血浆外泌体miRNA- 204- 5p和类风湿关节炎

缪海冰，陈真

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种自身免疫性疾病，其病因和发病机制复杂，外泌体来源的miRNA在RA炎症和关节损伤的发展中有关键作用，既往研究已经检测到数种与RA活动和缓解相关的非编码 RNA 的可变表达，如miR-155、miR-146等[1]。近年来，文献报道了部分新型外泌体相关miRNA在RA中的病理生理意义，提示其对RA治疗及预防的潜力。

2020年，研究发现血清外泌体 miRNA-1915- 3p在RA患者中表达明显失调，且与RA的血清C反应蛋白水平相关，可能成为RA疾病活动的潜在标志物[2]。RA滑液衍生的外泌体含有高水平的 miR- 574- 5p，可参与诱导破骨细胞生成[3]。miR-106b 在 RA 滑膜成纤维细胞(synovial fibroblasts，SFs)及其衍生的外泌体中高表达。SFs衍生的外泌体 miRNA-106b 可从SFs递送至软骨细胞，抑制软骨细胞增殖和迁移，加速细胞凋亡，刺激 RA 发生[4]。

2022年有研究者在RA患者的血浆外泌体中发现新的外泌体miRNA分子，并且该研究显示血浆外泌体miR- 204- 5p表达与RA患者疾病参数呈负相关。这些外泌体可以转移至滑膜成纤维细胞中，抑制细胞活化与增殖。该研究进一步进行了动物体内试验，发现注射过表达 miR- 204- 5p 的慢病毒可减缓胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的病情进展[5]。

1 RA患者存在多种外泌体miRNA的表达异常

研究者在9例RA患者和9名健康对照中进行RNA微阵列表达谱分析，发现多种血浆外泌体表达差异，随后通过RT-qPCR在发现队列(RA 与健康对照=30∶30)和验证队列 (RA 与健康对照=56∶60)证实miR- 204- 5p表达下调。研究者进一步建立类风湿关节炎小鼠模型(CIA)，发现CIA小鼠血浆外泌体miR- 204- 5p丰度同样降低(图1)。

图1 血浆外泌体miR- 204- 5p在 RA 患者及健康对照存在表达差异

2 miR- 204- 5p过表达对滑膜成纤维细胞的影响

研究者在MH7A 细胞基础上构建了 miR- 204- 5p-OE和miR- 204- 5p-NC模型，通过细胞侵袭实验、EdU 染色、RT-qPCR 检查等实验技术发现miR- 204- 5p在一定程度上抑制滑膜成纤维细胞增殖、侵袭和细胞因子的释放(图2)。

图2 miR- 204- 5p过表达抑制MH7A细胞的侵袭、增殖和炎症因子的表达

3 过表达miR- 204可减轻 CIA 小鼠关节炎的严重程度

研究者将编码 miR- 204- 5p 前体的慢病毒载体(lenti- 204)注射到CIA 小鼠模型的踝关节中，并通过关节炎指数评分、放射学和组织学变化监测治疗结果。发现lenti- 204处理显著减轻 CIA 小鼠的疾病进展。相对于对照组，该处理组小鼠足爪更少表现出发红及肿胀、关节炎评分较低并且微 CT 的图像重建显示更少的骨侵蚀。组织病理学检查提示lenti- 204处理组小鼠病理变化更轻微，没有出现软骨侵蚀。利用滑膜增殖细胞核抗原(PCNA)对关节组织进行染色，发现lenti- 204处理组关节组织中 PCNA 的阳性染色显著降低(图3)。

图3 注射慢病毒miR- 204可减轻胶原诱导性关节炎(CIA)小鼠的疾病活动