傣药肾叶山蚂蝗对雄性大鼠性行为及性激素的影响

杨丽萍 ， 冯德强 ， 王艳妮 ， 段小花

(云南中医药大学 云南省傣医药与彝医药重点实验室 ， 云南 昆明 650500)

肾叶山蚂蝗[Desmodiumrenifolium(L.) Schindl.]是云南省西双版纳州傣族人民常用的植物药之一，其主要功能为清热解毒、止咳化痰、通气止痛、利水退黄，主治热季感冒头痛、咽喉肿痛、咳嗽喘息、体弱多病、性冷淡等[1-2]。云南傣族民间医生长期运用肾叶山蚂蝗泡酒治疗肾虚证，并取得了很好的疗效，但对于其在治疗肾虚方面相关的药效药理研究尚未见报道。中医理论认为肾为“先天之本”“生命之源”，中医学对男子性功能障碍主要责之于肾、心、肝三脏，且主要在于肾脏，采用补肾壮阳的药物治疗性功能障碍，是中医常用之法。现代药理研究证实，具有补肾壮阳功效的中药可通过性激素、中枢神经系统等方面发挥其改善性功能的效应[3]。因此，本试验通过研究肾叶山蚂蝗对雄性大鼠性行为和性激素的影响，初步探讨其补肾壮阳的药效及作用机制，为其进一步的应用开发以及民间流传的科学与否提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF级SD大鼠，体重(200±20)g，购自成都达硕实验动物有限公司，合格证号：SCXK(川)2013-24，饲养在明暗交替，室温18～22 ℃，相对湿度40%～65%的环境中，自由饮水采食。

1.2 试验仪器 旋转蒸发仪，瑞士BUCHI公司产品；台式高速冷冻离心机、全波长扫描式多功能酶标仪，均为美国THERMO FISHER公司产品。

1.3 药材和试剂 龟鹿补肾片，购自广东新宝制药有限公司；肾叶山蚂蝗由云南省高校民族医药现代研究重点实验室提供；睾酮酶联免疫试剂盒和雌二醇酶联免疫试剂盒，均购自伊莱瑞特生物科技有限公司。

1.4 药材提取 肾叶山蚂蝗分别采用水提和醇提的方法得到相应的提取物。醇提：加8倍量95%乙醇进行连续回流提取，重复3次，每次 45 min，合并提取液后趁热抽滤，滤液置旋转蒸发仪上浓缩挥干乙醇，即得乙醇提取液，保存备用。水提：加7倍量的冷水浸泡药材1～2 h，煮沸45 min，过滤；药渣加5倍量水继续煎煮35 min，过滤，再重复煎煮1次后合并3次滤液浓缩，保存备用。

1.5 雌性大鼠的准备 为消除雌性大鼠在进行交配试验时动情期不同带来的影响，进行双侧卵巢切除，并注射雌激素，具体方法为：雌性大鼠在10%水合氯醛[0.3 mL/(100 g·bw)]麻醉后，背部朝上固定于鼠板上，在大鼠最末肋骨下，腋中线和距脊柱外侧约2 cm交叉处剪除长毛，切开皮肤和背肌，有乳白色发亮的脂肪团，其中包埋着卵巢。用小镊子轻夹脂肪团，拉出切口外，分离脂肪，即见粉红色卵巢，取一丝线将卵巢下输卵管及脂肪一并结扎，剪下卵巢，将子宫角送回腹腔，然后摘取对侧卵巢，术后3 d肌注青霉素抗感染，常规饲养1个月后进行交配试验，试验前48 h皮下注射苯甲酸雌二醇0.2 mg/只，4 h前皮下注射黄体酮0.4 mg/只。

1.6 给药和分组 性成熟的雄性大鼠随机分为空白组、龟鹿补肾片组[0.93 g生药/(kg·bw)]、肾叶山蚂蟥水提高剂量组[13 g生药/(kg·bw)]、肾叶山蚂蟥水提低剂量组[4.05 g生药/(kg·bw)]、肾叶山蚂蟥醇提组[13 g生药/(kg·bw)]，共5个组。每组大鼠每天早晚各灌胃1次，连续28 d，灌胃容积均为1 mL/(100 g·bw)，每日饲料与水正常供给，每周按时称量大鼠体重，保证其发育正常。

1.7 交配试验 试验于晚上7～11时进行，将雄性大鼠单独放入笼中5 min，使其适应环境，然后每笼加入1只雌鼠，观察记录捕捉潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的时间)、20 min内雄鼠捕捉雌鼠的次数、交配潜伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次与雌鼠交配的时间)、20 min内交配次数。

1.8 性激素检测 待测定行为学指标结束后，雄性大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主动脉取血，3 000 r/min，离心15 min后取上清液，-20 ℃分装保存，按相应试剂盒说明书测定血清睾酮、雌二醇含量。

1.9 统计学处理 试验数据以平均值±标准差表示，采用SPSS软件进行统计学分析。对样本进行正态性检验和方差齐性检验，满足条件者，多组间差异比较采用单因素方差分析，P<0.05表示差异有显著性意义，P<0.01表示差异有非常显著性意义。

2 结果

2.1 肾叶山蚂蝗对大鼠性行为的影响 由表1可知，与空白组比较，阳性对照药龟鹿补肾片能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期(P<0.05)，增加捕捉次数(P<0.05)，缩短交配潜伏期(P<0.05)，明显增加20 min内交配次数(P<0.01)；肾叶山蚂蝗水提高剂量组和醇提组均能缩短雄性大鼠捕捉潜伏期(P<0.05)，增加捕捉次数(P<0.05)，能明显缩短交配潜伏期(P<0.05)，增加20 min内交配次数(P<0.05)，水提低剂量组则与空白组大致相似，无显著效果(P>0.05)。

表1 肾叶山蚂蝗对大鼠性行为的影响Table 1 Effect of Desmodium renifolium (L.) Schindl. on sexual behavior in rats

2.2 肾叶山蚂蝗对大鼠血清睾酮和雌二醇含量的影响 从表2可知，与空白组比较，阳性对照药龟鹿补肾片可以明显升高大鼠血清睾酮水平(P<0.01)，降低血清雌二醇的含量(P<0.05)。肾叶山蚂蝗醇提组与水提高剂量组和阳性对照药有类似的效果，且醇提组对睾酮和雌二醇的影响差异具有非常显著性意义(P<0.01)，而水提低剂量组对二者无显著影响(P>0.05)。

表2 傣药肾叶山蚂蝗对雄性大鼠血清睾酮和雌二醇含量的影响Table 2 Effect of Desmodium renifolium (L.) Schindl. on the serum estradiol and testosterone levels in rats

3 讨论

肾叶山蚂蝗[Desmodiumrenifolium(L.) Schindl.]是豆科山蚂蝗属的矮灌木，主产于云南、海南和台湾等地。云南西双版纳的少数民族长期用肾叶山蚂蝗泡酒服用，显示出了良好的补肾壮阳，改善性功能的功效[4]。研究报道，肾叶山蚂蝗中主要活性成分是以异戊基查尔酮为主的黄酮类化合物，显示出丰富的药理活性[5]，但目前对于性功能方面相关的药理研究报道甚少，基于良好的民间用药基础，有必要对肾叶山蚂蝗补肾壮阳的药理作用进行深入研究。本试验以雄性大鼠为研究对象，从性行为和性激素两方面对肾叶山蚂蝗的补肾壮阳功效进行初步研究，可以为民族药广泛运用于临床提供部分试验依据，也是研发补肾壮阳药的有效途径之一。

性功能是衡量雄性动物生殖强弱的主要指标[6]。雄性性活动受多种因素的影响，如神经机制、体液因素、情绪、年龄、疾病等[7]。雄性大鼠性行为的发生依赖于雌性大鼠的性诱感，交配试验是观察大鼠性能力的主要评价方法，试验选择了捕捉潜伏期、捕捉次数、交配潜伏期和交配次数作为观察指标，可以反应雄性的性反应速度和性活动能力情况[8]。结果表明，连续灌胃28 d后，肾叶山蚂蝗能显著缩短雄性大鼠捕捉潜伏期和交配潜伏期，增加捕捉次数和交配次数。雄性的性行为高度依赖于激素，其中包括最主要的睾酮，缺乏睾酮既会干扰雄性性行为的欲望阶段，也会干扰行为阶段[9]。雌二醇是雌激素的成分之一，主要由芳香化酶催化雄激素产生。研究证实，通过芳香化酶抑制剂的干预降低雌二醇水平，可以治疗男性勃起障碍，而外源性的雌二醇升高会导致性功能障碍[10]。试验采用龟鹿补肾片作为阳性对照药，临床和试验研究表明该药具有补肾壮阳、增强性功能的作用[11-12]。本试验结果显示，肾叶山蚂蝗可明显增加正常雄性大鼠睾酮的水平，并明显降低雌二醇的水平，和龟鹿补肾片具有类似的作用。

本试验结果表明，肾叶山蚂蝗对雄性大鼠具有提高性功能、改善性欲的药理作用，且醇提物是其主要有效部位，这也解释了当地少数民族泡酒服用的原因。试验结果为肾叶山蚂蝗在补肾壮阳方面的药效学评价提供了理论依据，更深入的作用机制还需今后进一步研究。