全自动血培养仪对血液、无菌体液培养阳性的作用分析

陈千红 厦门市第三医院 （福建 厦门 361000）

内容提要： 目的：探讨全自动血培养仪在血液、无菌体液培养阳性中所起到的作用。方法：基于特定时间（2020年7月～2021年7月）及固定范围内（本院），收集血液、无菌体液标本2590份，采用全自动血培养仪进行培养，用自动细菌鉴定仪进行鉴定。结果：在所选取的血液、无菌体液标本当中，检出264份阳性标本（10.2%），假阳性率为0.15%；在264份病原菌当中，2.7h为其最快检出时间，12h、24h、48h、72h内检出占比分别为26.9%、51.1%、86.0%、95.8%；厌氧瓶先报警、需氧瓶后报警，需氧瓶先报警、厌氧瓶后报警的样本所占比重分别为40.5%、34.5%，需氧瓶先报警、但厌氧瓶不报警占11.8%。结论：全自动血培养仪具有灵敏度高、操作简便等优点，不仅能促进细菌检出种类、阳性率的提升，而且检出更准确、速度更快，能够为患者诊治争取宝贵时间。

感染尤其是血液感染是一类常见且严重的临床感染类型，会引发弥漫性血管内凝血、多器官衰竭及休克等，严重者可诱发死亡。近年，血液感染在整个医院感染当中的发生率呈现出逐渐且快速升高趋向，而在对血液感染进行诊断时，血培养为其金标准，而其方法已经从之前的半人工、半自动不断向全自动检测转变，而在全自动检测中，随着医疗设备的持续推新，自动化血培养仪在临床中越发广泛的应用，使得血液感染当中进行血培养变得更加的准确、可靠，并且还已经成为其重要的诊断手段[1-3]。本文围绕所采集的血液、无菌体液标本，采用全自动血培养仪进行培养，分析其阳性测定效果与价值，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 临床资料

在2020年7月～2021年7月，采集2590份血液、无菌体液标本（多为住院患者），其中，血液标本1763份，无菌体液标本827份。针对发热患者，于发热高峰期或者初期，在使用抗菌药物之前，针对那些对抗菌药物已经有使用经历的，需于下次用药之前实施采血、采体液操作（用无菌方法），然后将其均置入到事先准备好的培养瓶当中。采血、体液量：成人为16～20mL，分别向需氧树脂培养瓶、厌氧培养瓶中注入，每瓶为8～10mL；对于儿童而言，则需采集1～5mL，并且以一种合理、规范的方式注入至儿童树脂培养瓶当中。需要指出的是，当完成标本注入工作之后，需即刻送检，并且及时进行上机处理。针对所采用的仪器来讲，即全自动血培养仪（美国BD公司生产，BACTEC FX型）及梅里埃自动细菌鉴定仪（VITEK2型），分别开展细菌生化鉴定及药物敏感性分析。

1.2 方法

①阴性瓶处理。经血培养仪检测后，如果发现有阳性瓶，此时，即刻将其中的阳性培养瓶挑选出来，在始终秉持无菌原则的前提下实施相关操作；用注射器将瓶中当中的适量样本进行抽出，然后分别向歌伦比亚血平板、巧克力平板上进行逐一转种，而针对完成转种的巧克力平板、血平板，则需要放到二氧化碳（浓度设定为5%）培养箱当中（过夜）；然后直接进行涂片，并实施规范化的革兰染色镜检操作；针对所得到的镜检结果，需要及时进行报告。对于经纯培养而最终获得的细菌，需要用自动细菌鉴定仪，以细胞为对象，对其实施生化鉴定，并且还需要开展药敏试验。需要指出的是，采用血培养仪进行检测之后，如果呈阳性，但在具体的转种细菌培养结果上却呈阴性，另外，经涂片革兰染色镜检得知，从中并无细菌，那么则可将其断定为假阳性；②阴性瓶处理。进行常规培养（时间为5d），之后进行仪器检测，如果呈阴性，则对其实施常规卸瓶操作，且对液体展开图片（血培养瓶中），与此同时，还需要转种至各琼脂平板上，若未发现细菌滋生情况，则为真阴性；如果相反，即发现存在细菌生长，即假阴性。

2.结果

2.1 阳性率

在所采集标本当中，有268份仪器报警阳性，其所占的比重是10.3%；4株为假阳性，其在整个总报警阳性当中的比重中是1.49%，与之相对应的假阳性率为0.15%；另外，经检测发现有264份的阳性标本（10.2%），无假阴性。

2.2 病原菌分布

在所有的报警阳性培养瓶中，通过实施分离处理，从中得到264株的病原菌，其中，革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌占比分别是61.0%、32.9%，另外，革兰阳性杆菌、革兰阴性球菌为1.5%、0.4%，3.8%、0.4%分别是真菌、厌氧菌所站的比重，见表1。

表1. 病原菌分布情况

2.3 病原菌阳性报警时间及菌种检出率

在所有的病原菌中，最快检出时间是2.7h，12h、24h、48h、72h内检出占比分别为26.9%、51.1%、86.0%、95.8%，见表2。

表2. 病原菌阳性报警时间、菌种检出率[n(%)]

2.4 阳性病原菌于厌氧瓶、需氧瓶中的检出结果

厌氧瓶先报警、需氧瓶后报警的样本占比为40.5%，而需氧瓶先报警、厌氧瓶后报警的则占34.5%，需氧瓶先报警、但厌氧瓶不报警所占比重为11.8%，见表3。

表3. 阳性病原菌于厌氧瓶、需氧瓶中的检出结果

3.讨论

从本文结果可知，通过对2590份血液、无菌体液标本进行深入分析，从中发现，真阳性一共为264份，阳性率为10.2%，此结果与相关报道[4]的结果相近，即该研究指出，在1364例阳性报警标本当中，真阳性标本为176例，占比为12.90%。但需要指出的是，其与既往采用双相培养瓶的阳性率作对比，有了显著提高。究其原因，可能与培养检测方式发生改变，自动细菌鉴定仪能够进行培养、监测，是一种非介入性检测，能够将人为干预全部排除掉，并且还能实现污染机会的减少，能够将阳性结果随时发现，为血液、无菌体液标本中病原菌的快速检出奠定根基。

在本文当中，发现假阳性为4例（0.15%）。之后围绕这些患者，查阅其病历，并且展开深层次、全面性的剖析，从中发现，白血病3例，其在具体的白细胞数上十分高。有研究[5]发现，白血病患者的血液当中存在着非常高的粒细胞含量，在其代谢当中，会有大量的二氧化碳（CO2）产生，因而会使假阳性产生。另外1例患者的最终结果之所以会是假阳性，究其原因，可能因为在实际培养时，出现突然停电情况（并且连续2次），受此影响，仪器的运行出现失稳情况，最终造成错报状况的发生[6]。因此，围绕所得到的假阳性结果，需要与临床实际相结合，在试验过程中将各试验条件控制好，尽可能防止假阳性的发生，为血液、无菌体液培养阳性报警结果的更好分析、掌握提供切实便利。

在本文当中，经血液、无菌体液培养发现，大多是革兰阴性杆菌感染，其所占比重为61.2%，而真菌、革兰阳性球菌分别占3.8%、32.9%，厌氧菌、革兰阴性球菌、革兰阳性杆菌所占比重分别为0.4%、0.4%、1.5%。在具体的分离率上，大肠埃希菌为最高的病原菌，所占比重为36.1%，而假鼻疽伯克霍尔德菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌以及表皮葡萄球菌则位居其次。其与相关研究[7]的结论存在差异，即前5种病原菌分别是凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌与铜绿假单胞菌；但在分离率上却存在一致性，即最高的都是大肠埃希菌。

从本文发现，自动细菌鉴定仪对阳性标本的检出速度快，在具体的阳性检出的最快时间上，即为2h，24h、48h、72h内所检出的阳性占比分别为51.1%、86.0%、95.8%，因此，其能够为临床诊治提供可靠支撑。另外，还需要指出的是，通过深层次剖析阳性报警时间，从中得知，其与细菌种类间，有着十分紧密的联系，也就是说，不同的种属细菌，与之相对应的检出时间，也会存在不同程度的差异性，如大肠埃希菌，其在具体的阳性检出时间上最快，而对于肠杆菌科细菌，其在12h内的检出率最高；另外，针对肠球菌属来讲，其在12～24h这一时间段内有着最高的检出阳性占比；针对链球菌属以及葡萄球菌属、非发酵菌，占比最高的是24～48h检出率；另外，还需强调的是，革兰阳性杆菌、真菌相对应的检出时间比较晚。

有研究[8]发现，仅用到了需氧瓶，并未用厌氧瓶进行血液、无菌体液标本培养，其阳性率都＜10.0%。即便使用了全自动血培养仪，也不可因有着过低的厌氧菌阳性率，而仅用需氧瓶而不去使用厌氧瓶；对于肠杆菌科细菌来讲，即便在厌氧瓶、需氧瓶当中都生长，同样存在厌氧瓶较需氧瓶快的情况（多则1d，少则30min），若对厌氧瓶不进行使用，那么便会造成自动化仪器快速性这一效能的丧失，受此影响，便需要增加厌氧瓶的使用数量，如此的话，便会升高兼性厌氧菌的检出率，除此之外，在具体的早期报告时间上也会随之缩短，减少其他细菌以及厌氧菌漏检情况的发生[9]。所以，在进行血液、无菌体液培养时，需要同时进行厌氧瓶、需氧瓶操作。

在进行血液、无菌体液培养时，假阴性有着比较大的危害性，其主要原因为：①当遭受真菌感染时，真菌对糖所具有的代谢能力较传统细菌低，因此，在代谢过程中，会有非常低的CO2产生能力，最终便会出现假阴性情况；②如果是非发酵菌感染，此时，难以对葡萄糖进行发酵，仅能对葡萄糖进行氧化，使其产酸，并且产酸产气量低于发酵菌，因而会有较低的CO2产量，最终便会造成假阴性[10]；③可能与抽血后培养瓶中置入仪器前置室温中过久相关；④苛养菌感染，包含有链球菌，此类细菌在进行培养时，有着缓慢的生长速度，而且还有着非常低的代谢能力，造成培养瓶当中各指标的变化均较仪器的检测范围低，最终引起假阴性[11]。所以，如果经检测发现结果与阴性，此时，盲转十分有必要。而对于假阳性结果，国内有研究[12]指出，白细胞过高（＞10×109/L）能够释放一定的CO2，改变pH值，从而出现假阳性。另外，如果采集样本量＞12mL，造成瓶内富集大量的白细胞，或因温度失稳而引发仪器假阳性。

对于全自动血培养仪而言，其所具有的优点就是有着较简单的操作方法，并且灵敏度高，可实现校准的自动化。通过同时使用含树脂需氧培养瓶、含溶血素厌氧培养瓶，并且借助仪器的自动摇匀动作（也就是24h连续恒温阵列），便可以促进微生物的生长，促进阳性结果的检出率的最大程度提升，并且还能够使细菌种类数检出数增多，因而最终可强化检出速度，提高检出准确性。