老年患者梅毒螺旋体特异性抗体生物学假阳性的原因及临床意义

陈 娟 缪小花 吴春梅 王信国

福建医科大学附属闽东医院输血科，福建福安 355000

梅毒是一种具有高度传染性的性传播疾病[1-2]，会对机体多个脏器和系统造成损害，导致临床症状体征复杂多样，具有较大的危害性[3]。梅毒会导致艾滋病病程加快，妊娠期妇女感染梅毒会导致流产、早产等不良妊娠结局[4]，会严重危害人类的生命健康，因此需要加强对梅毒的防控工作。及时、准确的检测结果可起到辅助诊断、指导治疗等作用，对于防控梅毒意义重大[5]。近年来在临床检测工作中发现，部分老年患者无任何梅毒感染的临床症状体征、不洁性生活史、接触史，但梅毒螺旋体特异性抗体检测结果为阳性。老年患者假阳性的出现会对临床诊断造成不良影响，且可能引起患者及其家属的不满，因此需要了解老年患者出现假阳性的原因，以便消除相关影响因素并向患者及其家属解释。故本研究就老年梅毒患者抗体检测结果呈假阳性的原因进行分析总结，旨在为临床降低假阳性率提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2021年1—6月在福建医科大学附属闽东医院输血科就诊的7306例老年患者的临床资料。其中男4026例，女3280例；年龄60～98岁，平均（78.56±3.81）岁。本研究临床资料及血液收集得到医院医学伦理委员会认可。

1.2 方法

先应用化学发光微粒子免疫分析法（chemiluminescence microparticle immunoassay，CMIA）和梅毒甲苯胺红不加热血清试验（tolulized red unheated serum test，TRUST）进行初筛，二者均阳性且CMIA的S/CO值≥10者，TPPA阳性率也是100%[6-9]，剩余的CMIA初筛单独阳性者再经梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验复筛。

CMIA、TRUST检测：①CMIA：对所有患者的清晨空腹状态下的外周静脉血4 ml进行离心处理，离心速率为3500 r/min，时间为5 min。获得上层血清后，应用雅培i2000SR化学发光微粒子免疫分析仪以及雅培原装配套试剂、校准物和质控物对血清梅毒螺旋体特异性抗体进行测定。严格按照说明书进行操作。梅毒螺旋体抗体S/CO值（S代表标本sample的OD值，CO即cut off，S/CO值表示检测的OD值和临界值cut off的比值）≥1则判为阳性。②TRUST：将50 μl血清放置在卡片圆圈中，在圈内均匀分布。加TRUST抗原轻轻摇匀后，应用9号针头将入一滴TRUST抗原。卡片在水平旋转仪上以（100±2）r/min的速度旋转8 min，后立即在亮光下进行观察。凝集反应强度分级为，3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮；2+：圆圈内出现小到中的红色絮状物，液体较清亮；1+：圆圈内出现小的黑色絮状物，液体浑浊；-：圆圈内仅见甲苯胺红颗粒集中于中央一点或均匀分散。其中出现1+～4+强度的凝集反应则判定为阳性。

梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验：针对初筛阳性者，先将患者的血清应用样品稀释液进行不同倍数（5、10、20、40）的稀释，在 20、40 倍孔中分别加入未致敏及致敏明胶颗粒，均为25 μl。反应板放置在湿盒中2 h，对反应结果进行观察。阳性标准：致敏离子出现不规则、杂乱的聚集。

1.3 观察指标及评价标准

观察各组患者的梅毒螺旋体特异性抗体检测结果。计算CMIA的检测效能。敏感度=真阳性/（真阳性+假阴性）×100%；特异度=真阴性/（假阳性+真阴性）×100%；准确性=（真阳性+真阴性）/（真阳性+假阴性+假阳性+真阴性）×100%；误诊率（假阳性率）=假阳性/（假阳性+真阴性）×100%；漏诊率=假阴性/（真阳性+假阴性）×100%。

1.4 统计学处理

运用SPSS 25.0统计学软件，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验，计量资料以均数±标准差（）表示，P＜ 0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 检测结果

7306例老年患者中，684例（9.36%）经CMIA单独检测，结果显示血清梅毒螺旋体特异性抗体呈阳性，其中265例（3.63%）患者经CMIA、TRUST检测结果显示血清梅毒螺旋体特异性抗体为阳性且CMIA 的S/CO值≥10。其余的419例患者经梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验复筛阳性例数为373例，阴性例数为46例，其阳性率为89.02%，假阳性率为10.98%（46/419）。

2.2 不同年龄段老年患者的检测结果

60～69岁患者的CMIA单独检测阳性率、单独检测阳性进行梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验复筛比例均比70～79岁、≥80岁患者高，差异有统计学意义（P＜ 0.05）；不同年龄段的CMIA+TRUST检测阳性率比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05）；≥80岁患者的复筛阳性率较60～69岁、70～79岁患者更低，而假阳性率较其他两个年龄段更高，但不同年龄段之间的数据比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05）。见表1。

表1 不同年龄段老年患者的检测结果

2.3 CMIA的检测效能

对CMIA检测呈阳性的684例患者应用梅毒螺旋体明胶颗凝集粒试验效能检测，对血清梅毒螺旋体特异性抗体的检测敏感度为100.00%（638/638），特异度为99.31%（6622/6668），准确性为99.37%（7260/7306），误诊率为 0.69%（46/6668），漏诊率为0（0/683）。见表2。

表2 CMIA的检测效能

3 讨论

近年来由于人们缺乏对梅毒等性传播疾病相关知识的了解以及防护程度不足，梅毒感染已不仅仅是在高危人群中发生，逐渐转向普通人群，大量隐性感染者的增加导致梅毒防控工作面临着较大的挑战[10-11]。临床发现在老年患者的标本检测过程中会出现梅毒螺旋体特异性抗体假阳性情况[12]，增加了医生对患者及其家属的解释工作。掌握出现假阳性的原因，可为患者及其家属给出合理解释，同时有助于今后减少假阳性检测结果的出现[13]。

本研究数据显示，有265例患者应用CMIA+TRUST检测梅毒螺旋体特异性抗体阳性，即二者均阳性且CMIA的S/CO值≥10，TPPA阳性率也是100%。60～69岁患者CMIA单独检测阳性率最高，与该年龄段免疫力、抵抗力开始下降，首次患病率增高有关[6-9]，可能有不少梅毒感染者在不自觉的情况下临床治愈，但是由于梅毒血清抵抗的缘故，其血清抗体终身阳性；或可能是隐性感染，因其他疾病住院检查而被发现[14-15]；也可能因为部分老年男性丧偶，加之其文化水平较低以及经济状况的局限，导致其进行非法性交易且未进行安全性保护措施，造成梅毒感染的概率增高。经梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验复筛后，老年患者的血清梅毒螺旋体特异性抗体假阳性率为10.98%，低于殷丽丽等[5]的研究报道。随着年龄的增长，老年患者的假阳性率呈升高趋势[13]，提示年龄与梅毒抗体假阳性率存在密切关系。同时还可以发现，CMIA对梅毒螺旋体特异性抗体具有较高的敏感度，但受到某些因素的影响，特异度、准确性有所下降，出现假阳性情况。结合检测结果和临床经验进行分析，梅毒抗体假阳性的原因主要有以下几点：①年龄因素。随着年龄的不断增长，老年人的机体功能也在逐渐减退，易出现免疫功能异常情况，产生一些异常蛋白质，会对检测结果造成干扰[16-17]，故检测结果呈假阳性；②技术性因素。标本不合格或保存不当、离心不当造成标本血清中存在纤维蛋白原等絮状物、试剂污染或过期、检测仪器偏差、工作人员操作不规范等多种因素均可导致检测结果假阳性，但能够通过重复试验排除技术性假阳性结果[18-19]；③其他原因。部分患者体内可能存在肠道螺旋体等其他螺旋体共生现象[20]，会导致交叉反应抗体产生，对检测结果造成干扰。针对上述影响因素，相关工作人员应严格按照有关规章制度进行操作，确保标本、试剂质量合格，定期对检测仪器进行检查，在检验期间加强质控，针对初筛阳性者需要进行复筛，以减少假阳性结果，并结合患者的临床症状、病史等情况综合诊断。本研究结果显示，CMIA的敏感度为100.00%，特异度为99.31%，准确性为99.37%，误诊率为0.69%，漏诊率为0，提示CMIA的敏感度和准确度较高且全自动化，适合大规模筛查，但确证建议采用WHO及国内公认的梅毒抗体血清试验的“金标准”—梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验，据报道，梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验在窗口期检测时会呈假阴性，因此若患者经济和基础条件允许的话，也可选用聚合酶链式反应（PCR）检测方法或镀银染色法进行确证[21]。因本研究样本量较大，未能进一步分析患者病理、抗生素滥用等因素与老年患者梅毒螺旋体特异性抗体假阳性率的相关性，且未能与青壮年的检测结果进行比较，需在今后加强此方面的研究。

综上所述，老年患者的梅毒螺旋体特异性抗体假阳性率会随着年龄增高而升高，且技术性因素等也可能引起假阳性，因此临床在做好针对性预防措施的同时应谨慎做好对梅毒的诊断和解释工作。