2′，2″)，6.96(2H，d，J= 8.2 Hz，H-5′，5″)，6.79(2H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6′，6″)，6.35(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′)，6.23(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，5.41(1H，m，H-3)，5.31(1H，m，H-5)，4.13(1H，q，J= 7.1 Hz，H-8)，3.98(1H，dd，J= 6.6，3.1 Hz，H-4)，2.33(2H，m，H-6)，2.16(2H，m，H-2)，1.24(3H，t，J= 7.1 Hz，H-9)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：74.5(C-1)，36.6(C-2)，72.2(C-3)，69.7(C-4)，71.9(C-5)，35.6(C-6)，175.1(C-7)，62.6(C-8)，14.3(C-9)，127.8(C-1′)，115.1(C-2′)，146.9(C-3′)，149.7(C-4′)，116.5(C-5′)，123.1(C-6′)，147.4(C-7′)，115.4(C-8′)，168.7(C-9′)，127.6(C-1″)，115.1(C-2″)，146.8(C-3″)，149.6(C-4″)，116.4(C-5″)，123.0(C-6″)，147.1(C-7″)，114.8(C-8″)，167.9(C-9″)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为3,5-O-二咖啡酰奎宁酸乙酯。

化合物5：白色无定型粉末，HR-ESI-MSm/z：381.110 0[M-H]-，分子式C18H22O9。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.53(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′)，7.04(1H，d，J= 2.1 Hz，H-2′)，6.78(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′)，6.94(1H，dd，J= 8.2，2.1 Hz，H-6′)，6.22(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′)，5.22～5.32(1H，m，H-3)，4.07～4.19(3H，m，H-5，8)，3.74(1H，m，H-4)，2.0～2.25(4H，m，H-2，6)，1.24(3H，t，J= 7.1 Hz，H-9)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：75.7(C-1)，37.6(C-2)，72.2(C-3)，72.5(C-4)，70.3(C-5)，37.9(C-6)，174.9(C-7)，62.5(C-8)，14.3(C-9)，127.6(C-1′)，115.0(C-2′)，147.2(C-3′)，149.7(C-4′)，116.5(C-5′)，123.0(C-6′)，146.9(C-7′)，115.0(C-8′)，168.3(C-9′)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定为3-O-咖啡酰奎宁酸乙酯。

化合物6：白色无定型粉末，HR-ESI-MSm/z：367.101 7[M-H]-，分子式C17H20O9。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.53(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7′)，7.06(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2′)，6.95(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5′)，6.80(1H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6′)，6.23(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8′)，5.29(1H，m，H-5)，4.16(1H，m，H-4)，3.76(1H，m，H-3)，2.17～2.32(4H，m，H-2，6)，3.70(3H，s，H-8)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：75.8(C-1)，31.7(C-2)，70.3(C-3)，72.5(C-4)，72.5(C-5)，37.9(C-6)，175.4(C-7)，53.0(C-8)，127.5(C-1′)，115.1(C-2′)，146.7(C-3′)，149.6(C-4′)，116.5(C-5′)，123.0(C-6′)，147.2(C-7′)，114.9(C-8′)，168.3(C-9′)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为绿原酸甲酯。

化合物7：淡黄色无定型粉末，HR-ESI-MSm/z：285.036 0[M-H]-，分子式C15H10O6。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.36～7.42(2H，m，H-2′，6′)，6.90(1H，d，J= 8.1 Hz，H-5′)，6.54(1H，s，H-3)，6.44(1H，d，J= 2.1 Hz，H-8)，6.21(1H，d，J= 2.1 Hz，H-6)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：166.0(C-2)，105.3(C-3)，183.9(C-4)，163.2(C-5)，100.1(C-6)，166.4(C-7)，95.0(C-8)，151.0(C-9)，103.8(C-10)，123.6(C-1′)，116.8(C-2′)，159.4(C-3′)，147.1(C-4′)，77.8(C-5′)，62.4(C-6′)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定为木犀草素。

化合物8：淡黄色无定型粉末，HR-ESI-MSm/z：739.167 0[M-H]-，分子式C40H34O14。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：8.01(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2′，6′)，7.70(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7″)，7.50(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2″，6″)，7.42(1H，d，J= 15.9 Hz，H-7‴)，7.34(2H，d，J= 8.6 Hz，H-2‴，6‴)，6.81(4H，dd，J= 8.6，2.3 Hz，H-3′，5′，3‴，5‴)，6.84(2H，d，J= 8.6，H-3″，5″)，6.44(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8″)，6.33(1H，brs，H-8)，6.15(1H，brs，H-6)，6.10(1H，d，J= 15.9 Hz，H-8‴)，5.39(1H，d，J= 7.9 Hz，glc-1)，5.14(1H，t，J= 9.2 Hz，glc-3)，4.32(1H，dd，J= 11.8，2.1 Hz，glc-6a)，4.24(1H，dd，J= 11.8，6.2 Hz，glc-6b)，3.69(1H，dd，J= 9.5，7.9 Hz，glc-2)，3.55～3.62(2H，m，glc-4，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：159.3(C-2)，135.1(C-3)，129.4(C-4)，161.6(C-5)，100.0(C-6)，166.0(C-7)，94.8(C-8)，158.4(C-9)，105.6(C-10)，103.6(glc-1)，74.1(glc-2)，78.6(glc-3)，70.1(glc-4)，75.7(glc-5)，64.0(glc-6)，122.5(C-1′)，132.2(C-2′)，116.1(C-3′)，161.3(C-4′)，116.1(C-5′)，132.2(C-6′)，127.3(C-1″)，131.2(C-2″)，116.8(C-3″)，161.2(C-4″)，116.8(C-5″)，131.2(C-6″)，146.8(C-7″)，115.4(C-8″)，168.9(C-9″)，127.1(C-1‴)，131.2(C-2‴)，116.8(C-3‴)，161.2(C-4‴)，116.8(C-5‴)，131.2(C-6‴)，146.6(C-7‴)，114.6(C-8‴)，168.7(C-9‴)。以上数据与文献[15]报道基本一致，故鉴定为山柰酚3-O-(3″,6″-二-O-E-p-香豆酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物9：无色针晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：137.023 0[M-H]-，分子式C7H6O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.85(1H，d，J= 7.7 Hz，H-6)，7.45(1H，t，J= 7.7 Hz，H-4)，6.88～6.91(2H，m，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：114.2(C-1)，163.2(C-2)，118.1(C-3)，136.5(C-4)，120.0(C-5)，131.6(C-6)，173.8(C-7)。以上数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定为邻羟基苯甲酸。

化合物10：无色针晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：163.037 3[M-H]-，分子式C9H8O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.30(1H，d，J= 15.6 Hz，H-8)，7.58(1H，d，J= 15.6 Hz，H-7)，6.80(2H，d，J= 8.3 Hz，H-2，6)，7.45(2H，d，J= 8.3 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：127.3(C-1)，131.0(C-2，6)，116.8(C-3，5)，161.1(C-4)，146.4(C-7)，116.8(C-8)，171.3(C-9)。以上数据与文献[16]报道基本一致，故鉴定为反式对羟基肉桂酸。

化合物11：无色针晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：163.039 6[M-H]-，分子式C9H8O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：6.77(1H，d，J= 12.7 Hz，H-7)，5.78(1H，d，J= 12.7 Hz，H-8)，7.60(2H，d，J= 8.4 Hz，H-2，6)，6.73(2H，d，J= 8.4 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：127.9(C-1)，131.3(C-2，6)，115.8(C-3，5)，159.7(C-4)，143.0(C-7)，116.8(C-8)，171.1(C-9)。以上数据与文献[17]报道基本一致，故鉴定为顺式对羟基肉桂酸。

化合物12：无色针晶(甲醇)，1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.87(2H，d，J= 8.2 Hz，H-2，6)，6.81(2H，d，J= 8.2 Hz，H-3，5)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：123.2(C-1)，133.0(C-2，6)，116.0(C-3，5)，163.2(C-4)，173.8(C-7)。以上数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定为对羟基苯甲酸。

化合物13：白色针晶(甲醇)，HR-ESI-MSm/z：153.020 1[M-H]-，分子式C7H6O3。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.45(1H，d，J= 2.0 Hz，H-2)，6.81(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，7.43(1H，d，J= 8.2，2.0 Hz，H-6)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：123.1(C-1)，117.7(C-2)，145.9(C-3)，151.7(C-4)，115.7(C-5)，123.9(C-6)，170.4(C-7)。以上数据与文献[17]报道基本一致，故鉴定为原儿茶酸。

化合物14：白色粉末，HR-ESI-MSm/z：197.043 8[M-H]-，分子式C9H10O5。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.04(2H，s，H-2，6)，4.27(2H，q，J= 7.1 Hz，H-8)，1.35(3H，t，J= 7.1 Hz，H-9)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：121.7(C-1)，110.0(C-2，6)，146.6(C-3，5)，139.7(C-4)，168.5(C-7)，61.6(C-8)，14.6(C-9)。以上数据与文献[18]报道基本一致，故鉴定为没食子酸乙酯。

化合物15：淡黄色无定型粉末，HR-ESI-MSm/z：179.033 3[M-H]-，分子式C9H8O4。1H-NMR(600 MHz，CD3OD)δ：7.04(1H，brs，H-2)，6.78(1H，d，J= 8.2 Hz，H-5)，6.93(1H，dd，J= 8.2，2.0 Hz，H-6)，6.22(1H，d，J= 15.8 Hz，H-8)，7.53(1H，d，J= 15.8 Hz，H-7)；13C-NMR(150 MHz，CD3OD)δ：127.8(C-1)，115.0(C-2)，146.7(C-3)，149.4(C-4)，116.4(C-5)，122.9(C-6)，147.0(C-7)，115.6(C-8)，171.2(C-9)。以上数据与文献[19]报道基本一致，故鉴定为咖啡酸。

4 讨论

本实验从白花地胆草中分离得到15个酚类化合物，包括9个苯酚类、4个咖啡酰基奎宁酸类、2个黄酮类。其中，化合物3、4属于二咖啡酰基奎宁酸类，具有良好的抗氧化活性和抗糖尿病活性[20]；经化合物7处理后的肿瘤细胞通过与AKT竞争受体，能使其磷酸化被抑制，促进凋亡蛋白caspase-3和PARP表达，从而促进细胞死亡[21]；化合物15具有良好的抗肿瘤作用，可通过影响microRNA调控网络以及能上调肿瘤细胞内线粒体活性氧水平，诱导肿瘤细胞凋亡[22]，可为后续白花地胆草其他化学成分研究提供依据，并为该植物生物活性考察提供物质基础。