宁夏部分地区肉用母牛流产的病原血清学调查分析

王建东，郭亚男*，李 昕，唐玉林，闫背背，何生虎

(1.宁夏农林科学院动物科学研究所，宁夏银川 750002；2.宁夏兽药饲料监察所，宁夏银川 750002；3.宁夏大学农学院，宁夏银川 750021)

流产是指由各种原因引起胎儿或母体异常而导致妊娠的生理过程发生紊乱，或者胎儿与母体的正常关系受到破坏而使妊娠中断的临床病理现象[1]。流产是影响牛养殖业经济效益的重要因素之一，流产不但造成胎儿夭折或发育受阻，使产犊间隔扩大，增加养牛的饲料成本，而且会造成产奶量下降，严重者还可引起母牛繁殖障碍，影响后备牛的扩充[2]。引起牛流产的因素主要分为传染性因素和非传染性因素，其中传染性因素主要包括布鲁氏菌病、李氏杆菌病、牛病毒性腹泻、牛传染性鼻气管炎、寄生虫病、衣原体病和生殖器官疾病等[3-6]。非传染性因素主要包括营养缺乏(蛋白质、维生素A、维生素E、维生素D和矿物质等)、饲料发霉变质和应激等[5-6]。

宁夏养牛历史悠久，是农业农村部确定的全国肉牛优势产区之一。2020年，宁夏回族自治区将肉牛产业确定为九大重点产业之一，加大政策扶持，优化区域布局，夯实产业基础，提高规模化水平，肉牛产业持续快速发展。宁夏地区肉牛饲养量192万头，牛肉产值45.9亿元，占畜牧业总产值的23.3%，占农业总产值的7.8%[7]。但是，目前仅有对宁夏地区奶牛流产病原血清学调查的报道[2]，未见有关肉牛流产相关报道。因此，本研究通过采集不同地区基础肉用母牛血液并分离血清开展血清病原或抗体检测，旨在掌握引起宁夏地区基础肉用母牛流产的主要病原因素，为宁夏不同地区基础肉用母牛提质增效和基础肉用母牛疾病防控奠定科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 牛犬新孢子虫抗体检测试剂盒(ET433)、传染性牛鼻气管炎病毒gb抗体检测试剂盒(S431)、布鲁氏菌抗体检测试剂盒(20009)、牛病毒性腹泻病毒抗原检测试剂盒(AA411)、衣原体抗体检测试剂盒(AA911)，美国Idexx公司产品。

1.1.2 仪器设备 酶标仪(SM-3)，北京天石天力公司产品；自动洗板机(ST360W)，上海科华公司产品；电热恒温器(HH-W21-600)，天津泰斯特有限公司产品；离心机(TDL80-2B)，上海安亭科学仪器有限公司产品。

1.2 方法

1.2.1 血清采集 血液样本由牛场养殖人员和宁夏农林科学院动物科学研究所科研人员采集。采用非抗凝血采血器从基础肉用母牛尾静脉采集4 mL左右的血液，室温下凝固后，4 ℃条件下保存并运输至宁夏农林科学院动物科学院研究所疫病研究室。然后采用3 000 r/min离心15 min，最后吸出血清至2 mL冻存管中，置-80 ℃保存待检。共采集血清样本92份，其中固原市共计48份，平罗县12份，惠农区12份，同心县12份，吴忠市8份。

1.2.2 检测方法及判断标准 严格按照牛犬新孢子虫抗体检测试剂盒、传染性牛鼻气管炎病毒gB抗体检测试剂盒、布鲁氏菌抗体检测试剂盒、牛病毒性腹泻病毒抗原检测试剂盒和衣原体抗体检测试剂盒的说明书进行血清样本抗原或抗体检测，结果采用北京爱德士元亨生物科技有限公司提供的数据分析软件(xChek)计算平均值、S/P值或S-N值并结合说明书中的阴性和阳性结果判定标准进行样品阴阳性判断。

1.2.3 统计分析 酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测样品中的阴性、阳性数据均采用IBM SPASS Statistics 26 统计分析软件中的卡方检验进行差异性分析，P<0.05表示差异显著，P<0.01表示差异极显著。

2 结果

2.1 宁夏不同地区5种流产相关病原抗体/抗原检测结果

通过ELISA对宁夏不同地区5种流产相关病原抗体/抗原检测并分析，结果如表1所示。布鲁氏菌平均抗体阳性率为30.43%(28/92)，平罗县阳性率最高，为100.00%(12/12)，同心县阳性率最低，为16.67%(2/12)；平罗县与固原市、平罗县、惠农区、同心县和吴忠市相比差异极显著(P<0.01)，其他各地区之间差异不显著(P>0.05)。牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)抗原阳性率为0。

表1 宁夏不同地区肉牛基础母牛5种流产相关病原抗体/抗原检测结果

牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus，IBRV)平均抗体阳性率为69.57%(64/92)，其中固原市抗体阳性率最高，为93.75%(45/48)，吴忠市最低，为0；固原市与同心县差异不显著(P>0.05),固原市和同心县与平罗县、惠农区和吴忠市相比差异极显著(P<0.01),吴忠市与固原市、平罗县、惠农区和同心县相比差异极显著(P<0.01)。

犬新孢子虫平均抗体阳性率为82.61%(76/92)，其中平罗县和同心县抗体阳性率最高，为100.00%(12/12)；吴忠市抗体阳性率最低，为12.50%。固原市、平罗县、惠农区和同心县与吴忠市相比差异极显著(P<0.01)，固原市与平罗县和同心县相比差异显著(P<0.05)。

衣原体平均抗体阳性率为44.57%(41/92)，其中惠农区和吴忠市抗体阳性率最高，均为100.00%(12/12)，固原市抗体阳性率最低，为22.92%(11/92)。惠农区和吴忠市与平罗县、同心县和固原市相比差异极显著(P<0.01)，同心县与固原市和平罗县相比差异显著(P<0.05)。

2.2 5种流产相关病原抗体/抗原感染情况分析

92份样品中，阴性率为1.09%(1/92)，5种病原抗原/抗体检测阳性率为98.91%(91/92)，其中单一病原抗体/抗原阳性率占15.22%(14/92)，IBR和衣原体感染率最高，为6.52%；2种病原抗体混合阳性率占50.00%(46/92)，IBR+犬新孢子虫阳性率最高，为28.26%(26/92)；3种病原抗体混合阳性率占22.83%(21/92)，IBR+犬新孢子虫+衣原体阳性率最高，为14.13%(13/92)；4种病原抗体混合阳性率占10.87%(10/92)，为布鲁氏菌+IBR+犬新孢子虫+衣原体混合抗体阳性(表2)。

表2 5种流产相关病原抗体/抗原统计结果

3 讨论

近年来，宁夏地区坚持“优质+高端”肉牛品种改良技术路线，以西门塔尔、安格斯牛为主体的良种母牛存栏比例达75%，已成为全国重要的优质肉牛繁育基地。同时，依托区域资源禀赋和产业发展基础，形成以中南部地区为核心的优质肉牛产区。主产区肉牛饲养量达121.2 万头，占全区肉牛饲养量的62.9%[7]。宁夏地区肉牛主要养殖地区分别为固原市(隆德县、西吉县、泾源县、彭阳县)、同心县、平罗县、惠农区，其他地区主要为奶牛产业为主。因此,本研究针对以上地区开展肉用母牛流产相关病原血清流行病学研究，为宁夏地区肉用母牛繁殖疾病防控技术研究提供科学依据。

临床上引起怀孕母牛流产的病因很多，但以传染性因素为主导，如布鲁氏菌、BVDV、IBRV、衣原体、牛沙门氏菌、李氏杆菌、牛弯曲菌、中山病原、赤羽病原、新孢子虫、弓形虫等病原。一般情况下，妊娠奶牛有3%～8%的流产率是正常现象[2,8-10]。在检测的92份样品中，仅有1头基础母牛未检出相关病原，检测的5种病原抗原/抗体检测阳性率为98.91%(91/92)。布鲁氏菌平均抗体阳性率30.43%(28/92)，IBRV平均抗体阳性率为69.57%(64/92)，犬新孢子虫平均抗体阳性率为82.61%(76/92)，衣原体平均抗体阳性率为44.57%(41/92)，未检出BVDV抗原。研究结果表明，目前犬新孢子虫感染肉用母牛的占比最大，IBRV次之，布鲁氏菌和衣原体感染状况也较为严重。

在对混合感染状况分析中发现，单一病原抗体/抗原阳性率占15.22%(14/92)，IBR和衣原体感染率最高，为6.52%；2种病原抗体混合阳性率占50.00%(46/92)，IBR+犬新孢子虫阳性率最高，为28.26%(26/92)；3种病原抗体混合阳性率占22.83%(21/92)，IBR+犬新孢子虫+衣原体阳性率最高，为14.13%(13/92)；4种病原抗体混合阳性率占10.87%(10/92)，为布鲁氏菌+IBR+犬新孢子虫+衣原体混合抗体阳性。本研究表明了宁夏地区引发肉用母牛流产的病原主要以混合感染为主，其中IBRV和犬新孢子虫比例最大，本研究与郭亚男等[10]研究结果一致。原因可能是因为目前肉牛养殖过程中基础母牛流产相关疫苗除了布鲁氏菌会用疫苗两次预防外，IBR虽有疫苗但是目前仅在规模化奶牛场进行了推广应用，而其他病原尚未有相应的商品化疫苗。因此，针对以上病原感染情况的调查表明，在肉用母牛养殖过程中，应加强以上病原的检疫并采取相应的防控措施，尤其是犬新孢子虫和IBRV的防控，做好相应的疫苗免疫预防工作。