LC-MS/MS测定水果制品中的5种农药残留

李丽鑫，唐一秋

（1.昆明市食品药品检验所，云南昆明 650000；2.云南商务信息工程学校，云南昆明 650000）

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

Triple Quad 3500液相色谱-串联质谱-质谱仪（AB科技有限公司）、AL104电子天平（梅特勒-托利多国际贸易有限公司）、Multi Reax振荡器（德国海道尔夫公司）、ALLEGRA X-30R大容量冷冻离心机（美国贝克曼公司）、Arium comfort超纯水器（赛多利斯公司）、FSJ-A05B1粉碎机、IKA T18均质器及KQ5200DB超声波清洗器。

100 μg·mL-1的咪鲜胺、多菌灵、啶虫脒、噻虫嗪、吡虫啉标准溶液（天津农业农村部环境保护科研监测所）；甲酸（色谱纯，阿拉丁试剂）；乙腈（色谱纯，赛默飞世尔科技有限公司）；盐包（含4 g无水硫酸镁、1 g氯化钠、1 g柠檬酸二水合物、0.5 g柠檬酸二钠盐倍半水合物，美国Agilent公司）；15 mL SPE净化管（含150 mg无水硫酸镁、25 mg PSA，美国Agilent公司）；待测样品为市售木瓜干、香蕉干和葡萄干。

1.2 样品前处理

将木瓜干、香蕉干和葡萄干分别放入粉碎机打碎，样品按1∶9（质量比）比例复水，静置30 min[1]。再用均质机把水和样品均匀混合后，准确称取10 g（精确至0.01 g）于50 mL的离心管中，加入10 mL乙腈，在振荡器下震荡5 min，加入QuEChERS提取盐包，振荡提取5 min后4 200 r·min-1离心5 min，准确移取6 mL上清液于15 mL SPE净化管中，在振荡器上振荡混匀5 min，4 200 r·min-1离心5 min，吸取1 mL上清液经0.22 μm尼龙有机滤膜过滤，待分析。

1.3 仪器工作条件1.3.1 色谱条件

色谱柱：CAPCELL PAK ADME-HR S2（2.1 mm×100 mm，2 μm）；进样量：3 μL；流速：0.300 0 mL·min-1；流动相：0.1%甲酸水和乙腈，洗脱梯度见表1。

表1 农药残留洗脱梯度

1.3.2 质谱条件

离子化模式：正离子扫描；质谱扫描方式：多反应监测；气帘气（CUR）：35 psi；离子化电压：5 500 V；离子源温度：550 ℃；GS1：50 psi；GS2：50 psi。具体参数见表2。

表2 农药残留的质谱条件

1.4 标准溶液的配制

溶剂标液的配制：用乙腈稀释得系列浓度分别为0.5 ng·mL-1、1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、40 ng·mL-1、80 ng·mL-1和160 ng·mL-18个浓度的标准混合溶液。

基质标液的配制：用基质溶液稀释得系列浓度分别为0.5 ng·mL-1、1 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、40 ng·mL-1、80 ng·mL-1和160 ng·mL-18个浓度的标准混合溶液。

空白样品按样品前处理1.2的方法提取后配制基质标液。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的优化

本次实验在国标的基础上，通过对流动相、进样量和洗脱梯度的不断尝试、优化，观察在不同的条件下5种农药残留色谱图的峰形、分离效果和保留时间，选择最佳的分析条件，尽可能缩短分析时间、提高效率的同时又能确保实验数据的可靠性和准确性[2]。经过实验，本次实验采用了0.1%的甲酸水和乙腈为流动相。

2.2 提取方法的选择

实验尝试了复水和不复水2种方法。不复水时5种农药残留加标回收率在65.49%～88.91%；复水后加标回收率在76.00%～104.14%。2种方法的加标回收率的结果相比，复水时5种农药残留的提取效果更理想，回收率更高，因此在实验过程中采用了样品与水按1∶9的比例进行复水。

2.3 基质效应

实验还对基质效应进行了分析考察，用乙腈和不含目标物的木瓜干、香蕉干和葡萄干样品提取液配制成和溶剂标液等浓度的标液，各连续进样2针[3]。结果显示，木瓜干、香蕉干和葡萄干样品用溶剂标液定量时，5种农药残留的加标回收率在69.25%～84.26%，用空白基质溶液配制标液5种农药的回收率在76.00%～104.14%。因此，为保证检测结果的准确度，在样品的检测过程中，为消除基质效应对检测结果的影响，需要使用基质配制基质标准溶液来定量[4]。

2.4 色谱条件的选择

依据2.1优化的色谱条件（1.3.1的色谱条件），噻虫嗪、吡虫啉、多菌灵、啶虫脒和咪鲜胺5种农药残留的分离效果如图1所示，多菌灵的保留时间为1.37 min，啶虫脒的保留时间为2.78 min，吡虫啉的保留时间为2.68 min，噻虫嗪的保留时间为2.07 min，咪鲜胺的保留时间为4.18 min。

图1 噻虫嗪、吡虫啉、多菌灵、啶虫脒和咪鲜胺5种农药残留标准色谱图

2.5 方法学验证

在上述实验条件下检测木瓜干、香蕉干和葡萄干样品中噻虫嗪、吡虫啉、多菌灵、啶虫脒和咪鲜胺5种农药残留，样品均未检出5种农药残留。在该实验条件下，在空白的木瓜干、香蕉干和葡萄干中分别加入1 μg·mL-1混合标准储备液50 μL、400 μL、1 000 μL，按1.2的方法进行处理，每个浓度处理6个样，经过LC-MS/MS检测，根据各个组分的测定浓度与加标浓度之间的差异来计算5种农药残留的精密度与加标回收率[5]。由表3可知，加标回收率在79.64%～100.60%，相对标准偏差在1.2%～4.9%，满足测定需求。

表3 木瓜干、香蕉干、葡萄干中5种农药的相关系数、平均回收率、精密度

2.6 检出限与定量限的测定

在1.3.1色谱条件和1.3.2质谱条件下，将浓度标样1 ng·mL-1连续测定10次，确定其基线信噪比（S/N），求其平均值，然后根据3倍的信噪比计算出检出限，根据10倍信噪比计算出定量限，可以得出噻虫嗪的检出限为0.000 55 μg·kg-1、定量限为0.001 8 μg·kg-1；吡虫啉的检出限为0.001 μg·kg-1、定 量 限 为0.003 3 μg·kg-1；多 菌 灵 的 检 出 限 为0.000 15 μg·kg-1、 定 量 限 为0.000 49 μg·kg-1；啶 虫 脒 的 检 出 限 为0.000 19 μg·kg-1、定 量 限 为0.000 65 μg· kg-1；咪鲜胺的检出限为0.000 061 μg·kg-1、定量限为0.000 202 μg·kg-1。

3 结论

实验结果表明，建立的检测木瓜干、香蕉干、葡萄干中噻虫嗪、吡虫啉、多菌灵、咪鲜胺和啶虫脒的方法，加标回收率在79.64%～100.60%，相对标准偏差在1.2%～4.9%。5种农药残留的检出限均小于国家标准GB 23200.121—2021所给出的检出限。当针对性检测水果干制品的这5种农药残留时，此方法在样品前处理过程中所用的时间简短，过程简单，容易操作，再结合灵敏度较高的检测仪器，能够在短时间内实现对目标物的提取和检测，且完全满足农药残留检测的要求，有一定的实际应用价值，可为水果制品中多种农药残留的检测提供科学依据。