CD71与E-cadherin在丙酸睾酮诱导的前列腺组织中的表达

张 强 ，杨晓亮，杨晓波,师宏斌，赵瑞宁，张 超

随着老龄化社会的不断进展，在男性人群中前列腺增生的发病率不断增高，越来越多的中老年男性正遭受着前列腺增生症状所致的痛苦，也越来越受到临床工作者及研究者的重视和关注[1]。目前，对于前列腺增生的治疗主要包括药物治疗和手术治疗，随着科学技术的不断发展，手术治疗的方式也呈现出多样性[2]。然而，对于前列腺增生的治疗缺乏特别安全有效的治疗手段。因此，对于前列腺增生发病机制的研究显得越来越重要。前列腺增生的病理生理特点有前列腺上皮细胞和间质细胞非恶性增生[3]。研究发现，细胞的增殖和凋亡紊乱会致使上皮细胞和间质细胞的持续增殖，而转铁蛋白受体(CD71)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)与细胞的增殖和凋亡密切相关[4-6]。但目前关于这两种蛋白在前列腺增生机制中的作用鲜见报道。因此，本研究拟探讨CD71与E-cadherin在丙酸睾酮诱导的前列腺组织中的表达。

1 资料与方法

1.1 一般资料：6周龄12只昆明SD大鼠，雄雌各半，随机分为模型组(n=6)和对照组(n=6)。实验动物由宁夏医科大学动物实验中心(SPF级)提供，许可证号：SCXK(宁)2019-0001。

1.2 主要试剂和仪器：丙酸睾酮购自上海通用药业股份有限公司，兔来源的一抗CD71与E-cadherin抗体、山羊来源的二抗等购自北京中杉金桥生物技术有限公司，免疫组化试剂盒等购自博士德生物有限公司，蛋白提取试剂盒购自凯基生物有限公司。

1.3 模型建立及标本制备：模型组大鼠皮下注射丙酸睾酮1 mL(2.5 mg/kg·d)[7]，对照组给予相同剂量生理盐水皮下注射，连续4周，末次注射后，在无菌低温下剖腹取前列腺，左侧前列腺置于-80 ℃保存，右侧前列腺用4%的多聚甲醛固定。

1.4 免疫组织化学检测：石蜡包埋前列腺组织进行4 μm切片，60 ℃烤箱烤片4 h，二甲苯梯度脱蜡，无水乙醇梯度脱水，抗原修复，CD71和E-cadherin一抗孵育、二抗孵育、DAB显色。苏木精复染，脱水、透明，中性树胶封片，显微镜下观察阳性表达情况。

1.5 蛋白印迹检测：蛋白提取、煮沸5 min，-80 ℃保存。SDS-PAGE电泳，一抗孵育：将抗β-actin按1∶10 000比例稀释，一抗CD71与E-cadherin均按1∶2 000比例稀释，室温摇床孵育；二抗孵育：山羊抗兔二抗按1∶10 000稀释，室温摇床孵育；滴加超敏ECL化学发光底物、暗室曝光，用Image J软件进行灰度值分析。

1.6 统计学方法：采用SPSS 19.0统计软件，计量资料采用两独立样本t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠前列腺组织免疫组织化学染色检测：CD71与E-cadherin蛋白在前列腺上皮细胞细胞中的细胞膜及细胞质中均有阳性表达，见图1至图2(封三)。

2.2 大鼠前列腺组织蛋白印迹检测：模型组CD71与E-cadherin蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.05)，见表1与图3至图4(封三)。

3 讨论

良性前列腺增生(BPH)是中老年男性患者常见的一种疾病，严重影响着中老年男性的身体健康及生活质量，目前治疗手段主要是药物治疗和手术治疗，但手术治疗后仍有一定的复发率。因此，对于BPH的发病机制研究越来越受到相关学者的重视。有研究发现，其发生可能与细胞增殖与凋亡失衡、氧化应激以及激素异常分泌等有关，具体发病机制尚不十分清楚[3,8]。本实验室采用不去势、皮下注射丙酸睾酮诱导大鼠前列腺模型更贴合中老年BPH患者的生理特点[7]。

CD71是转铁蛋白受体，在人体多种细胞中表达，其能介导细胞内铁的摄取，并可调节细胞的增殖和凋亡，其与转铁蛋白结合后主要表达于增殖细胞的细胞膜，从而调控细胞对铁的吸收，从而促进DNA的合成，增进细胞的增殖[9-11]。研究发现，增殖活跃的非肿瘤细胞和肿瘤细胞中，CD71的表达明显增高，CD71在肿瘤细胞中的表达情况可间接反映肿瘤的增殖状况[12-13]。本实验研究发现，在前列腺增生模型组，CD71表达明显高于对照组，可间接看出前列腺上皮细胞中CD71的高表达对于上皮细胞的增生起到了重要作用。

E-cadherin是表皮-钙黏附素，具有上皮细胞亲和性的分子，是维持上皮细胞结构完整性和极性的跨膜糖蛋白[14]。研究发现，其对细胞的生长和增殖具有重要作用。随着对E-cadherin研究的不断深入，发现其可影响Wnt信号通路的传导，Wnt信号通路在细胞的增殖分化中起到了关键性的作用，同时，E-cadherin与β-catenin通路是相互融合的，而β-catenin在Wnt信号通路中又发挥着重要作用[15]。因此，E-cadherin与Wnt信号通路能协同调节细胞的增殖分化。本实验中，模型组前列腺上皮细胞E-cadherin表达明显高于对照组，说明前列腺上皮细胞E-cadherin高表达，致使细胞增殖分化能力增强，增加了前列腺上皮细胞的增殖能力，与前列腺增大有关。

丙酸睾酮诱导的前列腺组织中CD71与E-cadherin高表达，其高表达可增加前列腺上皮细胞的增殖以及分化，使得前列腺不断增大，从而导致前列腺增生疾病的发生。本实验为前列腺增生的发病机制提供了新的科学依据，但疾病的发生是受多方面因素的影响，其具体机制仍需进一步探讨。