0.5%香芹酚水剂高效液相色谱分析方法研究

2022-10-15吕焕焕高胜健张燕青赵广义段丽芳

农药科学与管理 2022年9期

吕焕焕，宋朋，高胜健，张燕青，赵广义，段丽芳

(1.山东威瑞信试验检测有限公司，山东济南 250119；2.农业农村部农药检定所，北京 100125)

1 前言

香芹酚英文名称：carvacrol，CAS号：499-75-2，分子式：C10H14O，化学名称：2-甲基-5-异丙基苯酚；香荆芥酚；5-异丙基-2-甲基苯酚。香芹酚是一种纯天然的植物源化合物，天然存在于牛至、百里香、冬季香薄荷等唇形科植物的精油中，对真菌、细菌具有广谱抗菌活性。香芹酚被开发和应用到农业病害防治领域，它具有抗真菌作用，作用靶点多，对作物病害防治不易产生抗性、药害的优点，还能起到刺激农作物生长、增强免疫力、提高产量的效果，是有机绿色农药产品的代表之一。

目前国内有关香芹酚水剂的分析方法未见公开报道。本文采用高效液相色谱法对0.5%香芹酚水剂进行定量分析，该方法操作简便快捷，分离效果好，精密度和准确度均能达到定量分析的要求。

2 试验部分

2.1 试剂和溶液乙腈(色谱纯)；超纯水(电阻率18.2MΩ·cm，25℃)；磷酸(分析纯) ；磷酸溶液：ψ(磷酸：水)=1：1 000；香芹酚标样，已知质量分数99.0%；0.5%香芹酚水剂。

2.2 仪器高效液相色谱仪：日立Primaide，具有二极管阵列检测器和自动进样器；日立色谱工作站；色谱柱：250mm×4.6mm(i.d.)不锈钢柱，内装ZORBAX SB-C18、5μm填充物。

2.3 液相色谱操作条件流动相：Ψ(乙腈：磷酸溶液)=55+45(V/V)；流量：1.0mL/min；柱温：30±2℃；检测波长：275nm；进样体积：20μL；保留时间：香芹酚约9.0min。典型的香芹酚标样和0.5%香芹酚水剂的高效液相色谱图(图1、图2)。

图1 香芹酚标样高效液相色谱图

图2 0.5%香芹酚水剂高效液相色谱图

2.4 测定步骤

2.4.1 标样溶液的配制称取0.05g香芹酚标样(精确至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL乙腈，超声波振，用乙腈稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 试样溶液的配制称取含荡5min，冷却至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中香芹酚0.05g的试样(精确至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL乙腈，超声波振荡5min，冷却至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，过滤。

2.4.3 测定在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻2针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

2.4.4 计算将测得的2针试样溶液以及试样前后2针标样溶液中香芹酚峰面积分别进行平均。试样中香芹酚的质量分数ω(%)，按式(1)计算：

(1)

式中：

A1──标样溶液中香芹酚峰面积的平均值；

A2──试样溶液中香芹酚峰面积的平均值；

m1──标样的质量，g；

m2──试样的质量，g；

P──标样中香芹酚的质量分数，%。

3 结果与讨论

3.1 色谱条件的选择通过日立Primaide高效液相色谱仪的光谱数据采集功能，获得香芹酚的紫外波长扫描图(图3)。从图中可以看到香芹酚最大吸收波长在220nm处，在275nm处也有较大的吸收，为了尽量减少溶剂的干扰，将检测波长定为275nm。

图3 香芹酚的紫外光谱图

色谱柱选择250mm×4.6mm(i.d.)ZORBAX SB-C18、5um的不锈钢柱。根据香芹酚物化性质和溶剂的紫外吸收波长，选择乙腈作为溶剂溶解样品，并以乙腈和水作为流动相，为了得到更好的分离效果和峰形，在1 000mL水里加入1mL磷酸。将流动相按不同比例在色谱柱上进行试验，随着乙腈比例的增加，保留时间减小，当乙腈与水比例达到60 ：40时，有杂质峰干扰香芹酚，峰纯度达不到试验要求，最终选择Ψ(乙腈：0.1%磷酸水溶液)=55：45作为流动相，流速1.0mL/min。该条件下，香芹酚色谱峰峰形较好，与杂质能完全分离，具有良好的精密度和准确度，并且分析时间较短，提高了工作效率。

3.2 分析方法的特异性试验将2.4.1、2.4.2配制的香芹酚标样溶液和试样溶液，在上述色谱操作条件下进行全波段扫描、峰纯度分析。结果表明标样溶液和试样溶液中香芹酚峰纯度均>990，有效成分出峰处无其他物质干扰，符合定量分析要求。

3.3 分析方法的线性相关性试验称取0.05g香芹酚标样(精确至0.000 1g)，置于50mL容量瓶中，加入20mL乙腈，超声波振荡5min，冷却至室温，用乙腈稀释至刻度，摇匀。用移液管移取3、4、5、6、7mL上述溶液，分别置于50mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，配置成5个不同浓度的标样溶液。在上述色谱操作条件下进行分析，以香芹酚质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线(图4)，得到香芹酚线性回归方程为y=60 026x+40 160，线性相关系数为0.999 9。