基于神经外科培训使用的一种脑组织标本固定方法初探

樊文科，朱克明，李文生

复旦大学基础医学院解剖与组织胚胎学系，临床解剖中心，上海 200032

随着临床医学和医学教育的发展，临床应用解剖学应运而生，并显示出强大的生命力，它主要面向临床研究生和临床医学继续教育，在扎实掌握解剖结构的基础上，运用所学解剖知识来分析和解决临床问题，提高和培养医学生的创新精神，同时也是适应当代“转化医学”研究热潮的一种具体实践[1]。在“国家医疗，健康中国”卫生战略背景下，我校解剖与组织胚胎学系以临床解剖中心为平台，以附属中山医院、华山医院为依托，常年举办各类临床解剖高级学习班。根据不同需求，对解剖标本的质量要求各有差异，传统的甲醛灌注浸泡尸体标本固定技术简单可靠，仍在实验室中广泛应用，但标本质地及形态由于蛋白质凝固，脱水而发生明显皱缩[2]。而采用冷藏技术保存的标本由于反复冷冻及复温导致标本变形明显，且标本在实验过程中发生缓慢变质[3]。基于临床神经外科培训对脑组织固定有较高的要求，我们对新鲜脑组织标本保存处理做了尝试性改进，取得较为满意的效果，现报道如下：

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 标本 选用新鲜头部无外伤尸体标本16例，标本由上海红十字会复旦大学遗体捐献接收站提供。

1.1.2 器材 点动式压力泵（河南传硕信息技术有限公司），手工钢锯，手术刀，止血钳，解剖剪，缝合线，0.5 cm 一头尖玻璃管，0.4 cm 橡胶管。

1.1.3 试剂及其溶液配比 按每个标本2%福尔马林1000 mL，30%甘油50 mL 作为固定液A 液。在混合固定液A 液基础上加入2% 硝酸钾溶液50 mL，麝香草酚10 g，30% 乙醇2500 mL 作为固定液B 液。

1.2 研究方法

1.2.1 实验前准备 用自来水将材料冲洗干净，将大体标本面朝上水平放置在解剖台上，于第5 颈椎（C5）处用U 形枕木垫高。

1.2.2 取材和灌注 在C5上缘水平切取尸体头颈部标本。横行切开皮肤，切口斜向下前方，向两侧水平延伸达脊柱，离断颈部肌群，横断椎骨，避开甲状腺下极以避免灌注时自甲状腺断端流失灌注液，注意保持切口平整，处理血管时向外牵拉，尽可能保留较长的血管。表浅软组织离断后，再用钢锯锯至头颈部与躯干完全分离[4]。自来水冲洗干净断面，将头部标本倒置，断面朝上，修洁断面，寻找颈总动脉和颈内静脉，将连接压力泵端的0.4 cm 橡胶管套进玻璃管一端，结扎。另一端插入颈总动脉，结扎。先用0.9%生理盐水缓慢冲洗动静脉，确保动静脉畅通。用空气增压法排净血管残留液体。先以制备好的2%福尔马林A 液用点动式压力泵每个标本连续点动灌注1000 mL，后用保鲜袋结扎放置-14 ℃冰箱保存。15 d 后取出，流水解冻0.5 d 后重复上述方法灌注固定液B 液。灌注结束，将标本置于剩余固定液B 液中浸泡2 d 后即可取出使用，并达到理想状态，如图1A。未用完标本继续于保存液中保存，无须反复冰冻、解冻。经过15 d 解剖操作，观察标本形态，结构，脑实质等无明显改变，使用良好，如图1B。

图1 改良标本固定方法处理后的脑标本A：内镜下斜坡区解剖 1.垂体 2.脑桥 3.展神经 4.基底动脉 5.小脑下前动脉 6.椎动脉 B：内镜下鞍底解剖1.直回2.视神经3.垂体Fig.1 Brain specimen treated by modified fixation methodA: Endoscopic anatomy of clivus region; 1, hypophysis; 2, pons; 3, abducent nerve; 4, basilar artery; 5,Anterior inferior cerebellar artery; 6, vertebral artery B: Endoscopic anatomy of sellar bottom; 1, gyrus rectus;2, optic nerve; 3,hypophysis

2 结果

通过改良标本灌注固定方法对新鲜尸头标本进行处理，标本对眼、呼吸道基本无刺激，脑实质基本无自溶，脑部动静脉无明显变硬，颜色红润，容易区分，脑各部形态接近新鲜标本，保持一定的弹性和韧性（表1）。基本满足临床神经外科学习培训使用，取得学习培训单位的良好评价。

表1 改良标本固定液和传统用福尔马林对标本固定效果的比较Tab.1 Comparison of specimen results between modified fixation liquid and formalin fixation

3 讨论

3.1 标本选择

应选用新鲜、病历资料显示无外伤及重大脑部疾病的标本。新鲜程度决定脑实质的自溶状态，而外伤及脑部重大疾病决定灌注液能否充分准确到达灌注目标部位，最终关系灌注保存和使用效果。

3.2 灌注体会

动静脉内可能有血凝块影响正常灌注，为此灌注前需要用生理盐水进行冲洗，确保动静脉畅通。为确保固定液到达颅腔各血管，而又不致血管爆裂，采用点动法灌注。

3.3 应用特点

目前常用防腐固定剂有单一型和混合型。改良固定保存液中加入2%福尔马林能够起到对标本加强防腐固定作用，与传统5%～10%固定保存液相比能够最大程度减小标本组织的收缩，同时减少刺激性有害气体对人体的伤害。在混合防腐固定剂中，甘油是一种良好的选用药物。利用它的防腐性、吸湿性和对某些无机盐类药物的特殊溶解力，所配成的溶液比较稳定[5]。硝酸钾常作为发色剂，护色剂，抗微生物防腐剂使用。麝香草酚对细菌、酵母和霉菌均有较强的抑制作用，是一种广谱抑菌剂[6]，不仅增强防腐抗霉力和对标本护色作用，而且配方中加入一定比例的酒精，麝香草酚可以减少甲醛的强烈刺激气味。

以往用于神经外科培训的标本或经过多次冷藏解冻，或单纯经甲醛灌注。实际应用过程中发现，均出现不同程度的组织脱水、自溶；传统甲醛灌注，影响到对脑实质、脑部动静脉、脑部小结构的观察、操作，很难达到接近临床的体验。此法采用冰冻固定与湿法保存相结合，使上述问题得到一定解决，具明显优势。