东北延胡索块茎中的生物碱及其抗肿瘤活性研究

常 生 刘志惠韩娜杨志友王盼盼李凡殷军∗

（1.长治医学院， 长治医学院附属和平医院， 山西 长治046000； 2.沈阳药科大学中药学院， 辽宁 沈阳110016）

东北延胡索Corydalis ambiguaCham.et Schlecht.var.amurensisMaxim.为罂粟科紫堇属植物东北延胡索的干燥块茎［1］，主要分布于中国东北地区，具有活血散瘀、理气止痛的功效，在东北地区常将其块茎来代替正品延胡索使用，用于治疗心腹腰膝诸痛、痛经、月经不调、产后瘀滞腹痛等。紫堇属植物主要活性成分为异喹啉类生物碱类成分［2⁃3］，具有明显抗肿瘤作用，在肿瘤治疗中有广阔的应用前景［3⁃4］，如异喹啉类生物碱成分曲贝替定作为抗肿瘤药用于治疗特异性软组织肉瘤、结肠癌［5］。东北延胡索中生物碱成分具有抗溃疡、保护心肌耐缺血缺氧和镇痛的药理活性［6⁃8］，但其抗肿瘤细胞活性方面却鲜有报道。本实验对东北延胡索中生物碱类成分进行系统研究，分离得到16 个生物碱类成分。通过MTT 法评价16 个化合物对人肿瘤HepG2 细胞、HCT116 细胞、A549 细胞和HL60 细胞的体外增殖抑制活性。

1 材料

Bruker Avance⁃400 核磁共振波谱仪（TMS 为内标，德国Bruker 公司）；Shimadzu LC⁃10A 高效液相色谱仪（日本Shimadzu 公司）；Ultimate C18色谱柱［250 mm×10 mm，5 μm，月旭科技（上海）股份有限公司］ ；Sephadex LH⁃20（美国Pharmacia公司）；柱色谱硅胶和薄层色谱用硅胶（青岛海洋化工有限公司）。甲醇（色谱纯，天津康科德科技有限公司）；乙腈（色谱纯，美国Sigma⁃Aldrich 公司）；娃哈哈饮用纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；石油醚、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇、氨水等试剂为分析纯（天津市永大化学试剂有限公司）。

人肝癌HepG2 细胞、人结肠癌HCT116 细胞、人肺癌A549 细胞、人原髓细胞白血病HL60 细胞（美国Type Culture Collection）；胎牛血清、磷酸盐缓冲液（美国Hyclone 公司）；RPMI⁃1640 培养基、DMEM 高糖培养基、胰酶（美国Gibco 公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲基亚砜（美国Sigma公司）。

东北延胡索块茎于2016 年5 月采自辽宁省宽甸满族自治县，经沈阳药科大学中药学院生药教研室殷军教授鉴定为东北延胡索Corydalis ambiguaCham.et Schlecht.var.amurensisMaxim.的干燥块茎。

2 提取与分离

东北延胡索干燥块茎5 kg 用80%乙醇回流提取，减压浓缩得浸膏（840 g），用1%的稀盐酸调pH 3～4，静置12 h，过滤，滤液用氨水调pH 10，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液减压浓缩，得石油醚部位（20.1 g）、氯仿部位（34.3 g）、乙酸乙酯部位（3.6 g）、正丁醇部位（43.5 g）。经薄层色谱分析发现，氯仿部位和乙酸乙酯部位所含生物碱成分相似，因此合并后上样于开放硅胶柱色谱（100～200 目），以二氯甲烷⁃甲醇（100∶1～1∶5）梯度洗脱，合并相似流分后的Fr.1～Fr.7，其中Fr.1 经硅胶柱色谱（200～300 目），用石油醚⁃丙酮（10∶1）洗脱部分经Sephadex LH⁃20 进行分离，经薄层制备得化合物3（8 mg）。Fr.2 经硅胶柱色谱，石油醚⁃丙酮（7∶1）洗脱部分经薄层色谱、Sephadex LH⁃20 和重结晶后得化合物1（9 mg）。Fr.3 经硅胶柱色谱，乙酸乙酯⁃丙酮（10∶1）洗脱部分经Sephadex LH⁃20 和薄层制备色谱后得化合物10（7 mg）和12（60 mg）。Fr.4 经硅胶柱色谱，以乙酸乙酯⁃丙酮洗脱，得Fr.4⁃1 和Fr.4⁃2，经重结晶后得化合物13（8 g），经Sephadex LH⁃20（二氯甲烷⁃甲醇，1∶1）和重结晶后得到化合物5（23 mg）。Fr.5 经硅胶柱色谱，二氯甲烷⁃丙 酮⁃1% 氨水洗脱经Sephadex LH⁃20（二氯甲烷⁃甲醇，1∶1）和薄层制备色谱得化合物6（8 mg）和7（5 mg），二氯甲烷⁃丙酮⁃1%氨水洗脱经硅胶柱色谱，石油醚⁃丙酮（2∶1）洗脱得化合物2（12 mg）、4（10 mg）。Fr.6 经硅胶柱色谱，先以二氯甲烷⁃丙酮⁃1%氨水洗脱，得化合物9（7 mg），剩余部分以二氯甲烷⁃丙酮（4∶1）洗脱，得Fr.6⁃1 和Fr.6⁃2，前者经Sephadex LH⁃20 得化合物8（7 mg），后者得化合物11（8 mg）和化合物14（5 mg）。Fr.7 经硅胶柱色谱，以二氯甲烷⁃甲醇（20∶1）洗脱得化合 物15（11 mg），二氯甲烷⁃甲醇（15∶1）洗脱经Sephadex LH⁃20 和薄层制备色谱得化合物16（5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色针状结晶（丙酮），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：340.385 5 ［M＋H］＋，分子式为C20H21NO4。1H⁃NMR（300 MHz，CDCl3）δ：6.72（1H，s，H⁃1），6.67（1H，d，J＝8.1 Hz，H⁃11），6.63（1H，d，J＝8.1 Hz，H⁃12），6.62（1H，s，H⁃4），5.94（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.91（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.10（1H，d，J＝15.3 Hz，H⁃8b），3.89（3H，s，3⁃OCH3），3.86（3H，s，2⁃OCH3），3.61（1H，dd，J＝3.6，11.4 Hz，H⁃14），3.56（1H，d，J＝15.3 Hz，H⁃8a），3.26（1H，dd，J＝3.6，15.9 Hz，H⁃13a），3.15（1H，m，H⁃5a），3.14（1H，m，H⁃6a），2.82（1H，dd，J＝11.4，15.9 Hz，H⁃13b），2.64（1H，m，H⁃5b），2.64（1H，m，H⁃6b）；13C⁃NMR（75MHz，CDCl3）δ：108.7（C⁃1），147.5（C⁃2），147.6（C⁃3），111.5（C⁃4），126.8（C⁃4a），29.1（C⁃5），51.3（C⁃6），53.0（C⁃8），116.9（C⁃8a），143.3（C⁃9），145.0（C⁃10），106.8（C⁃11），121.0（C⁃12），128.6（C⁃12a），36.4（C⁃13），59.5（C⁃14），129.6（C⁃14a），100.8（9⁃OCH2O⁃10），56.1（3⁃OCH3），55.9（2⁃OCH3）。以上数据与文献［9⁃10］ 报道一致，故鉴定化合物1 为华尖碱。

化合物2：无色簇晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：342.400 8 ［M＋H］＋，分子式为 C20H23NO4。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.78（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃11），6.74（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃12），6.73（1H，s，H⁃1），6.62（1H，s，H⁃4），4.23（1H，d，J＝15.4 Hz，H⁃8a），3.89（3H，s，9⁃OCH3），3.87（3H，s，3⁃OCH3），3.79（3H，s，2⁃OCH3），3.60（1H，m，H⁃14），3.56（1H，d，J＝15.4 Hz，H⁃8b），3.26（1H，dd，J＝3.8，15.9 Hz，H⁃13a），3.22（1H，m，H⁃6a），3.16（1H，m，H⁃5a），2.83（1H，dd，J＝11.6，15.9 Hz，H⁃13b），2.69（1H，m，H⁃6b），2.65（1H，m，H⁃5b）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：108.6（C⁃1），147.6（C⁃2），147.7（C⁃3），111.4（C⁃4），126.7（C⁃4a），29.0（C⁃5），51.6（C⁃6），53.9（C⁃8），124.9（C⁃8a），143.6（C⁃9），146.7（C⁃10），114.7（C⁃11），124.9（C⁃12），127.1（C⁃12a），36.2（C⁃13），59.6（C⁃14），129.6（C⁃14a），60.6（9⁃OCH3），56.2（3⁃OCH3），56.0（2⁃OCH3）。以上数据与文献［11］ 报道一致，故鉴定化合物2 为紫堇达明碱。

化合物3：淡黄色针状结晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。与卡维丁共薄层，3 种展开系统Rf值完全一致。故将化合物3 鉴定为卡维丁。

化合物4：无色棱状柱晶（甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：370.454 5 ［M＋H］＋，分子式为C22H27NO4。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.91（1H，d，J＝8.3 Hz，H⁃12），6.82（1H，d，J＝8.3 Hz，H⁃11），6.68（1H，s，H⁃1），6.61（1H，s，H⁃4），4.20（1H，d，J＝15.7 Hz，H⁃8e），3.86（6H，s，2×OCH3），3.87（6H，s，2×OCH3），3.69（1H，s，H⁃14），3.50（1H，d，J＝15.9 Hz，H⁃8a），3.23（1H，m，H⁃13），3.11（2H，m，H⁃6），2.60（2H，m，H⁃5），0.95（3H，d，J＝6.9 Hz，13⁃CH3）。以上数据与文献［12］ 报道一致，故化合物4 被鉴定为紫堇碱。

化合物5：无色无定型粉末（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：384.180 5 ［M＋H］＋，分子式为C22H25NO5。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.92（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃12），6.79（1H，d，J＝8.2 Hz，H⁃11），6.65（1H，s，H⁃1），6.67（1H，s，H⁃4），6.00（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.94（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.04（1H，d，J＝15.2 Hz，H⁃8b），3.99（1H，m，H⁃6），3.90（3H，s，3⁃OCH3），3.89（3H，s，2⁃OCH3），3.45（1H，d，J＝15.2 Hz，H⁃8a），3.32（1H，d，J＝1.6 Hz，H⁃14），3.16（1H，d，J＝17.7 Hz，H⁃5α），3.10（1H，dd，J＝17.7，4.5 Hz，H⁃5β），2.20（3H，s，7⁃NCH3），1.14（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：43.2（N⁃CH3），116.1（C⁃1），124.1（C⁃1a），146.4（C⁃2），149.3（C⁃3），112.1（C⁃4），126.5（C⁃4a），36.2（C⁃5），76.3（C⁃6），54.2（C⁃8），116.8（C⁃8a），142.7（C⁃9），145.0（C⁃10），107.6（C⁃11），118.6（C⁃12），136.1（C⁃12a），40.8（C⁃13），69.4（C⁃14），101.3（9⁃OCH2O⁃10），56.1（2⁃OCH3），55.8（3⁃OCH3），23.4（13⁃CH3）。以上数据与文献［9］ 报道一致，故鉴定化合物5 为11⁃去甲氧基白元胡碱。

化合物6：无色方状结晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：400.176 2 ［M＋H］＋，分子式为C22H25NO6。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.58（1H，s，H⁃12），6.60（1H，s，H⁃1），6.71（1H，s，H⁃4），6.00（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.94（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.00（1H，m，H⁃6），3.98（1H，d，J＝14.8 Hz，H⁃8b），3.90（3H，s，11⁃OCH3），3.88（3H，s，2⁃OCH3），3.41（1H，d，J＝14.8 Hz，H⁃8a），3.31（1H，d，J＝1.6 Hz，H⁃14），3.13（1H，d，J＝17.4 Hz，H⁃5α），3.05（1H，dd，J＝17.4，4.6 Hz，H⁃5β），2.18（3H，s，7⁃NCH3），1.13（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：43.2（N⁃CH3），115.4（C⁃1），123.6（C⁃1a），144.3（C⁃2），146.1（C⁃3），115.3（C⁃4），127.1（C⁃4a），35.8（C⁃5），76.0（C⁃6），54.0（C⁃8），110.4（C⁃8a），144.1（C⁃9），133.3（C⁃10），143.0（C⁃11），104.8（C⁃12），136.5（C⁃12a），41.0（C⁃13），69.7（C⁃14），101.7（9⁃OCH2O⁃10），56.8（11⁃OCH3），56.1（2⁃OCH3），23.4（13⁃CH3）。以上数据与文献［9］ 报道一致，故鉴定化合物6 为3⁃去甲基白元胡碱。

化合物7：无色方状结晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：400.176 6 ［M＋H］＋，分子式为C22H25NO6。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.73（1H，s，H⁃1），6.65（1H，s，H⁃4），6.57（1H，s，H⁃12），6.00（1H，d，J＝1.4 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.93（1H，d，J＝1.4 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.00（1H，m，H⁃6），3.98（1H，d，J＝14.8 Hz，H⁃8b），3.91（3H，s，11⁃OCH3），3.90（3H，s，3⁃OCH3），3.41（1H，d，J＝14.8 Hz，H⁃8a），3.28（1H，d，J＝1.6 Hz，H⁃14），3.15（1H，d，J＝17.7 Hz，H⁃5α），3.08（1H，dd，J＝17.7，4.5 Hz，H⁃5β），2.18（3H，s，7⁃NCH3），1.13（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：43.1（N⁃CH3），118.8（C⁃1），125.6（C⁃1a），142.9（C⁃2），147.0（C⁃3），111.4（C⁃4），124.9（C⁃4a），36.2（C⁃5），76.0（C⁃6），54.0（C⁃8），110.5（C⁃8a），144.1（C⁃9），133.3（C⁃10），143.0（C⁃11），104.7（C⁃12），136.5（C⁃12a），41.0（C⁃13），69.2（C⁃14），101.7（9⁃OCH2O⁃10），56.8（11⁃OCH3），55.9（3⁃OCH3），23.4（13⁃CH3）。以上数据与文献［9］ 报道一致，故鉴定化合物7 为2⁃去甲基白元胡碱。

化合物8：无色簇晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：444.202 2 ［M＋H］＋，分子式为C24H29NO7。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.74（1H，s，H⁃1），6.66（1H，s，H⁃4），6.64（1H，s，H⁃12），6.00（1H，d，J＝1.4 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.91（1H，d，J＝1.4 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.31（1H，s，H⁃14），4.22（1H，dd，J＝12.2，5.2 Hz，8⁃CH2OH），4.12（1H，dd，J＝12.2，2.6 Hz，8⁃CH2OH），4.07（1H，dd，J＝5.2，2.6 Hz，H⁃8），4.00（1H，m，H⁃6），3.92（3H，s，11⁃OCH3），3.90（3H，s，3⁃OCH3），3.88（3H，s，2⁃OCH3），3.11（1H，d，J＝17.5 Hz，H⁃5α），3.05（1H，dd，J＝17.5，4.2 Hz，H⁃5β），2.30（3H，s，7⁃NCH3），1.14（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：40.0（N⁃CH3），115.8（C⁃1），124.4（C⁃1a），146.6（C⁃2），149.1（C⁃3），111.9（C⁃4），126.2（C⁃4a），35.7（C⁃5），76.2（C⁃6），61.2（C⁃8），111.6（C⁃8a），144.3（C⁃9），133.3（C⁃10），143.4（C⁃11），105.0（C⁃12），137.8（C⁃12a），40.0（C⁃13），61.6（C⁃14），101.6（9⁃OCH2O⁃10），56.7（11⁃OCH3），56.1（2⁃OCH3），55.8（3⁃OCH3），23.6（13⁃CH3），60.8（⁃CH2OH）。以上数据与文献［9］ 报道一致，故鉴定化合物8 为8⁃羟甲基白元胡碱。

化合物9：无色针状结晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：484.197 3 ［M＋H］＋，分子式为C26H31NO9。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.30（1H，s，H⁃1），6.66（1H，s，H⁃4），6.36（1H，s，H⁃12），6.00（1H，d，J＝0.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.95（1H，d，J＝0.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.32（1H，t，J＝6.8 Hz，H⁃6），4.47（1H，d，J＝3.7 Hz，H⁃8），4.23（1H，dd，J＝6.6，3.7 Hz，8⁃CH2OH），3.75（1H，d，J＝6.6 Hz，8⁃CH2OH），3.91（3H，s，2⁃OCH3），3.90（3H，s，3⁃OCH3），3.84（3H，s，11⁃OCH3），3.08（1H，d，J＝6.8，15.4 Hz，H⁃5α），3.00（1H，dd，J＝6.8，15.4 Hz，H⁃5β），2.07（3H，s，7⁃NCH3），1.73（3H，s，CH3COO⁃6），1.16（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：37.5（N⁃CH3），110.6（C⁃1），127.3（C⁃1a），147.5（C⁃2），149.1（C⁃3），110.5（C⁃4），125.8（C⁃4a），33.2（C⁃5），75.3（C⁃6），60.5（C⁃8），115.0（C⁃8a），142.7（C⁃9），132.7（C⁃10），142.2（C⁃11），106.6（C⁃12），133.5（C⁃12a），49.8（C⁃13），100.9（C⁃14），101.6（9⁃OCH2O⁃10），56.5（11⁃OCH3），56.1（2⁃OCH3），55.8（3⁃OCH3），25.6（13⁃CH3），21.4，170.9（CH3COO⁃6），69.4（⁃CH2OH）。以上数据与文献［9］ 报道一致，故将化合物9 鉴定为6⁃乙酰基⁃14⁃羟基⁃8⁃羟甲基白元胡碱。

化合物10：淡黄色粉末（甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：442.181 3 ［M＋H］＋，分子式为C24H27NO7。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：7.10（1H，s，H⁃1），6.67（1H，s，H⁃12），6.52（1H，s，H⁃4），5.97（1H，s，J＝0.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.93（1H，s，J＝0.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.41（1H，t，J＝3.0 Hz，H⁃6），3.95（1H，d，J＝17.2 Hz，H⁃8b），3.94（3H，s，3⁃OCH3），3.91（3H，s，11⁃OCH3），3.86（3H，s，2⁃OCH3），3.84（1H，d，J＝17.2 Hz，H⁃8a），3.71（1H，s，H⁃14），3.12（1H，d，J＝17.5，3.1 Hz，H⁃5α），2.94（1H，dd，J＝17.5，3.1 Hz，H⁃5β），1.84（3H，s，CH3COO⁃6），1.29（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：113.2（C⁃1），128.0（C⁃1a），148.4（C⁃2），148.1（C⁃3），110.6（C⁃4），123.1（C⁃4a），31.3（C⁃5），76.1（C⁃6），55.9（C⁃8），110.6（C⁃8a），143.7（C⁃9），132.9（C⁃10），142.4（C⁃11），105.5（C⁃12），134.5（C⁃12a），36.9（C⁃13），61.2（C⁃14），101.6（9⁃OCH2O⁃10），56.6（11⁃OCH3），56.0（3⁃OCH3），55.8（2⁃OCH3），25.6（13⁃CH3），21.2，170.0（CH3COO⁃6）。以上数据与文献［9］ 报道一致，故将化合物10 鉴定为6⁃乙酰基⁃N⁃去甲基白元胡碱。

化合物11：无色方状结晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：400.175 2 ［M＋H］＋，分子式为C22H25NO6。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.63（1H，s，H⁃1），6.68（1H，s，H⁃4），6.40（1H，s，H⁃12），6.00（1H，d，J＝1.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.80（1H，d，J＝1.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.10（1H，m，H⁃6），3.88（3H，s，2⁃OCH3），3.88（3H，s，3⁃OCH3），3.87（1H，d，J＝14.5 Hz，H⁃8b），3.42（1H，d，J＝14.5 Hz，H⁃8a），3.32（1H，d，J＝1.2 Hz，H⁃14），3.20（1H，d，J＝18.0 Hz，H⁃5α），3.12（1H，dd，J＝18.0，4.6 Hz，H⁃5β），2.20（3H，s，7⁃NCH3），1.07（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：43.2（N⁃CH3），116.0（C⁃1），124.0（C⁃1a），146.5（C⁃2），149.4（C⁃3），111.9（C⁃4），126.1（C⁃4a），35.6（C⁃5β），76.0（C⁃6），54.4（C⁃8），108.2（C⁃8a），143.2（C⁃9），132.4（C⁃10），139.6（C⁃11），109.0（C⁃12），134.8（C⁃12a），40.6（C⁃13），69.6（C⁃14），101.6（9⁃OCH2O⁃10），56.1（2⁃OCH3），55.8（3⁃OCH3），23.0（13⁃CH3）。以上数据与文献［9］ 报道一致，故鉴定化合物11 为11⁃去甲基白元胡碱。

化合物12：淡黄色方状结晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：456.175 5 ［M＋H］＋，分子式为C25H29NO7。1H⁃NMR（300 MHz，CDCl3）δ：6.94（1H，s，H⁃1），6.76（1H，s，H⁃12），6.51（1H，s，H⁃4），5.92（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.90（1H，d，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.26（1H，dd，J＝6.1，8.3 Hz，H⁃6），3.89（3H，s，11⁃OCH3），3.88（3H，s，3⁃OCH3），3.82（3H，s，2⁃OCH3），3.79（1H，d，J＝15.5 Hz，H⁃8b），3.63（1H，s，H⁃14），3.53（1H，d，J＝15.7 Hz，H⁃8a），2.93（1H，d，J＝15.4，8.3 Hz，H⁃5α），2.85（1H，dd，J＝15.4，6.0 Hz，H⁃5β），2.52（3H，s，7⁃NCH3），1.92（3H，s，CH3COO⁃6），1.31（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：43.5（N⁃CH3），112.4（C⁃1），128.6（C⁃1a），148.2（C⁃2），147.5（C⁃3），111.2（C⁃4），126.2（C⁃4a），32.4（C⁃5β），75.6（C⁃6），48.8（C⁃8），111.1（C⁃8a），144.5（C⁃9），132.9（C⁃10），142.0（C⁃11），106.6（C⁃12），133.6（C⁃12a），42.3（C⁃13），69.4（C⁃14），101.5（9⁃OCH2O⁃10），56.6（11⁃OCH3），56.1（3⁃OCH3），55.8（2⁃OCH3），28.1（13⁃CH3），21.3，170.4（CH3COO⁃6）。以上数据与文献［9，13］ 报道一致，故鉴定化合物12 为6⁃乙酰基白元胡碱。

化合物13：无色块状结晶（二氯甲烷⁃甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。与白元胡碱对照品共薄层，3 种展开系统Rf值完全一致。故将化合物13 鉴定为白元胡碱。

化合物14：淡黄色针状结晶（甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橘黄色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：386.159 6 ［M＋H］＋，分子式为C21H23NO6。1H⁃NMR（600 MHz，CDCl3）δ：6.91（1H，s，H⁃1），6.82（1H，s，H⁃4），6.63（1H，s，H⁃12），6.01（1H，s，J＝1.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），5.98（1H，s，J＝1.9 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.45（1H，d，J＝14.8 Hz，H⁃8a），4.23（1H，d，J＝14.8 Hz，H⁃8b），4.24（1H，s，H⁃14），4.18（1H，m，H⁃6），3.89（3H，s，3⁃OCH3），3.17（1H，d，J＝3.9 Hz，H⁃5β），3.12（1H，s，H⁃5α），2.69（3H，s，7⁃NCH3），1.23（3H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（150 MHz，CDCl3）δ：40.8（N⁃CH3），119.8（C⁃1），125.4（C⁃1a），144.5（C⁃2），149.8（C⁃3），112.0（C⁃4），118.3（C⁃4a），34.2（C⁃5），74.8（C⁃6），52.0（C⁃8），133.7（C⁃8a），144.4（C⁃9），133.1（C⁃10），141.2（C⁃11），108.0（C⁃12），103.5（C⁃12a），40.8（C⁃13），69.1（C⁃14），101.9（9⁃OCH2O⁃10），55.0（3⁃OCH3），21.9（13⁃CH3）。以上数据与文 献［14］ 报道一致，故鉴定化合物14 为2，11⁃二去甲基白元胡碱。

化合物15：为黄色无定型粉末（甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橙红色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：351.139 0 ［M＋H］＋，分子式为C21H20NO4。1H⁃NMR（400 MHz，CD3OD）δ：9.74（1H，s，H⁃8），8.00（1H，d，J＝8.9 Hz，H⁃11），7.90（1H，d，J＝8.9 Hz，H⁃12），7.38（1H，s，H⁃4），7.13（1H，s，H⁃1），6.48（1H，s，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），6.44（1H，s，J＝1.5 Hz，9⁃OCH2O⁃10），4.79（2H，t，J＝9.0 Hz，H⁃6），3.96（3H，s，3⁃OCH3），3.92（3H，s，2⁃OCH3），3.20（2H，t，J＝9.0 Hz，H⁃5），3.03（1H，s，13⁃CH3）；13C⁃NMR（100 MHz，CD3OD）δ：111.5（C⁃1），151.6（C⁃2），148.0（C⁃3），110.6（C⁃4），27.2（C⁃5），57.3（C⁃6），142.5（C⁃8），133.1（C⁃8a），147.7（C⁃9），145.2（C⁃10），114.6（C⁃11），119.2（C⁃12），133.1（C⁃12a），119.4（C⁃13），131.1（C⁃14），112.0（C⁃14a），104.9（9⁃OCH2O⁃10），55.7（3⁃OCH3），55.3（2⁃OCH3），17.3（13⁃CH3），以上数据与文献［15］ 报道一致，故鉴定化合物15 为去氢卡维丁。

化合物16：为橙黄色针状结晶（甲醇），改良碘化铋钾溶液喷雾显橙红色斑点。HR⁃ESI⁃MSm／z：329.139 2 ［M＋H］＋，分子式为C20H20NO4。1H⁃NMR（400 MHz，CD3OD）δ：9.44（1H，s，H⁃8），8.60（1H，s，H⁃13），7.80（1H，d，J＝8.9 Hz，H⁃11），7.68（1H，d，J＝8.9 Hz，H⁃12），7.58（1H，s，H⁃1），6.99（1H，s，H⁃4），4.86（1H，t，J＝6.0 Hz，H⁃6），4.06（3H，s，2⁃OCH3），3.94（3H，s，10⁃OCH3），3.90（1H，s，9⁃OCH3），3.22（1H，t，J＝6.0 Hz，H⁃5）；13C⁃NMR（100 MHz，CD3OD）δ：112.3（C⁃1），153.2（C⁃2），143.4（C⁃3），109.6（C⁃4），133.2（C⁃4a），28.1（C⁃5），56.7（C⁃6），143.7（C⁃8），124.3（C⁃8a），150.8（C⁃9），156.5（C⁃10），129.5（C⁃11），121.4（C⁃12），135.6（C⁃12a），124.3（C⁃13），137.3（C⁃14），121.1（C⁃14a），61.7（2⁃OCH3），57.1（10⁃OCH3），57.0（9⁃OCH3），以上数据与文献［16］ 报道一致，故鉴定化合物16 为药根碱。

4 抗肿瘤活性实验

MTT 比色法对化合物1～16 进行人肿瘤HepG2细胞、HCT116 细胞、A549 细胞和HL60 细胞的增殖抑制活性筛选［17］。结果表明，化合物6、11、14对HCT116 细胞均显示不同程度的增殖抑制作用，其中化合物6 对HCT116 细胞抑制作用强于紫杉醇，IC50为（9.30±1.06）μmol／L；化合物1 对A549 细胞显示较强的增殖抑制作用，但其抑制作用弱于紫杉醇，IC50为（20.89±3.13）μmol／L，见表1。其余化合物对4 种人肿瘤细胞均无明显增殖抑制活性，IC50值均大于100 μmol／L。

表1 化合物对4 种人肿瘤细胞的IC50值（μmol／L，，n＝3）Tab.1 IC50 values of compounds against four types of tumor cells（μmol／L，，n＝3）

表1 化合物对4 种人肿瘤细胞的IC50值（μmol／L，，n＝3）Tab.1 IC50 values of compounds against four types of tumor cells（μmol／L，，n＝3）

5 讨论

本研究从东北延胡索块茎中分离得到3 种结构类型异喹啉类生物碱，化合物1～4 为原小檗碱型，化合物5～14 为六氢苯菲啶型，化合物15～16 为小檗碱型。化合物4、14～16 首次从东北延胡索块茎中分离得到，化合物15、16 为首次从东北延胡索植物中分离得到。紫堇属植物中的异喹啉类生物碱成分对HCT15 和A549 等肿瘤细胞表现出增殖抑制活性［18］。化合物6 对HCT116 细胞表现出较强的抑制活性，可能与母核中C⁃3 位酚羟基有关。东北延胡索中异喹啉类生物碱的抗肿瘤活性具有很大的开发潜力，为进一步研究抗肿瘤新药提供一定帮助。