超高效液相色谱-串联质谱法检测蒸馏酒中的3种非法添加物质的方法学验证结果

◎ 杨 针，黎姝蔓

（重庆市永川食品药品检验所，重庆 402160）

我国白酒多以高粱、小麦等谷物为原料发酵后蒸馏储藏所制，以蒸馏酒为主导[1]。大多数白酒中含有一定比例的醛类、甲醇和杂醇油等物质易引发饮酒者的上头、口干等不适反应，一些不法商贩违规在白酒中添加头痛粉（主要成分为对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因）以缓解劣质白酒引起的头痛等不适，以次充好。目前，将白酒中对乙酰氨基酚、乙酰水杨酸和咖啡因作为食品中的非法添加物进行检测研究时，普遍采用高效液相色谱法和气相色谱-串联质谱法[2-7]，这些检测方法存在灵敏度、分辨率、回收率不高，操作复杂等不足，无法满足微量或痕量成分的检测需求，因此笔者前期建立了蒸馏酒中对乙酰氨基酚、水杨酸、咖啡因的超高效液相色谱-串联质谱（Ultra Performance Liquid Chromatography Tandem Mass Spectrometry，UPLC-MS/MS）检测方法，为验证该自制方法的适用情况，邀请3家相关检验检测机构共同对该自制方法在不同环境、不同设备下的精密度、线性、回收率进行验证。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

水杨酸标准对照品（批号1921804，含量：99.7%），坛墨质检-标准物质中心；对乙酰氨基酚标准对照品（批号1201801，含量：98.0%），坛墨质检-标准物质中心；咖啡因标准对照品（批号0981904，含量：98.0%），坛墨质检-标准物质中心；蒸馏酒酒样：市售；甲酸（色谱纯）；甲醇（色谱纯）。

1.2 仪器与设备

超高效液相色谱仪-串联三重四极杆质谱仪，配有电喷雾（ESI）离子源；万分之一电子天平；千分之一电子天平；水浴锅；超纯水机。

1.3 标准物质溶液的配制

对照品储备液：分别精密称取水杨酸、对乙酰氨基酚、咖啡因标准对照品10 mg（精确至0.000 1 g）置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀。分别得到对乙酰氨基酚、咖啡因和水杨酸对照品储备液，浓度为 400 μg·mL-1，-18 ℃低温避光保存。

混合标准中间液：分别准确量取标准储备液各2.5 mL于同一20 mL容量瓶中，用超纯水稀释定容至刻度，配制成浓度为50 μg·mL-1的混合标准中间液。

混合标准工作液：准确量取混合标准中间液2.0 mL于同一50 mL容量瓶中，用超纯水稀释定容至刻度，配制成浓度为2 μg·mL-1的混合标准工作液。

1.4 样品前处理

准确称取5 g试样（精确至0.001 g）置于50 mL烧杯中，于60 ℃水浴加热30 min，将烧杯中挥发后剩余残渣全部转移至50 mL容量瓶中，用纯水定容至刻度并摇匀，经0.22 μm水相微孔滤膜过滤，供液相色谱-串联质谱分析。

1.5 仪器参考条件

各实验室按照自身条件选择液相色谱柱，设定高效液相色谱仪流动相梯度洗脱程序；监测离子及对应检测参数见表1。

表1 监测离子及对应参数表

2 结果与分析

2.1 重庆市永川食品药品检验所相关数据

2.1.1 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线

仪器型号：Agilent 6420型三重四极杆质谱仪。由表2可知，对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线符合GB/T 27404—2008中线性回归方程的相关系数≥0.98的要求。

表2 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线表

2.1.2 检测精密度及回收率

选用的蒸馏酒酒样基质均为空白基质，本底值均为未检出。由表3可知，3种非法添加物质在空白基质中按照对乙酰氨基酚 20.58 ng·mL-1、41.16 ng·mL-1、102.90 ng·mL-1，咖啡因 20.78 ng·mL-1、41.55 ng·mL-1、103.88 ng·mL-1，水杨酸 21.73 ng·mL-1、43.47 ng·mL-1、108.67 ng·mL-1进行添加，样品经处理后上机检测，实验结果RSD均≤2.52%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为1 mg·kg-1时，实验室内变异系数≤11%的要求；3种物质在不同的加标浓度水平下的平均回收率在94.7%～105.0%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为0.1～1.0 mg·kg-1时，回收率为80%～110%的要求。

表3 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸检测结果表

2.2 重庆市计量质量检测研究院第三分院相关数据

2.2.1 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线

仪器型号：API4000型三重四极杆质谱仪。由表4可知，对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线符合GB/T 27404—2008中线性回归方程的相关系数≥0.98的要求。

表4 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线表

2.2.2 检测精密度及回收率

选用的蒸馏酒酒样基质均为空白基质，本底值均为未检出。由表5可知，3种非法添加物质在空白基质中按照 10 ng·mL-1、40 ng·mL-1、100 ng·mL-1进行添加，样品经处理后上机检测，实验结果RSD均≤9.20%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为1 mg·kg-1时，实验室内变异系数≤11%的要求；3种物质在不同的加标浓度水平下的平均回收率在88.93%～105.62%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为0.1～1.0 mg·kg-1时，回收率为80%～110%的要求。

表5 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸检测结果表

2.3 重庆市黔江食品药品检验所相关数据

2.3.1 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线

仪器型号：Agilent 6420型三重四极杆质谱仪。由表6可知，对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线符合GB/T 27404—2008中线性回归方程的相关系数≥0.98的要求。

表6 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线表

2.3.2 检测精密度及回收率

选用的蒸馏酒酒样基质均为空白基质，本底值均为未检出。由表7可知，3种非法添加物质在空白基质中按照 20 ng·mL-1、40 ng·mL-1、100 ng·mL-1进行添加，样品经处理后上机检测，实验结果RSD均≤5.45%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为1 mg·kg-1时，实验室内变异系数≤11%的要求；3种物质在不同的加标浓度水平下的平均回收率在87.0%～105.0%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为0.1～1.0 mg·kg-1时，回收率为80%～110%的要求。

表7 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸检测结果表

2.4 重庆市永川区农产品质量安全中心相关数据

2.4.1 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线

仪器型号：TRIPLE QuAD 4500型三重四极杆质谱仪。由表8可知，对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线符合GB/T 27404—2008中线性回归方程的相关系数≥0.98的要求。

表8 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸标准曲线表

2.4.2 检测精密度及回收率

选用的蒸馏酒酒样基质均为空白基质，本底值均为未检出。由表9可知，3种非法添加物质在空白基质中按照对乙酰氨基酚 20 .58 ng·mL-1、41.16 ng·mL-1、102.90 ng·mL-1，咖啡因 20 .78 ng·mL-1、41.55 ng·mL-1、103.88 ng·mL-1，水杨酸 21.73 ng·mL-1、43.47 ng·mL-1、108.67 ng·mL-1进行添加，样品经处理后上机检测，实验结果RSD均≤6.55%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为1 mg·kg-1时，实验室内变异系数≤11%的要求；3种物质在不同的加标浓度水平下的平均回收率在83.9%～95.8%，符合GB/T 27404—2008中被测组分含量为0.1～1.0 mg·kg-1时，回收率为80%～110%的要求。

表9 对乙酰氨基酚、咖啡因、水杨酸检测结果表

3 结论

经4家实验室验证，该自制方法的标准曲线均能满足线性回归方程的相关系数不低于0.98的要求，满足被测组分含量为1 mg·kg-1时，实验室内变异系数≤11%的要求；满足被测组分含量为0.1～1.0 mg·kg-1时，回收率为80%～110%的要求，确认该方法在不同检测环境、不同仪器设备上普遍可行。