温郁金对胃癌细胞的抑制作用及其对IGF-Ⅰ,IGF-Ⅱ表达的影响

胡贝尔

(湖南中医药大学第二附属医院肿瘤血液科，湖南 长沙 410000)

温郁金作为抗肿瘤复方中较常见的一种药物,其抗肿瘤作用已有相关报道,但是关于其对胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)的影响相关报道较少[1]。对此,该项目就温郁金对胃癌细胞的抑制作用进行探讨分析,且观察其对IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ表达的影响,以期指导临床疾病治疗。现将相关情况总结报道如下。

1 材料及方法

1.1 材料

项目研究所需材料包括:(1)胃腺癌细胞(SGC-7901)株;(2)RPMI-1640培养基;(3)噻唑蓝(MTT);(4)胰蛋白酶;(5)氟尿嘧啶;(6)IGF-Ⅰ放免试剂盒及IGF-Ⅱ放免试剂盒;(7)二甲基亚砜;(8)温郁金;(9)超临界萃取装置;(10)二氧化碳细胞培养箱;(11)酶标仪;(12)放射免疫r计数器等。

1.2 方法

(1)细胞培养。将SGC-7901细胞放置于含100ml/L灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液中,按照常规方法进行培养,在将其放在培养箱中开始培养,其中,培养箱的条件设置:37℃;50ml/L的二氧化碳;饱和湿度。

(2)温郁金提取物制备。对温郁金的有效成分进行提取处理,萃取的温度调节40℃,压力调节3×107Pa,时间调节120min/循环,二氧化碳流量调节50kg/h。分离1反应条件设置:压力1.25×107Pa,温度50℃;分离2条件:压力5.5×106Pa,温度40℃。得到温郁金提取物1和2之后,基于4℃条件下,避光冷藏保存。先取适量的DMSO溶解,再用RPMI-1640培养液稀释。

(3)MTT还原法。MTT还原法就是细胞增生抑制试验,对数生长期细胞选用含有100ml/L胎牛血清的1640培养液进行调整,促使细胞悬液浓度达到1.0×107/L,且接种细胞于96孔培养板,200μl/孔,放置于培养箱其环境条件如下:37℃、50ml/L二氧化碳、饱和湿度。24h之后,更换成不含胎牛血清的1640培养液,继续24h的培养,促使细胞同步化。换含浓度25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L的温郁金提取物1、2的完全培养液,加入浓度25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L的5-Fu完全培养液设为阳性对照组,每一药物浓度设置6个复孔,分别继续培养48h,每孔加入 20μl 5g/L MTT溶液,37℃条件下孵育4h,再添加150μl DMSO,放置于微量振荡器进行10min振荡处理,立即通过酶标仪,对490nm波长吸光度值(A)进行检测分析。

(4)IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ测定。对数生长期细胞选用含100ml/L胎牛血清的1640培养液进行调整,促使细胞悬液浓度5.0×107/L,接种细胞于24孔培养板中,每一孔1000μl,37℃、50ml/L二氧化碳、饱和湿度条件下进行培养,24h后,更换为不含胎牛血清的1640培养液,继续培养24h,促使细胞同步化。换含浓度25mg/L、50mg/L、100mg/L的温郁金提取物1、2的完全培养基,阴性对照组细胞选择1000μl完全培养基,继续培养48h,收集各组培养液,参照IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ放免试剂盒操作说明书,规范测定IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ浓度,通过自动r计数器直接给出相关参数。

1.3 观察指标

观察比较细胞抑制率及IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ浓度。其中,控制率的计算公式如下:抑制率(%)=[(阴性对照组A-空白组A)-(实验组A-空白组A)]/(阴性对照组A-空白组A)×100%。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 抑制率

数据分析显示,随着剂量增加,温郁金提取物1、2对胃癌细胞的抑制率呈增加趋势,具有统计学意义(P<0.05),其中,200mg/L温郁金提取物1、2与5-Fu对胃癌细胞的抑制作用差异不大(P>0.05)。如表1所示。

表1 不同药物对胃癌细胞生长的抑制作用

2.2 IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ浓度

数据分析发现,提取物1、2的IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ含量低于对照组,差异存在统计学意义(P<0.05)。如表2所示。

表2 观察温郁金对IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ的影响

3 讨论

温郁金属于姜科植物,有些呈卵形、长卵形,有些呈纺锤形。《本草纲目》记载温郁金具有杀菌、镇痛、利胆等功效。温郁金的根茎经过加工处理,不仅可抗肿瘤、抗病毒、抗菌、抗血栓,而且在保肝以及增强免疫力等方面有着显著作用[2]。近二十年来,超临界二氧化碳萃取技术得到显著进步,成为提取中药有效成分的新手段,优势明显。该项目中,采用超临界二氧化碳萃取技术,得到提取物1(主要含姜黄素)与提取物2(主要是挥发油成分),经MTT分析发现,且浓度增加,抑制率呈增加趋势。细胞增生、分化及凋亡、突变等过程中,IGF发挥着重要作用。近些年,学者们就IGF在肿瘤细胞生长及发展中的作用进行了大量研究,证实IGF与多种肿瘤的发生及发展均有关。1990年,Thompson 等人最先报道人胃癌细胞系LIM-1839中可见IGF-Ⅱ。1992年,Chung and Antoniades对3个人的胃癌标本进行原位杂交法分析,结果发现IGF-Ⅰ mRNA表达[3]。该项目观察发现,温郁金提取物1、2对胃癌细胞培养液中的IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ有明显影响,促使IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ含量下降,由此可推测温郁金可通过对胃癌细胞IGF分泌的影响,发挥抗肿瘤作用。

综上所述,温郁金具有抑制胃癌细胞生长的作用,而且这种抑制作用可能与IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ表达存在关联。