子宫颈癌患者组织中CK10、Ki-67表达及临床意义*

陆天炎 黄莹莹 张佳娜

根治性手术是目前国内外公认的治疗早期子宫颈癌最有效的手段，但部分患者病情进展迅速，可能难以获得理想的预后转归效果[1-2]。迄今为止，关于子宫颈癌的诊断往往依靠组织活检、阴道镜检查以及HPV 检测等，然而上述相关诊断方式存在一定的局限性。随着相关研究的日益深入，不少学者发现分子标志物可能在子宫颈癌早期诊断中具有极其重要的作用，但可用以判断子宫颈癌进展情况以及预后评估的分子标志物较少[3]。细胞角蛋白（CK）是细胞骨架中间丝蛋白之一，往往存在于上皮组织细胞质内，且有相关研究报道证实，CK10 在恶性肿瘤组织中存在异常表达，可能和子宫颈癌的发生、发展以及预后转归密切相关[4]。Ki-67 属于DNA 结合蛋白之一，广泛存在于增殖细胞内，介导了驱动细胞周期的调控过程，被广泛用作鉴别正常生长细胞和肿瘤细胞的增殖状况，可能和子宫颈癌发展有关[5]。鉴于此，本文通过研究子宫颈癌患者组织中CK10、Ki-67 表达及临床意义，旨在为临床治疗提供数据支持，现做以下报道。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性分析2017 年10 月-2020 年10 月于九江市妇幼保健院完成子宫颈癌切除术的60 例子宫颈癌患者临床资料。入组标准：（1）所有受试者均经手术病理检查确诊为子宫颈癌；（2）均为成年女性；（3）临床病历资料完整。排除标准：（1）入组前接受过放化疗等抗肿瘤治疗；（2）合并严重内科和/或外科疾病；（3）正处于妊娠期或哺乳期；（4）神志异常或伴有精神疾病；（5）研究期间因故退出或失访。患者年龄44～78 岁，平均（60.11±10.35）岁；体重指数（BMI）19～32 kg/m2，平均（23.16±2.35）kg/m2；受教育年限6～16 年，平均（10.35±1.36）年；病灶直径2.3～7.7 cm，平均（4.56±1.20）cm；临床国际妇产科联盟（FIGO）分期：Ⅰ期56 例，Ⅱ期2 例，Ⅲ期2 例；淋巴结转移6 例，无淋巴结转移54 例。该研究经过医院伦理委员会审批。

1.2 方法 分别采集所有患者的子宫颈癌组织以及癌旁正常组织，采用甲醛固定，并予以石蜡包埋。借助Leica RM 2235 全自动轮转式切片机完成连续切片，切片厚度以4 μm 为宜。取平切片完成DAB染色处理，之后遵循试剂盒说明书实施固定、血清封闭、洗涤以及DAB 染色处理。随后采用免疫组织化学法检测CK10、Ki-67 表达情况，取磷酸盐缓冲液替代一抗为阴性对照。其中CK10 及Ki-67 鼠单克隆抗体试剂盒、DAB 染色液均选用上海杰浩生物技术有限公司产品。

1.3 观察指标及判定标准 比较不同子宫颈组织CK10、Ki-67 表达情况，分析上述两项蛋白表达情况和子宫颈癌患者临床分期、淋巴结转移的关系。结果判定，CK10、Ki-67 相关染色结果均由医院病理科2 名经验丰富的医师以双盲法完成评估：随机选择5 个高倍镜视野，每个视野细胞数为200 个，观察阳性细胞占比情况。阳性细胞占比评分：其中阳性细胞占比≤5%为0 分，6%～25%为1 分，26%～50%为2 分，51%～75%为3 分，＞75%为4 分。细胞染色评分如下：无染色即0 分，淡黄色即1 分，棕黄色即2 分，棕褐色即3 分。以上述两种评分乘积作为最终结果，0～3 分记为阴性，4～12 分记为阳性[6]。

1.4 统计学处理 以SPSS 22.0 软件实现对本研究数据的分析，计量数据通过（）表示，分析前予以正态性与方差齐性检验，呈正态分布，即开展t 检验。计数资料的表示以率（%）实现，进行χ2检验。以受试者工作特征（ROC）曲线分析明确CK10、Ki-67 评估子宫颈癌患者临床分期以及淋巴结转移的效能。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同子宫颈组织CK10、Ki-67 表达对比 子宫颈癌组织CK10 阳性率为18.33%，低于癌旁正常组织的80.00%，而Ki-67 阳性率为88.33%，高于癌旁正常组织的11.67%，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同子宫颈组织CK10、Ki-67表达对比[例（%）]

2.2 CK10、Ki-67 表达情况和子宫颈癌患者临床分期、淋巴结转移的关系 临床FIGO 分期Ⅱ、Ⅲ期患者CK10 阳性率均为0，均低于临床FIGO 分期Ⅰ期患者，有淋巴结转移患者CK10 阳性率为0，低于无淋巴结转移患者的20.37%，但差异均无统计学意义（P＞0.05）；临床FIGO 分期Ⅱ、Ⅲ期患者Ki-67 阳性率均为100%，均高于临床FIGO 分期Ⅰ期患者，有淋巴结转移患者Ki-67 阳性率为100%，高于无淋巴结转移患者，但差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2、3。

表2 CK10表达情况和子宫颈癌患者临床分期、淋巴结转移的关系[例（%）]

2.3 CK10、Ki-67 表达评估子宫颈癌患者临床分期Ⅱ、Ⅲ期效能的ROC 曲线分析 经ROC 曲线分析可得，CK10 与Ki-67 联合检测评估子宫颈癌患者临床分期的曲线下面积、敏感度及特异度均高于上述两项指标单独检测，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表4、图1。

图1 CK10、Ki-67表达评估子宫颈癌患者临床分期效能的ROC曲线

表3 Ki-67表达情况和子宫颈癌患者临床分期、淋巴结转移的关系[例（%）]

表4 CK10、Ki-67表达评估子宫颈癌患者临床分期Ⅱ、Ⅲ期效能的ROC曲线分析

2.4 CK10、Ki-67 表达评估子宫颈癌患者淋巴结转移效能的ROC 曲线分析 经ROC 曲线分析可得，CK10 与Ki-67 联合检测评估子宫颈癌患者淋巴结转移的曲线下面积、敏感度以及特异度均高于上述两项指标单独检测，差异均有统计学意义（P＜0.05），见图2、表5。

图2 CK10、Ki-67表达评估子宫颈癌患者淋巴结转移效能的ROC曲线

表5 CK10、Ki-67表达评估子宫颈癌患者淋巴结转移效能的ROC曲线分析

3 讨论

伴随子宫颈细胞学筛查的应用，子宫颈癌早期检出率以及远期生存率均有所提高，然而可用以评估早期子宫颈癌病变恶化的分子标志物并不多见[7-9]。因此，寻求一种可早期评估子宫颈癌进展的分子标志物显得尤为重要。CK 可通过细胞间的相关信号转导通路影响肿瘤发生、进展，且CK 于差异性器官以及组织中的表达存在明显差异，其表达情况可能和肿瘤细胞侵袭力有关，继而为疾病的鉴别诊断提供参考依据[10]。Ki-67 则是DNA 结合蛋白之一，属于增殖细胞有关核抗原[11]，目前已被证实在乳腺癌、食道癌及卵巢癌等多种恶性肿瘤细胞中均存在异常表达，且和肿瘤恶性程度有关。

本文结果发现，子宫颈癌组织CK10 阳性率低于癌旁正常组织，而Ki-67 阳性率高于癌旁正常组织。这提示了子宫颈癌患者组织中CK10 呈异常低表达，而Ki-67 呈异常高表达。原因在于正常子宫颈组织中，CK10 主要覆盖于基底细胞上层，于基底层之上的颗粒细胞层与棘层间隙表达，伴随着宫颈病变的加剧，其阳性表达逐渐下降，因此，该蛋白表达的缺失可能标志着表皮细胞朝恶性方向转化。另有研究报道证实，随着宫颈鳞癌组织分化程度的增加，其CK10 阳性率越高，CK10 的表达水平与细胞角化、组织分化有关[12-14]。此外，Ki-67广泛表达于细胞核，主要位于宫颈上皮内瘤变基底层以及副基底层，在维持细胞增殖活性过程中扮演者至关重要的角色，其往往在细胞G1 期、S 期及M 期时高表达，而在GO 期时表达缺失。这在文献[15-17]的研究报道中得以佐证，子宫颈癌组织中Ki-67 阳性率远远高于癌旁正常组织。然而，上述研究并未对CK10 和子宫颈癌的关系进行分析，这亦是本文的创新之处，可为临床相关研究提供更为全面的依据。另外，不同FIGO 分期以及淋巴结转移与否的子宫颈癌组织CK10、Ki-67 表达阳性率对比均不明显，反映了上述两项蛋白表达在评估子宫颈癌病情严重高程度及淋巴结转移方面可能无显著价值。究其原因，可能和本研究纳入对象严重不足有关，从而导致研究结果发生偏颇[18-20]。因此，在今后的相关研究中理应增大样本量，从而获取更为真实、可靠的数据。本文结果还显示了经ROC曲线分析可得：CK10 与Ki-67 联合检测评估子宫颈癌患者FIGO 分期以及淋巴结转移的效能优于上述两项指标单独检测。分析原因，联合检测时可为临床医生评估病情提供更为充足、全面的依据[21-22]。

综上所述，子宫颈癌患者组织中CK10 表达缺失，而Ki-67 表达升高，两者联合检测可能有助于病情评估以及淋巴结转移预测。