RSV肺炎患儿T淋巴细胞亚群检测分析

伍洪华 张艺宁 王亭

呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV），属于一种单链RNA 病毒，一般儿童感染此病毒后，会导致其患有肺炎、病毒性细支气管炎等疾病[1]。70% 以上儿童在婴儿期都感染过此病毒，且导致婴幼儿住院的主要原因之一便是RSV 感染，一旦患病，将会使患儿机体健康受到严重威胁[2]。一般来讲，患儿患病后的主要症状表现包括喘息、气促、咳嗽等。现有研究认为，RSV 感染的过程较为复杂，主要是受多种因素综合影响而产生，如环境因素、遗传体质、免疫系统反应、肺上皮细胞相关因子反应等[3]。由于该病毒能够具备避免正常机体产生免疫记忆作用的能力，所以很多患儿即便在治愈后，同样也会出现再次感染同一菌株的问题。另外，儿童哮喘同RSV 感染存在着一定的联系，获得性免疫、固有免疫均起到了重要作用，尤其是对于婴幼儿来讲，其年龄尚小，各项脏器、免疫系统发育并不完善，因此更加容易遭受RSV 感染而患病[4]。一方面，其固有免疫并不健全，机体中幼稚树突状细胞在对抗原递呈方面缺乏较强的能力，不能与TLR 配体之间产生良好的应答关系，再加上NK 细胞对病毒细胞因子分泌方面存在不足，进而会造成病毒清除效果受到影响[5]。另一方面，其获得性免疫并不成熟，机体具有较弱的细胞免疫，T 淋巴细胞中的CD4+、CD8+功能均不够完善，因此在清理病毒方面的能力依然不够理想。可见在RSV 感染中，体液免疫反应起到了很重要的保护性作用，并以T 细胞免疫反应介导为主。根据免疫环境、刺激信号等方面的差异，原始T 细胞会分化成特性不同的T 细胞亚群，不同亚群之间的平衡对后续免疫反应带来基础保障[6]。最开始主要是通过Th2 细胞诱导实现，进而导致Thl/Th2 细胞平衡降低，因而有学者便提出对RSV 感染严重程度预测的一种理论结石。随着医学研究的逐步推进，人们发现另外2 种细胞亚群对RSV 感染严重程度的影响更大，其为Treg（即：调节性T 细胞）、Th17 细胞（即：辅助性T 细胞17）。前者主要能够产生转化生长因子、白细胞介素-40，后者主要产生白细胞介素-17。在RSV 感染的发病过程中，二者之间的平衡关系十分重要。本文为深入探讨其使用价值，专门对2021年3 月—2022 年3 月收治的60 例RSV 肺炎患儿展开对比分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2021 年3 月—2022 年3 月RSV 肺炎患儿60 例。分组依照入院后24 h 内最差状态的小儿危重病例评分[7]结果，患儿被分入两组，其中分值≥80 分患儿为重度组，分值＜80 分患儿为轻度组，两各研究对象例数相同，即为30例。重度组男17 例，女13 例，年龄2～11 个月，平均（5.99±1.02）个月；轻度组男18 例，女12 例，年龄3～10个月，平均（5.85±1.11）个月。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究已经医院医学伦理委员会审核通过。

纳入标准：（1）经痰液病毒诊断或鼻咽部分泌物检验判定RSV 为（+）的患儿；（2）有完整病历资料的患儿；（3）患儿家长知晓研究内容，在告知书上签字；（4）依从性良好，能够配合医学研究开展的患儿；（5）年龄在1 岁以内的患儿。

排除标准：（1）合并先天性疾病的患儿；（2）中途放弃研究的患儿；（3）病原检测不单一，存在其他病毒核算感染的患儿；（4）存在家族哮喘史、过敏史的患儿；（5）存在免疫缺陷的患儿；（6）存在肺部发育不良或支气管发育不良的患儿。

1.2 方法

两组患儿均以相同方法展开T 淋巴细胞亚群检测工作，方法如下：在空腹状态下采集患儿外周静脉血（2～3 mL），放置在5 mL 肝素钠抗凝负压真空采血管中，按照1 500 r/min 的标准进行10 min 的离心操作，获取血清样本后，放置在恒温零下20℃冰箱内保存。使用流式细胞仪（美国Beckman coulter 公司生产，型号为Epics XL）对外周血单个核细胞浓度进行检测，主要包括以下几个步骤：（1）外周血单个核细胞的分离；（2）单个核细胞体外刺激培养；（3）按照说明书中具体内容展开对Treg、Th17 比例的监测。另外，通过酶联免疫吸附试验法对血清细胞因子含量进行测定，其内容主要包括IL-17、IL-10、IL-8、TNF-α、IL-13、IL-2、IL-4、IFN-γ、IL-5。

1.3 观察指标

对比两组外周血单个核细胞Treg、Th17 百分数及Th17/Treg。同时比较两组血清中细胞因子含量。

1.4 统计学方法

采用SPSS21.0 统计学软件进行数据处理，计量资料以（）表示，组间比较采用t检验；计数资料以n（%）表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组外周血单个核细胞Treg、Th17 百分数及Th17/Treg 比较

重度组Treg 百分数、Treg 与Th17 的比值低于轻度组，其Th17 百分数高于轻度组（P＜0.05）。

2.2 两组血清中细胞因子含量比较

重度组IL-17、IL-8、TNF-α、IL-4、IL-5 均高于轻度组；其IL-10、IL-13、IL-2、IFN-γ 均低于轻度组（P＜0.05）。见表2。

表1 两组外周血单个核细胞Treg、Th17 百分数及Treg 与Th17 的比值比较（）

表1 两组外周血单个核细胞Treg、Th17 百分数及Treg 与Th17 的比值比较（）

表2 两组血清中细胞因子含量比较（pg/mL，）

表2 两组血清中细胞因子含量比较（pg/mL，）

表2（续）

3 讨论

RSV 是导致老年人、婴幼儿发生诸如肺炎、支气管炎等下呼吸道感染产生的常见病原体，一般患病后会有咳嗽、喘息等临床表现，对患儿机体健康带来很多不利影响。特别是RSV 感染同哮喘的产生关系密切，属于气道炎症性疾病的一种[8]。相关报道显示，有50%～70% 的婴幼儿即便完成了治疗，仍然容易出现复发问题，特别是部分患儿还会在后续生活中发展为支气管哮喘。由于一些患儿年龄尚小，在对其实施辅助检查、肺通气功能检查的过程中并不能够很好完成，再加上患病初期的症状并不显著，因此常常会有误诊、漏诊问题，对患儿身心健康带来严重影响[9]。基于此，如何对患儿开展有效的临床诊断，也成为了医学研究领域重点关注的话题。

既往研究工作报道认为，导致RSV 肺炎患儿产生的经典免疫学机制为Th1/Th2 失衡，然而随着医学研究的逐步深入，人们发现在RSV 肺炎发病过程中，Th17、Treg 细胞发挥了重要作用，其为新型的辅助性T 细胞[10]。前者属于CD4+效应T 细胞，在机体中主要分泌的细胞因子包括IL-21、IL-17 等。相关报道显示，自身免疫病、在促炎性反应中，该细胞与其分泌的IL-17 均能够得到重要作用，该指标含量越高，其气道高反应程度也更加显著[11]。后者属于一种T 细胞亚群，具有独特的功能性，其主要分泌的细胞因子包括TGF-β 和（或）IL-10，可对抗原特异性免疫应答产生一定的抑制作用，进而增强机体免疫耐受程度。同时，该细胞还能够对Th 的活化和增殖产生抑制作用，从而降低IgE 水平、减少促炎症因子的合成，确保呼吸道高反应性、呼吸道炎症能够得到良好缓解[12]。在此次研究中，对比两组外周血单个核细胞Treg、Th17 百分数及Treg 与Th17 的比值，显示重度组Treg 百分数、Treg 与Th17 的比值相较于轻度组均显著更低（P＜0.05）；其Th17 百分数相较于轻度组显著更高（P＜0.05）另外对比两组血清中细胞因子含量，结果显示：重度组IL-17、IL-8、TNF-α、IL-4、IL-5 水平相较于轻度组均显著更高（P＜0.05）；同时其IL-10、IL-13、IL-2、IFN-γ 水平相较于轻度组均显著更低（P＜0.05）。由此可看出，对于重度患儿来讲，其Th17 细胞诱导分化能力更强，因此血浆中IL-17分泌量也会有效提升。同时该细胞也是在IL-17 的介导下产生效应，并与RSV 肺炎患儿发病初期的整个过程关系密切，其作用主要为正性调控。同时，该结果也能够看出，无论是重度RSV 肺炎患儿，还是轻度RSV 肺炎患儿，其机体中都会出现免疫功能平衡失调的问题，且随着病情的逐步加重，患儿免疫功能平衡失调问题也会随之不断加重[13]。Th17 细胞的功能主要为介导炎症反应；Treg 细胞的主要功能为介导免疫耐受，二者之间无论是从分化上，还是从功能上，都能够起到相互制约、相互拮抗的作用，使机体免疫平衡得到良好维持。对Th17、Treg 细胞的特点做出进一步分析，可发现：首先，对于Th17 细胞来讲，其为一种新型CD4+T 细胞，在该细胞表面上能够将CD161、白细胞介素-23R、细胞趋化因子受体6（CCR6）进行表达，并将转录因子RORγt 特异性表达[14]。该细胞的主要作用为对炎性反应产生刺激作用，进而提升病毒、真菌、胞外细菌的获得性免疫影响。该细胞能够分泌出IL-17，且该物质在RSV 感染中可以发挥出很多积极影响，一般主要会从四个方面造成严重感染问题的产生。（1）IL-17 能够提升黏液分泌量。（2）IL-17 在机体中能够促进产生Th2 型细胞因子，进而出现诸如IL-13 等系列细胞因子的释放，而不是直接对气道高反应产生影响。IL-13 同样为促炎细胞因子的一种，主要经由Th2 细胞分泌，会对气道上皮黏液的增加、人气道高反应性的调节、嗜酸粒细胞迁移等带来关键性影响。（3）IL-17 在机体中往往同肺部中性粒细胞浸润关系密切，其主要原因在于，通过基质细胞促进趋化因子而出现的[15]。（4）IL-17 可能会利用Eomes、T-bet 转录因子调节的方式降低机体中CD8+T 细胞反应，使病毒清除减少。其次，对于Treg 细胞来讲，其能够将CD8+T 细胞、CD4+T 细胞数量明显增加。有研究显示，嗜酸粒细胞在缺乏Treg 细胞的小鼠气道中出现大量聚集的情况，这将会诱发过度的RSV 特异性T 细胞反应以及全身炎症反应[16]。在此背景下，CD8+T 细胞的过量产生不但不会起到有效清除病毒的作用，反而会导致患儿病情的进一步加重，甚至还会导致其组织病变问题的不断加重。Treg 细胞在机体中，能够利用NK 细胞、中性粒细胞对过度的炎性反应产生抑制作用，进而将低效的Th2 型免疫反应作出限制，并对非特异性免疫反应加以控制。在患儿机体中，若存在Treg细胞缺乏的情况，则会自发形成Th2 型反应。该细胞不但会将过度炎性T 细胞反应有效规避，同时也能够对低效的Th2 型免疫反应产生一定的限制作用。

综上所述，通过应用T 淋巴细胞亚群检测分析的方式可对RSV 肺炎患儿不同病情程度进行评价，对后续标准制定提供了借鉴作用。