QuEChERS-液相色谱-串联质谱法同时测定枸杞干果中新烟碱类农药残留

陈慧斐，阳 曦，刘 玮，孟 敏，肖晓莉，娄 靖

（绵阳市食品药品检验所，四川绵阳 621000）

枸杞是我国一种重要的药食同源的农产品。由于其具有生物活性物质和保健功能，越来越受到大众的欢迎。苟春林[1]分析了枸杞的质量安全现状，明确枸杞生产过程中农药残留问题仍较为突出。新烟碱类杀虫剂既可用于茎叶处理，也可用于土壤或种子处理[2]。因此，测定枸杞中新烟碱类农药残留具有重要的意义。高效液相色谱-质谱联用法[3-5]定性检查准确、灵敏度较高、测定时间短，其应用越来越普遍。本文采用QuEChERS结合液相色谱-串联质谱联用的检测方法，检测枸杞干果中8种新烟碱类农药残留，以满足日常定性与定量检验工作。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

高效液相色谱-串联质谱仪4000 Q TRAP为美国AB SCIEX公司产品；电子天平为瑞士梅特勒-托利多有限公司产品。乙腈、甲酸（色谱纯）购于Fisher公司；乙酸铵、无水硫酸镁均购于成都市科龙化工试剂厂；C18和N-丙基乙二胺PSA均购于北京振翔科技有限公司。标准物质包括吡虫啉、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪、噻虫胺、呋虫胺、烯啶虫胺和氯噻啉，均采购于曼哈格公司。

1.2 试验方法

1.2.1 标准溶液的配制

用乙腈将标准品配制成10～100 μg·mL-1的标准储备液单标，临用时，用乙腈将单标溶液稀释成为1 μg·mL-1的混合标准溶液。取6份空白样品，通过提取净化处理后，加入混合标准溶液，配制成浓度为2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、15 ng·mL-1、25 ng·mL-1和50 ng·mL-1的标准系列溶液。

1.2.2 样品前处理

称取粉碎均匀的试样2 g，置于50 mL离心管中，加入5 mL水，加入5 mL乙酸-乙腈（1∶99）溶液，摇匀，涡旋混匀1 min后，超声提取15 min，再加入5 g氯化钠，振荡5 min，8 000 r·min-1离心10 min，取上清液2 mL于预先装有50 mg无水硫酸镁、100 mg C18和150 mg PSA的塑料离心管，涡旋混匀后，10 000 r·min-1离 心5 min，取上 清 液1 mL，加 入1 mL水，混匀后经0.22 μm滤膜过滤后，用高效液相色谱-串联质谱仪进行测定。

1.2.3 液相色谱条件

Thermo Acclaim C18色谱柱型号为3.0×100 mm；流动相流速为0.4 mL·min-1；色谱柱柱温为35 ℃；样品进样量为5 μL；流动相A为乙腈；流动相B为0.1%甲酸水溶液；梯度洗脱程序：0～0.5 min，5%A；0.5～1 min，5%A→30%A；1～2 min，30%A；2～3 min，30%A→90%A；3～5 min，90%A；5～5.5 min，90%A→5%A；5.5～8 min，5%A。

1.2.4 质谱条件

离子源：电喷雾电离源（ESI）；检测器扫描方式：正离子（ESI+）；检测方式：多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）；气帘气压力（CUR）：25 psi；离子化电压（IS）：5 500 V；离子源温度（TEM）：550 ℃；喷雾器压力（GS1）：55 psi；辅助加热器压力（GS2）：50 psi；碰撞器（CAD）：Medium；碰撞室出口电压（CXP）：12 V；碰撞室入口电压（EP）：10 V。

2 结果与分析

2.1 质谱条件的优化

配制1 μg·mL-1混合标准溶液，质谱仪对其进行一级质谱扫描（Q1 MS），得到各化合物适配的母离子质荷比。选择扫描模式为碎片离子扫描Product lon(MS2)，得到碎片离子信息，选取其中2对离子作为离子对。优化参数：去簇电压（DP）和碰撞能量（CE），优化结果及质谱分析参数见表1。

表1 8种新烟碱类农药的质谱分析参数

2.2 流动相的优化

本试验采用电喷雾正离子扫描模式，加入0.1%甲酸于流动相中，利于目标物形成带电离子。比较不同流动相，8种农药的响应强度及分离效果相近，但选择乙腈作为流动相的峰形优于甲醇，利于目标化合物分离。MRM色谱图见图1。

图1 8种农药的MRM图

2.3 方法的线性范围及检出限

准确配制混合农药浓度为2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、15 ng·mL-1、25 ng·mL-1和50 ng·mL-1的标准系列溶液，按照1.2试验方法进行测定，外标法制作校准曲线，线性良好（r2＞0.995），结果见表2。8种新烟碱农药检出限（Limit of Detection，LOD）（以信噪比大于3计）为0.01～0.09 μg·kg-1，定量限（Limit of Quantitation，LOQ）（以信噪比大于10计）为0.02～0.30 μg·kg-1。

2.4 回收率及精密度

按3个水平的添加对空白干枸杞样品进行加标试验，以测定该方法的回收率，加标水平及相应结果见表2。结果表明，8种农药回收率在72.1%～106.8%，相对标准偏差范围为0.31%～3.97%，该测定方法具有良好稳定性、准确度和重复性。

表2 8种新烟碱类杀虫剂的检出限、定量限、回收试验结果

2.5 实际样品检测

GB 2763—2021标准中规定了枸杞（干）中吡虫啉最大残留量为1 mg·kg-1，啶虫脒最大允许残留量则为2 mg·kg-1，其他6种未作记录。随机抽取市售干枸杞共计10批次，按照上述研究方法分析，结果均未检出。

3 结论

本实验建立了枸杞中8种新烟碱类农药残留的QuEChERS-LCMS/MS检测方法，采用MRM监测模式，空白基质配制标准曲线外标法定量，通过定性和定量分析了干枸杞中上述8种新烟碱类农药。该方法快速、准确、灵敏度高、检出限低，可有效地满足对枸杞中8种新烟碱类农药含量的测定。