细针穿刺细胞学及抗酸染色用于淋巴结结核诊断的准确性分析

戴素娟 谢训禄 李俊韬 郭广秀

(赣州市人民医院 江西 赣州 341000)

赣州市指导性科技计划项目，编号GZ2018ZSF129

淋巴结结核是指感染结核分枝杆菌所致的淋巴结炎。包括体表和深部淋巴结结核，浅表淋巴结结核以颈部最多，其次为腋下，深部淋巴结结核主要发生在胸腔、腹腔和盆腔。颈部淋巴结预后优良，是良性疾病，最不佳的并发症是反复流脓，产生窦道，影响患者生活质量[1]。临床对此病的观点是系统治疗，虽然为良性疾病，但由于其也会播散，严重时会反复流脓、流水，导致病情迁延不愈，甚至引起慢性窦道。轻者可采用药物保守治疗，严重者需采取手术治疗[2]。此病对人体危害较大，及时准确的诊断能够为治疗提供有效的依据，而准确的诊断是治疗的基础，当下应用广泛的诊断技术当属细针穿刺细胞学、抗酸染色检验，本研究对收治的患者均应用此两种方式诊断，观察效果，报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

时间：2019年1月-2020年12月；赣州市人民医院收治80例淋巴结病变患者，男41例，女39例，年龄40～89岁，平均(45.36±4.22)岁。全部患者资料差异不显著(P>0.05)。

纳入标准：(1)病理结果证实为淋巴结结核；(2)病历资料完善；(3)患者与家属均知情，双方签署知情协议书，经医学伦理委员会审核通过。

排除标准：(1)合并肝、肾、心、脑等严重脏器功能不全者；(2)复治结核病与其他慢性传染性疾病者。(3)精神病史者。

1.2 方法

穿刺涂片，采集标本，镜检全部安排专业病理医师开展，取规格10mL一次性塑料注射器、一次性7号注射针头取材，选取肿大淋巴结，对局部消毒，左手对淋巴结进行固定，右手用注射器经皮穿刺，保证针头刺进肿块后，拉动活塞，收集适量液体变化方向，抽吸不同方位取材。收集足量材料后将负压消除、退针。全部标本均开展细针穿刺细胞学诊断、抗酸染色检验。

细针穿刺细胞学：将材料吸出后选一份开展瑞氏染色-吉姆萨复合染色，安排专业病理医师借助显微镜观察病变细胞形态学特异性结构、特点。

抗酸染色检验：另一份材料直接涂片完成抗酸染色，安排专业病理医师借助显微镜观察。具体步骤为：待检涂片置放于玻璃器皿中，加入已配好的0.4%裂解液TritoX-100，冷藏0.5h，取出涂片完成冲洗，晾干；添加5%苯酚(厂家：广州古德新材料科技有限公司，批号：20180511)复红染色15min，水洗到红色消失；盐酸酒精脱色2次，水洗。添加碱性美兰染液(厂家：济南百博生物技术股份有限公司，批号：20180522)复染5min，水洗、晾干检验，借助油镜背景设置成蓝色，抗酸杆菌呈红色。计算观察两种诊断方式及联合方式诊断的敏感度、特异度、准确度。观察两种诊断方式下淋巴结细胞学分型与抗酸染色结果。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 细针穿刺细胞学诊断淋巴结结核结果

以结核分歧杆菌培养作为金标准，判定淋巴结结核44例，非淋巴结结核36例。以此为依据，判断细针穿刺细胞学诊断淋巴结结核的价值，其敏感度=36/44=81.81%，特异度16/36=44.44%，准确度=52/80=65.00%。见表1。

表1 细针穿刺细胞学诊断淋巴结结核结果

2.2 抗酸染色检验诊断淋巴结结核结果

以结核分歧杆菌培养作为金标准，判定淋巴结结核44例，非淋巴结结核36例。以此为依据，判断抗酸染色检验诊断淋巴结结核的价值。其敏感度=38/44=86.36%，特异度20/36=55.56%，准确度=58/80=72.50%。见表2。

表2 细针穿刺细胞学诊断淋巴结结核结果

2.3 细针穿刺细胞学联合抗酸染色检验诊断淋巴结结核结果

以结核分歧杆菌培养作为金标准，判定淋巴结结核44例，非淋巴结结核36例。以此为依据，判断上述两种方式联合诊断淋巴结结核效果。其中，敏感度=40/44=90.91%，特异度30/36=83.33%，准确度=70/80=87.50%。此联合诊断方式与细针穿刺细胞学、抗酸染色检验差异明显(X2=0.340、0.889、1.047，P<0.05)。见表3。

表3 细针穿刺细胞学联合抗酸染色检验诊断淋巴结结核结果

2.4 淋巴结细胞学分型与抗酸染色结果

细针穿刺细胞学及抗酸染色诊断后：细菌学：萋纳氏染色法，均采用热染法，依据我国结核病对细菌学检验流程进行分析，借助油镜在检查视野探寻到3条抗酸杆菌，未发现阴性。两组诊断方式下淋巴结细胞学分型与抗酸染色结果，见表4。

表4 两组诊断方式下淋巴结细胞学分型与抗酸染色结果[n(%)]

3 讨论

3.1 淋巴结与淋巴结结核关系

淋巴结能够与抗体、淋巴细胞相抗衡，同样是受抗原刺激造成的免疫应答场所。一般情况下，浅表淋巴结光滑、柔软，具有较高的质感，不会与邻近组织粘连，常见体征即为浅表淋巴结肿大，能够为诊断提供科学路径，发病原因诸多[3]。在各种外界因素的刺激下，淋巴结中的淋巴细胞迅速增加，最终发生肿大。所以，明确淋巴结肿大的病因，临床意义深远。

淋巴结穿刺结核细胞的具体表现可划分成5个时期，分别是：(1)增殖性反应阶段：主要是成熟的淋巴细胞，组织细胞较少，偶尔会发现原幼淋巴、较少组织细胞。(2)淋巴结节阶段：主要是成熟的淋巴细胞，组织细胞较少，有部分类上皮细胞。(3)结核结节阶段：郎格罕巨细胞中的结核结节较多，清晰可见坏死组织与破碎的细胞。(4)淋巴结核干酪型：最多的是坏死组织、郎格罕巨细胞，清晰可见类上皮细胞。(5)纤维素增殖阶段：经对结核的治疗，淋巴结成分会产生变化，淋巴细胞会被肉芽组织所代替。

3.2 细针穿刺细胞学检查(FNAC)

细针穿刺细胞学检查(FNAC)方式简单，安全性高，经济价值高，短时间内能够为患者供应准确的细胞学诊断，患者容易接受。临床多年开展细针穿刺细胞学检查发现：液化坏死期淋巴结核脓肿有以下特点：①淋巴结结核很多在腋下、颈部出现，幼儿多在腋下。②淋巴结结核性脓肿临床表现为红肿、痛、发热等，一般位于单侧，无痛等，部分淋巴结肿块长径达10cm。③穿刺物呈乳白色干酪样，液化坏死期间以淡黄绿色脓样呈现。④细胞学涂片上，会发现颗粒状的物质，颜色为紫红色，脓细胞较少。并其他感染者会发现存在不等的脓细胞。⑤由此可见：部分退化的类上皮细胞，主要是依据细针抽吸脓液性状来决定，明确结核判断，有助于及时诊治结核。FNAC检查会及时取得标本，脓液标本含量较高，其含菌量较大。所以，为提高诊断的准确性，细胞学医师在诊断淋巴细胞方面的疾病时，应多加注意，不断学习，提高自己的诊断水平。

3.3 抗酸染色检验

抗酸染色检验的诊断理念是：分枝杆菌细胞壁中存在大量的脂质，主要是分枝菌酸，包含肽聚糖的外部，由于此菌不易着色，着色的完成需通过延长染色时间实现。但分枝杆菌中其菌与染料相结合，酸性脱色剂会脱色，即抗酸染色。齐-尼氏抗酸染色法是在加热的基础下使分枝菌酸、石炭酸牢固结合为复合物，利用盐酸酒精处理即不脱色。接着用碱性美浪复染后，分枝杆菌依然是呈红色，其余细菌与背景中物质均呈蓝色。此方法能够提高病灶检出率，Triton X-100是一类非离子型表面活性剂，可溶解脂质，细胞膜比较通透。免疫细胞化学中Triton X-100一般浓度在0.1%-0.2%，膜通透性较强，会将部分结合膜溶解，比较适合开展核酸表面抗原的免疫组化，处理时间较长，浓度高，会对染色数据造成影响。检验时，先用玻片对标本进行涂片，滴注石碳酸复红2-3滴，在火焰高的部位缓缓加热，以免其沸腾，产生蒸汽，暂离。发现染液蒸发量少时，添加染液，以免染液不足，加热3-5min，待标本降温后，用水清洗。接着脱色，使用酒精(3%)来脱色，冲洗时间保持在30s-1min。最后复染，用碱性美兰溶液复染1min，用水清洗，吸干水分后用油镜仔细观察。

3.4 分析两种检验方式对淋巴结结核的应用

细胞块技术在文献中报道较少，但能够改善细胞学涂片的不足，细胞学涂片开展ICC时传统涂片收集的细胞少、涂片厚薄不均导致阳性物质定位不清呈假阳性，无法依据需要连续切片与永久性保留标本。细胞块技术可弥补上述不足，为淋巴结结核诊断提供有利条件。但细胞块穿刺难度高，需要组织量大，针头21-22号，存在一定有创性。

结核杆菌感染淋巴结时，细胞学变化特殊，产生的郎格汉巨细胞能够改善汉巨细胞，淋巴结中出现类上皮细胞是结核杆菌繁殖引起的变化，是科学诊断淋巴结结核的方式，然而上皮细胞会有部分发生炎症细胞学改变。所以，仅凭类上皮细胞对淋巴结核进行诊断，误诊概率较高。另外，因淋巴结结核干酪型无细胞学变化，瘤性、脓性等造成的类别不同的坏死无法区分，误诊概率极高，需联合其余辅助检查方式来诊断，如：抗酸染色、腺苷脱氨酶等测定，其中，抗酸染色对淋巴结的诊断迅速、便捷，且具有较高的经济价值，与我国国情相符，适合基层医院。涂片染色阳性仅表明其含有抗酸杆菌，无法区别具体菌体。结核菌培养法具有较高的敏感性，其效果与涂片镜检法高，能够直接取得菌落，方便判断非结核分枝杆菌，是鉴别结核病的准则，但培养用时较长，实验室不便开展常规检查。我国因非结核分枝杆菌类型少，所以检出抗酸杆菌，有助于结核病的诊断。所以，穿刺细胞学在诊断时，常规检查可开展直接涂片抗酸染色，方便抗酸杆菌的探查，取得精准度较高的数据，尤其是对淋巴结结核干酪型判断，直接采用直接涂片抗酸染色法方能够清晰鉴别是否为抗酸杆菌。

本研究中，用两种诊断方式开展不同检查，从所得结果来看，借助油镜在检查视野探寻到3条抗酸杆菌，未发现阴性。这可能是由于抗酸杆菌于淋巴结结核的不确定性较强，穿刺期间观察其是否与结核杆菌位置对应。另外，抗酸染色敏感性较高，量小的抗酸杆菌无法检测出来。除此之外，从诊断敏感度、特异度、准确度来看，明显是细针穿刺细胞学联合抗酸染色检验诊断淋巴结结核最高，其次是抗酸染色检验，最后是细针穿刺细胞学诊断。由此得出：两种方式相结合在淋巴结结核中的诊断准确度较高，取得数据更为精准，能够为治疗提供有效的凭证。

综上所述，干酪坏死型细胞学检验、直接涂片抗酸染色数据相符合，抗酸杆菌阳性率较高。其余各阶段直接涂片抗酸染色不容易符合，接近0。更是表明其诊断淋巴结结核时，具备类上皮细胞、干酪样坏死，虽然同样能够用于结核诊断，但抗酸染色于淋巴结结核各阶段阳性率有差异，怀疑是淋巴结结核时，穿刺涂片抗酸染色阴性者，需进一步开展实验室检查诊断。