解毒化痰平喘汤对重症肺炎患者PRDX6蛋白表达影响的临床研究*

吴 倩 邓扬嘉 孙小平 许 峰

（重庆市中医院，重庆 400021）

重症肺炎是常见的呼吸危急重症之一，常伴有严重的呼吸窘迫及血流动力学障碍，治愈难，死亡率高达50%～70%［1］。最新研究表明，与轻症肺炎不同，重症肺炎发病与氧化应激有着更加密切的联系，如在氧化应激相关基因［2］CCL5的表达上存在明显差异性。过氧化物酶6（PRDX6）作为肺部重要的氧化应激蛋白，在肺泡上皮细胞凋亡，肺泡表面活性物质代谢，膜损伤的修复等肺炎过程中起到至关重要的作用［3-5］。故本研究根据重症肺炎毒入营阴，痰浊壅肺，肺肾亏虚的病机，以解毒化痰平喘汤为治疗手段，重症肺炎氧化应激理论为切入点，观察其对肺泡巨噬细胞内PRDX6表达及血清过氧化脂质（LPO）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的影响，以期阐明其治疗机制。

1 资料与方法

1.1 病例选择 1）纳入标准：西医诊断标准参考2007 IDSA/ATS重症肺炎诊断标准［6］；中医证候分类参照《中医病证诊断疗效标准》［14］“风温肺热病”中痰热壅肺、气阴两虚证；患者及家属自愿并签署知情同意书。2）排除标准：肺部肿瘤、肺结核者；免疫抑制如艾滋病、肿瘤放化疗、风湿结缔组织病者；入院后24 h内死亡者；肠内营养禁忌证者。

1.2 临床资料 选择2018年7月至2021年7月入住重庆市中医院ICU的重症肺炎患者60例，脱落5例，实际研究病例55例。其中试验组28例，男性17例，女性11例；平均年龄（68.16±18.15）岁；急性生理学与慢性健康状况评分Ⅱ（APACHEⅡ）评分（18.41±6.31）分，动脉血乳酸（Lac）（7.15±2.38）mmol/L，C反应蛋白（CRP）（81.57±30.01）mg/L，降钙素原（PCT）（7.32±2.35）ng/mL。对照组27例，男15例，女性12例；平均年龄（70.23±19.45）岁；APACHEⅡ评分（18.04±5.94）分；动脉血乳酸（7.85±2.51）mmol/L，CRP（78.36±28.15）mg/L，PCT（8.01±2.58）ng/mL。两组患者临床资料差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.3 治疗方法 对照组给予常规西医治疗。试验组在常规西医治疗基础上加用解毒化痰平喘汤治疗，组成：黄芩15 g，金银花30 g，玄参15 g，姜半夏9 g，陈皮12 g，藿香15 g，桔梗15 g，白芍15 g，白果12 g，黄芪20 g，苍术12 g，白术12 g，白茯苓15 g，麦冬15 g，当归15 g，生甘草6 g。中药煎剂由重庆市中医院中药房提供，鼻饲，每日3次，每次50 mL。两组疗程均为7 d。

1.4 疗效标准［8］中医证候积分：痰多质稠、腥臭痰、脓性痰为4分，痰少质稠、痰黏难咯为3分，喉中痰鸣痰壅为2分，咯血、痰中带血为2分；气喘、喘不能卧为3分；肺部干、湿啰音为2分；经常便秘为2分，便秘为1分；尿短黄为2分；苔黄、腻为2分，苔剥、少、无为2分，苔黄、干燥为1分；脉滑、数为2分，脉细为1分。根据尼莫地平法计算减分率［9］，分为痊愈、显效、有效、无效。减分率=（治疗前积分-治疗后积分）÷治疗前积分×100%，减分率≥90%为痊愈，70%≤减分率＜90%为显效，30%≤减分率＜70%为有效，减分率＜30%为无效。

1.5 观察指标 1）两组治疗前后肺泡灌洗液的采集及肺泡巨噬细胞内PRDX6表达的测定。参考最近胸部CT，遵循“灌洗病变叶段”的原则，影像学提示双肺弥漫性病变时，推荐选择右肺中叶或左肺舌段。利多卡因局部麻醉，气管插管进镜，支气管镜顶端嵌顿在目标支气管段或亚段开口后，经操作孔道快速注入灭菌生理盐水，总量为20～30 mL，分次注入（每次10 mL）。负压吸引获取肺泡灌洗液，总回收率≥50%；肺泡巨噬细胞（AM）分离、纯化和培养后，用Western blotting方法测定PRDX6水平。2）血浆过氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）测定。采用ELISA法检测，按照试剂盒说明进行。3）检测两组入院时及治疗第7天APACHEⅡ评分、动脉血乳酸（Lac）、CRP水平、PCT水平。

1.6 统计学处理 应用SPSS 23.0统计软件。计量资料以（±s）表示，采用方差检验和t检验；计数及等级资料采用非参数检验、χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组临床疗效比较 见表1。试验组患者中医证候总有效率高于对照组（P＜0.05）。

表1 两组临床疗效比较（n）

2.2 两组治疗前后肺泡巨噬细胞内PRDX6表达水平比较 见表2。两组治疗前PRDX6组间对比差异无统计学意义（P＞0.05），治疗后PRDX6水平明显上升（P＜0.05），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）

表2 两组治疗前后肺泡巨噬细胞内PRDX6表达水平比较（±s）

表2 两组治疗前后肺泡巨噬细胞内PRDX6表达水平比较（±s）

注：与本组治疗前比较，*P＜0.05；与对照组治疗后比较，△P＜0.05。下同。

治疗后组 别n 治疗前0.79±0.23*△0.59±0.19*试验组对照组28 27 0.31±1.10 0.35±0.12

2.3 两组治疗前后血清LPO水平及GSH-Px活性比较 见表3。两组治疗前血清LPO及GSH-Px组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后两组LPO水平下降，GSH-Px活性上升，差异有统计学意义（P＜0.05），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

表3 两组治疗前后血清LPO水平及GSH-Px活性比较（±s）

表3 两组治疗前后血清LPO水平及GSH-Px活性比较（±s）

组别时间LPO（ng/mL）GSH-Px［U/（g·Hb）］试验组（n=28）对照组（n=27）治疗前治疗后治疗前治疗后20.64±6.41 15.72±4.93*△22.86±5.27 18.35±4.19*135.62±34.32 184.06±53.15*△121.61±35.06 154.28±47.08*

2.4 两组治疗前后APACHEⅡ评分及动脉Lac、PCT、CRP水平比较 见表4。两组治疗前APACHEⅡ评分及动脉Lac、PCT、CRP组间对比差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后两组APACHEⅡ评分下降，Lac、PCT、CRP水平下降（P＜0.05），组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

表4 两组治疗前后APACHEⅡ评分及动脉Lac、PCT、CRP水平比较（±s）

表4 两组治疗前后APACHEⅡ评分及动脉Lac、PCT、CRP水平比较（±s）

组别试验组（n=28）对照组（n=27）时间治疗前治疗后治疗前治疗后APACHEⅡ评分（分）18.41±6.31 1.38±0.48*△18.04±5.94 2.03±0.72*Lac（mmol/L）7.15±2.38 2.98±0.98*△7.85±2.51 3.68±1.06*PCT（ng/mL）7.32±2.35 1.24±0.42*△8.01±2.58 1.99±0.75*CRP（mg/L）81.57±30.01 35.23±12.33*△78.36±28.15 42.89±14.11*

3 讨论

重症肺炎常伴有严重呼吸衰竭、脓毒性休克等危及生命的并发症［10］。尽管近年来重症医学在机械通气、血流动力学监测及抗生素应用等方面取得了巨大的进步，但重症肺炎ICU死亡率仍在11%～56%［11］。研究表明重症肺炎与氧化应激有着密切联系，重症社区获得性肺炎患者相比正常患者具有明显升高的氧化应激水平［12］。本试验前期研究发现，对于部分重症肺炎呼吸机依赖患者，其表面活性物质SP-A水平有明显下降［13］，而SPA的肽序列可通过影响Prdx6的肽序列，调节其磷脂酶 A2（PLA2）活性［14］，进而影响Prdx6氧化应激功能，故研究Prdx6在重症肺炎氧化应激中的作用有重要意义。PRDX6同时具有GSH-Px和PLA2活性。GSH-Px可清除机体内的H2O2及其他过氧化氢物，提高机体抗氧化能力［3］；而PLA2在分解代谢膜磷脂过程中会生成大量氧自由基，过度的氧自由基会触发脂质过氧化反应产生大量LPO，引起细胞膜结构及功能变化导致Ca2+细胞内流，而Ca2+细胞内流则会进一步激活PLA2，故抑制PLA2活性可减少LPO的生成［4-5］。

1994版《中医病证诊断疗效标准》中［7］首次将重症肺炎归于中医“风温肺热病”范畴，因其常同时伴有脓毒性休克、严重呼吸衰竭，多脏器功能受累的临床特征，将其病因病机归纳为毒入营阴，痰浊壅肺，肺肾亏虚。针对其病因病机，笔者组方解毒化痰平喘汤，方中黄芩、金银花、玄参为君，清热解毒，凉血开郁；姜半夏、陈皮、藿香、桔梗理气化痰，散结排脓，白芍、白果缓急平喘，共为臣药；黄芪、苍术、白术、白茯苓健脾运脾，补土生金，麦冬、当归补血活血，养阴润燥，共为佐药；生甘草为使药，清热化痰，缓和药性。诸药合用，起到解毒凉营，化痰清肺，纳肾平喘之功效。

通过治疗前后数据对比发现，解毒化痰平喘汤可增加肺泡巨噬细胞内PRDX6蛋白表达，降低LPO水平，增加GSH-Px活性，提示肺泡巨噬细胞内PRDX6蛋白水平与抗氧化应激能力呈正相关。Y Min等［15］发现，PRDX6是一种同时具有GSH-Px和PLA2活性的过氧化物酶超家族成员［16-17］，在线粒体内可通过与traf6的C端traf-c域结合，阻断炎症通路受体TLR4刺激诱导的复合物traf6-ecsit的形成，从而抑制核转录因子-κB（NF-κB）的生成，且同时减少了线粒体中MROS的产生，起到抑制细菌活性，减轻炎症损伤的作用。

此外，本研究结果提示解毒化痰平喘汤可减少APACHEⅡ评分，降低动脉血乳酸、CRP、PCT水平，故也间接提示了本方对重症肺炎严重程度及预后的改善作用。APACHEⅡ评分［18］作为ICU最为常见的评分系统，在重症感染系统疾病，如重症肺炎、急性呼吸窘迫征、脓毒性休克中能准确反映28 d死亡率及住院死亡率［19］。Lac是机体无氧代谢的产物，是反映组织微循环及氧化应激损伤的重要指标，其水平可反映肺炎严重程度，预测住院死亡率［20］。另外，作为最为简洁、迅速、经济的感染血指标［21］，与其他感染生物标志物相比，CRP、PCT在敏感性和特异性上远优于白细胞计数和血沉等［22］，可准确反映社区获得性肺炎的严重程度及其住院和28 d死亡率［23］。

本文以重症肺炎氧化应激理论为切入点，证明了PRDX6在重症肺炎氧化应激损伤中的重要提示性作用，且通过LPO及GSH-Px水平等细胞氧化应激损伤相关指标及预后相关指标的改善，证明了本方在重症肺炎治疗中的有效性。限于本研究的局限性及不足，对于解毒化痰平喘汤在重症肺炎TLR4-NF-κB、p38MAPK/NF-κB［24］等相关氧化应激通路中作用，需要更深入的基础研究。