新型冠状病毒疫情下临床微生物实习生生物安全的思考

王淑玲，张 震，徐兰兰，颜 令，廖 璞

(重庆市人民医院检验科，重庆 400014)

生物安全风险普遍存在于临床实验室的各个领域，临床实验室人员已经习惯于接受这些风险。当一种新病原体出现时，人们的担忧就会加剧。新型冠状病毒肺炎(COVID-19)暴发以来，医院检验科成为检测疑似或确诊患者各类标本的重要场所。COVID-19确诊患者的临床标本可检测出新型冠状病毒核酸[1]。相对于新型冠状病毒核酸和抗体检测，微生物培养标本不可灭活，传统手工操作多，产生气溶胶的机会多，在操作过程中难免会接触到病原微生物及危险因子，增加了生物安全风险。虽然高校临床微生物教学中包含生物安全教学，但涉及内容少，学生掌握参差不齐，因此必须对实习生进行生物安全培训，提高生物安全意识，防止实验室内感染，避免对社会造成危害。

1 医学检验实习生生物安全教育现状

医学检验本科学生在校期间，必修教材《医学微生物学》与《临床微生物学检验技术》上有一节关于实验室生物安全的课程，仅对病原微生物分类、实验室生物安全分级和风险评估进行简单介绍，缺少实验室生物安全实验课[2-3]。实习是将专业理论知识应用到临床检验的实践阶段，从教室进入真实医院实战环境，检验科实习生对现实的实验室生物安全意识状态会显现出来，职业暴露不良事件时有发生，更加凸显出检验科实习期间生物安全培训与实战的重要性。

2 病原微生物实验室现状

实验室工作人员每天都面临职业暴露风险，如果没有适当的防护标准和必要的防护意识，可能会威胁他们的健康和安全。实习生参与任何涉及标本的工作之前，应熟悉实验室工作条件。实验室应根据自身硬件与软件现状对学生进行针对性的培训。自 2014 年出现埃博拉病毒以来，美国生物安全实践取得了进展，但公共卫生实验室协会最近的一项调查表明，临床实验室没有为当前和新出现的生物安全挑战做好准备[4]。COVID-19疫情初期，重庆市临床检验中心调查了26家重庆市医疗综合实力相对较好的临床实验室生物安全，发现在应对COVID-19疫情时存在人员不足、实验室安全设施不能有效控制污染、仪器设备未按要求检定、防护用品无法满足高致病微生物检测工作需要、培训方式不能保证效果等问题[5]。随着疫情期间卫生部门对实验室安全监管力度逐渐加大，病原微生物实验室硬件设施配套建设、管理制度和人员培训逐步完善。

3 实习生生物安全培训

3.1法律法规 学生在校期间对生物安全法律法规知晓较少。实习生应与时俱进，熟悉掌握生物安全法律法规。随着人们对COVID-19的认知不断更新，各种法律法规相应出台，防控和诊疗方案多次修正。COVID-19纳入乙类传染病，按甲类传染病管理[6]；新型冠状病毒按照第二类病原微生物进行管理[7]。医护人员应该合理使用医用防护用品，做好防控中的个人防护工作[8]。广泛新型冠状病毒疫苗预防接种后会产生抗体，COVID-19诊疗工作的科学性、规范性和有效性进一步提高[9]。2021年5月14日，我国进入常态化疫情防控和局部聚集性疫情处置阶段，修订了《新型冠状病毒感染的肺炎防控方案(第八版)》[10]。对实习生进行实时培训，熟悉防控新要求，培训形式采取多种形式，一般采取线上和线下培训，进行理论考核或实地演练考核。

3.2科室生物安全制度 学生入科前进行专业技能培训和科室生物安全制度培训。要求学生遵守以下准则：听安全讲座、正确穿戴个人防护用品、废弃物正确处理、参加突发事件紧急预案演练等，考核合格后进入实习岗位。

3.3实验室相关生物安全紧急预案 实习生在操作中难免会发生一些突发事件，为了及时、有效地做好实验室生物安全事件预防、应对和控制工作，最大限度地减轻危害、降低损失、保护实验人员及财产安全，结合实验室制定应急预案，并对预案进行定期演练。预案包括日常工作中可能遇到的安全意外，如：疑似新冠标本污染生物安全柜、标本倾覆造成实验室污染、污染物清理等[11]。实习生定期演练后熟悉掌握处理流程，在实际工作中遇到类似事件才能正确应对。

4 微生物标本检测

生物安全不限于设施和制度，实验室行为也有助于实验室生物安全的实施，实战与理论课程相结合可使学生获得更深入的理解。

4.1临床微生物标本前处理 微生物标本类型常包括呼吸道标本、血液、粪便、尿液、各类无菌体液、病理组织等。根据医嘱进行接种培养基、离心和涂片染色。这些标本中可检测出新型冠状病毒核酸。每个到达微生物的标本都可能存在潜在的致病性微生物， 按传染性标本对待处理，微生物工作人员和实习生应在二级个人防护基础上进行操作。微生物标本不可灭活且类型多样，手工操作多，容易产生大量的气溶胶，新型冠状病毒在气溶胶中至少可以存活 3 h[12]。打开标本轻柔缓慢，尽可能缩短打开后的持续时间。微生物标本接收、分拣、接种和涂片等操作应在Ⅱ级生物安全柜中操作，处理疑似、确诊患者标本必须在Ⅱ级生物安全柜中操作，个人须三级生物安全防护。疑似、确诊患者标本的培养皿接种完用胶带密封。实验室具备良好规范操作：正确开关机(使用前15～30 min开启风机，使用完毕15～30 min后关闭风机)，台面物品不过多，执行每天功能监测(包括流风自检)、清洁消毒等。生物安全柜以紫外杀菌灯消毒为主，也可以用75%乙醇消毒[13]。涂片必须在生物安全柜内用强度大于90 μW/cm2的紫外线照射30 min，可有效杀灭SARS病毒，涂片方可进行染色[14]。离心疑似或确诊患者标本时，操作者须二级生物安全防护。特殊情况(如怀疑洒漏)时，升级为三级生物安全防护。标本离心无意外，离心停止10 min以上，打开离心机盖用喷雾消毒。如离心过程有异常声响，则停止离心。改为三级生物安全防护后，停止离心30 min以上，小心开盖，75%乙醇喷雾消毒后进行处理。尽可能在生物安全柜中将离心管放入和取出转子。

4.2平板阅读 标本接种培养平板后，常在温度为(35±1)℃或(28±1)℃的培养箱培养。培养箱温度利于病原体生长，也利于病毒存活。新型冠状病毒在标本和环境中有存活潜力和感染风险。新型冠状病毒可在腹泻患者的粪便中存活，粪口途径现在正在成为社区传播的主要环境问题[15]。由新型冠状病毒感染引起的胃肠道症状及病毒 RNA 不仅存在于感染者的粪便中，而且存在于废水中,作为流行病学的潜在来源[16]。在医院和高层塔楼等室内环境中，消毒不当和有缺陷的管道系统可能会促进携带病毒的废水导致感染[17]。在室温条件下，新型冠状病毒可在痰液中存活大于或等于4 d[18]。经过24～48 h培养，对平板进行阅读，需开盖观察菌落形态，挑取病原体进行分纯、涂片、鉴定和药敏试验。微生物人员和实习生日常工作中开盖时气溶胶溢出，易造成污染，处理过程必须在Ⅱ级生物安全柜中操作，且动作轻柔。

4.3标本及废弃物处理和环境消毒 病毒污染的物品也可作为传染源，微生物检测标本中可分离到新冠病毒，应当注意防止其对环境的污染，检测完毕装入黄色垃圾口袋高压灭菌处理。工作结束后，室内无人时使用紫外线杀菌，每次消毒时间不少于30 min。注意紫外线有效消毒距离。房屋消毒，必要时可以采用移动方式。定期检测消毒设备性能，累积使用时间不超过规定时限。物体表面及地面的消毒：每天实验后下班前使用含1 000 mg/L有效氯的消毒液进行桌面、台面及地面擦拭消毒。清洁区可以使用含500 mg/L有效氯的消毒液。消毒液需要现用现配，24 h内使用，进行氯浓度测试。

5 心理健康

COVID-19疫情暴发时，医务工作者面临巨大挑战和沉重压力，承担了高强度和高应激的工作，产生一系列心理应激反应，严重影响医务工作者的心身健康。与病毒的斗争需要包括实习生在内的医务工作者的团结力量。突如其来如此严重的公共卫生事件，会使实习生产生心理健康问题。一项调查发现，在 2020 年毕业的医生中，酒精摄入量在大流行演变期间增加[19]。COVID-19暴发期间，广州市某综合性教学医院集体隔离的95名护理实习生焦虑和抑郁程度较高，影响了他们的睡眠质量[20]。针对实习生可能出现的心理问题，应及时采取干预措施和心理疏导，改善他们的心理健康和睡眠质量。同样，应该关注临床微生物实习生心理健康，及时进行心理援助。

6 小 结

COVID-19虽然具有高传染性，对实验室生物安全带来了新的要求，尤其对刚进入临床的实习生提出前所未有的生物安全教育要求。适当的生物安全实践和控制措施是实验室生物安全文化。应该抓住此次疫情机遇，强化安全意识，增强对学生的保护措施和生物安全教育，让生物安全观念扎根，避免院内感染，具备毕业后应对新兴生物安全突发事件的防控能力。