比较不同产地白术中挥发油及两种白术内酯活性成分的含量

黄柏益，田 薇，袁 珂，陈 磊

1 杭州华东中药饮片有限公司，杭州 311301;2 浙江农林大学，杭州 311300

白术为菊科植物白术[1]Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根茎。我国白术的产地主要分布在中部地区及江浙一带，其中浙江是白术的道地产区。浙江白术是有名的“浙八味”之一，其主产地以新昌、磐安最著。而产于临安於潜西天目山一带的白术，由于处于独特的地理环境，因品质优良而被冠为“於术”，在《浙江省中药炮制规范》2015 年版予以收载[2]。近年来，白术在河北等地也广为栽培。

在《中国药典》2020 年版中，白术质量控制方法较为简单，无含量测定项。现建立了白术挥发油主要成分的定性分析及白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定方法，并比较了不同产地白术挥发油的组成、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量。

1 仪器与药品、试剂

Waters 2695 高效液相色谱仪（美国Waters 公司）；Finnigan 气相色谱－串联质谱联用仪（美国菲尼根公司）；十万分之一分析天平（METTLER AE 240，瑞士）。挥发油提取器（四川蜀玻集团公司）。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；水为蒸馏水。

白术内酯Ⅱ（批号1018-090908）与白术内酯Ⅲ（批号1018-090812）对照品（购自江西本草天工科技有限责任公司，纯度均＞98%）。临安於术（9 批）、磐安白术（8 批）、河北白术（7 批），经浙江农林大学田薇教授鉴定确认，其产地等信息见表1。

表1 样品批号、采集地和挥发油总量

2 方法与结果

2.1 挥发油的提取与测定

2.1.1 挥发油的提取及总量测定 分别将不同产地白术粉碎成粗粉，各取样50 g 左右放入1000 mL的圆底烧瓶中，加入350 mL 的蒸馏水，安装挥发油提取器，提取挥发油至尽。收集挥发油，测量其体积，计算得油率。结果见表1。

采用水蒸馏提取检测挥发油含量，磐安白术较临安於术检测值略高，河北白术最低。其中磐安白术、临安於术饮片较河北白术分别高出71.4%、68.4%，相对含量较高，浙产白术有较明显优势。

2.1.2 GC－MS 测定条件 气相色谱条件[3]：色谱柱为OV-1701（30 m×0.25 mm，0.25 μm）毛细管柱；升温程序：初始温度50℃，保持2 min，以10℃·min-1的速度升至130℃，再以5℃·min-1的速度升至190℃；继续以12℃·min-1的速度升至240℃，保持4 min；进样口温度200℃，气化室温度250℃；载气为氦气，流速：0.8 mL·min-1；分流比30∶1，进样量：0.1 μL。

质谱条件：电子轰击（EI）离子源；电离能量70eV，离子源温度200℃，检测器电压350 V，扫描质量范围：m/z：33～450 AMU；扫描速度0.5 s；检索的图谱数据库为Willey 和NIST 标准质谱图库。

2.1.3 测定结果 取於术1（批号211004）、磐安10（批号210913）、河北20（批号211101）3 批样品挥发油，按“2.1.2”测定条件进行分析化合物的定量，采用面积归一化法，使用Hewlett-Packard 软件处理系统计算各峰面积，以测得挥发油各组分的相对百分含量；按照上述GC/MS 测定条件对各饮片中提取得到的挥发油进行化学成分分析。

对总离子流图中的各峰经过质谱扫描后，通过质谱数据系统（NIST 和Willey 标准图谱数据库）检索对照，并查阅有关质谱资料，鉴定、计算出不同产地饮片中的挥发油的化学成分。见表2。

由表2 知，临安於术、磐安白术、河北白术的饮片中的挥发油成分，经GC/MS 检测，共从中分离出38 个成分，鉴定出25 种成分（见表2），其中相对含量在1.0%以上的共11 种。3 批不同产地白术挥发油含量主要为烃类的不同，而醇类、酯类含量无显著差异。挥发油主要成分苍术酮，三者相差不多。

表2 各饮片中挥发油成分分析结果

2.2 白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ的含量测定

2.2.1 HPLC 色谱条件及系统适应性试验[4]Waters XBridge C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相A：甲醇，流动相B：水，梯度洗脱（程序为：0～40 min 60%～100% A）；检测波长为230 nm（0～17 min）和276 nm（17～25 min）；柱温：30℃；流速：1.0 mL·min-1；灵敏度0.2 AUFS。在上述色谱条件下，白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ色谱峰与相邻色谱峰分离度大于2.0，理论塔板数均大于6000。

2.2.2 对照品及供试品溶液的制备 对照品溶液：分别精密称取白术内酯Ⅱ对照品3.01 mg，白术内酯Ⅲ对照品3.98 mg，置50 mL 量瓶中，加甲醇至刻度。从中取1 mL 置10 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，制成白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ浓度分别为0.006 02、0.007 96 mg·mL-1的混合溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液：将样品粉碎成细粉，称取约1.0 g，精密称定，置于锥形瓶中，加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足失重，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 线性关系考察 精密依次吸取混合对照品溶液5、10、15、20、25 μL，按上述色谱条件进样测定。以对照品质量X（μg）为横坐标，峰面积积分值Y 为纵坐标进行线性回归，计算白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ的回归方程，分别为：Y=5.52×106X+1.51×104，r=0.999 8；Y=2.00×106X+2.89×103，r=0.999 9。表明白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ分别在0.030 1～0.150 5 μg与0.039 8～0.199 0 μg 范围内线性关系良好。

2.2.4 进样精密度试验 精密吸取供试品溶液10μL，按上述色谱条件进样测定，连续进样6 次，测定峰面积。白术内酯Ⅱ的峰面积分别为222 758、223 068、225 290、226 096、235 627、234 527，RSD 为2.51%；白术内酯Ⅲ的峰面积分别为296 119、294 699、294 623、304 826、299 374、294 832，RSD 为1.36%，表明精密度良好。

2.2.5 重复性试验 取同一批样品（批号211004）平行取样6 份，每份约1.0 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 μL，按照上述色谱条件进样测定峰面积，计算含量，结果白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ含量的RSD 分别为0.75%和1.91%，表明重复性良好。

2.2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液（批号211004），分别于0、3、6、9、12、15 h 进样10 μL，记录峰面积，结果白术内酯Ⅱ的峰面积分别为228 008、223 068、225 192、235 141、226 084、234 498，RSD 为2.20%。白术内酯Ⅲ的的峰面积分别为294599、295324、294 522、298 313、304 927、294 134，RSD 为1.41%，表明供试品溶液在15 h 内稳定。

2.2.7 加样回收率试验 精密称取6 份已知含量的同一批样品（批号211004）0.5 g，分别加入白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ对照品溶液适量，按“2.2.2”项下方法制得供试品溶液；分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 μL 注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，计算含量。白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ的平均加样回收率分别为98.6%和98.6%，RSD%分别为2.1%和1.8%。见表3、表4。

表3 白术内酯Ⅱ加样回收率结果（n=6）

表4 白术内酯Ⅲ加样回收率结果（n=6）

2.2.8 含量测定结果 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL 注入高效液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定峰面积，计算各供试品溶液中白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ的含量，结果见图1，表5。

表5 样品含量测定结果

图1 高效液相色谱图

结果表明，临安於术及磐安白术中白术内酯Ⅱ略高于河北白术，白术内酯Ⅲ含量显著高于河北。

2.2.9 聚类分析 24 批样品主要分为两类，将分析结果与产地信息结合发现：1～17 聚为一类，於术和磐安样品；18～24 聚为一类，河北样品；说明不同产地的白术内酯显示出一定地域差别。以含量测定分析，於术和磐安样品的内酯含量明显高于河北的。见图5。

图5 24 批白术样品内酯聚类分析图

3 讨论

饮片中所含的挥发油总量和白术内酯在不同产地有很大不同。挥发油总量（mL·g-1）检测，临安於术、磐安白术分别达1.9%、2.1%，而河北白术挥发油（mL·g-1）仅为0.6%，两者比较相差悬殊。白术内酯Ⅱ与白术内酯Ⅲ总值临安於术最高。有资料显示[5]，於术由于具有土壤肥沃、亚热带气候、降雨、光照、生态群落等环境，挥发油、白术内酯成分的生成及累积要好于河北的白术。