基于迈瑞CAL8000流水线复检规则的建立与验证的单中心研究

刘瑞菡 刘丽 梁英 刘思 王锋 明亮 刘自刚 孝感市中心医院检验科 （湖北 孝感 432000）

内容提要：目的：提高血细胞分析项目检测的效能，建立适用于孝感市中心医院基于迈瑞CAL8000流水线的血细胞分析复检规则。方法：依据国际41条复检标准结合CAL8000流水线上血细胞分析仪的性能及实验室样本分布特点制定初步的复检规则，并根据实验室工作需求制定复检预期目标（假阴性率<5%、复检率<20%），选取2021年5月18日～2021年5月28日门诊及住院血细胞分析静脉血标本1100例，以双盲法分别进行仪器分析和血涂片镜检，应用血涂片镜检的阳性判断标准，以镜检结果为金标准，对比仪器分析和血涂片镜检结果，评估复检规则对标本判断的真阳性率、真阴性率、假阳性率、假阴性率以及血涂片复检率。随后重新选取2021年5月30日～5月31日300例标本按上述过程进行复检规则确定后的验证。结果：建立复检规则的1100例样本的真阳性率12.0%，假阳性率7.7%，真阴性率77.4%，假阴性率2.9%，复检率19.7%。验证复检规则的300例样本的真阳性率10.3%，假阳性率9.0%，真阴性率77.3%，假阴性率3.3%，复检率19.3%。结论：复检规则建立及验证过程的假阴性率（2.9%<5%、3.3%<5%）及复检率（19.7%<20%、19.3%<20%）均达到实验室预期目标，复检规则设置适宜，能满足现阶段实验室对血细胞分析复检的要求。

随着血细胞分析检测技术的发展，全自动血细胞分析仪能快速对血液样本进行计数和分类，检测结果的准确性和精密度也不断提高[1]。但是血液分析仪只能作为细胞形态学的筛查手段，尚不能代替人工显微镜对各类血细胞（特别是骨髓细胞、异常细胞等）的识别和分类检查功能，为保证血液分析仪检测结果的真实可靠性，还需用显微镜验证[2,3]。如仅依靠仪器的结果直接报告，可能造成漏诊，甚至导致严重后果[3]。2005年，国际血液学复检专家组依据当时的客观条件，提出了41条自动血细胞计数和白细胞分类计数的复检标准，因复检标本大，人力紧张及标本检测时限要求，实际工作压力大。为适应临床需求，检验科亟需提高检测效能，做到不漏检异常结果，同时更快地审核报告。这就要求各实验室需根据自身仪器的性能及患者人群特征来制定适合的复检规则。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2021年5月18日～2021年5月28日孝感市中心医院门诊及住院患者血液标本1100例，其中初诊980例（占比80%），复诊220例（占比20%）。标本涵盖新生儿科、儿科、血液科、肿瘤科、妇产科等各临床科室；标本均为EDTA-K2抗凝静脉血，且从采集到上机检测均在2h内。

仪器与试剂：迈瑞CAL8000流水线：包含一台主机、2台BC-6800血细胞分析仪、1台SC-120自动推染片机。使用仪器原装配套各种试剂耗材、质控品及校准品。2台奥林巴斯CX43RF型号显微镜。

1.2 方法

1.2.1 确定暂定复检规则、预期目标及镜检阳性标准

由科室从事形态学审核的5名高年资技术人员共同讨论确定。依据国际41条复检标准，结合CAL8000流水线的性能、实验室样本分布特点及此前复检工作中的经验等，制定了初步的复检规则（复检规则具体内容见表1），将复检规则录入到DMU软件中，经过1d的测试，观察其运行正常。

表1.血细胞分析复检规则

预期目标确定为假阴性率<5%，复检率<20%。主要依据为国际血液学复检协作组提出的为保证患者检测结果安全性的最大可接受的假阴性率5%，以及实验室实际工作中的标本来源、标本数量、人员能力、人员数量及临床诊断需求等具体情况制定。

镜检阳性标准依据我国血细胞分析复检血涂片镜检阳性判断标准16条[4,5]：（1）细胞形态学改变：①红细胞明显大小不等，染色异常红细胞>30%；②巨大血小板>15%；③见到血小板聚集；④存在Dohle小体的细胞>10%；⑤中毒颗粒中性粒细胞>10%；⑥空泡变性粒细胞>10%。（2）细胞数量/比例改变：①原始细胞≥1%；②早幼/中幼粒细胞≥1%；③晚幼粒细胞>2%；④杆状核粒细胞>5%；⑤异常淋巴细胞>5%；⑥嗜酸粒细胞>5%；⑦嗜碱粒细胞>1%；⑧NRBC>1%；⑨浆细胞>1%。其中，④、⑥、⑦和⑧是国内血液学复检专家组建议添加的阳性标准。

1.2.2 以双盲法分别进行仪器检测和血涂片镜检

选定的每例标本分别进行仪器检测同时制作2张血涂片，分别由两位通过形态学比对的检验师对血涂片进行镜检[5]。当两者的结果不一致或偏差较大时，由第3位检验师复核，取结果相近的两者均值。两人各计数200个白细胞（White Blood Cell，WBC），共计400个WBC，取均值为人工WBC分类值，同时要关注白细胞、红细胞及血小板形态，如存在中毒颗粒、红细胞明显大小不等、巨大血小板、血小板聚集等均需要记录。镜检内容包括：①WBC分类计数及形态观察；②WBC和血小板（Platelet，PLT）数量评估；③红细胞（Red Blood Cell，RBC）和PLT的大小、染色及形态；④有无巨大PLT及PLT聚集；⑤其他异常：有核红细胞（Nucleated Red Blood Cells，NRBC）、RBC冷凝集及寄生虫等[6]。

1.2.3 按照统计结果确定最终复检规则

对仪器检测触发的阳性规则与血涂片镜检结果进行统计学分析，若统计结果中假阴性率或复检率超预期目标，则根据统计结果调整复检规则至其假阴性率及复检率达预定目标。

1.2.4 复检规则的验证

再次选取新的300例样本，运用已确定的复检规则，重复上述仪器检测和血涂片镜检，并对结果进行统计分析，计算其假阴性率及复检率等。

2.结果

2.1 首批1100例样本检测结果

在选定的1100例样本中，结果判断以血涂片镜检结果为金标准，真阳性（TP）：触发了任意规则，同时涂片镜检结果阳性（132例）。假阳性（FP）：触发了任意复检规则，涂片结果为阴性（85例）。真阴性（TN）：未触发复检规则，镜检结果为阴性（851例）。假阴性（FN）：未触发复检规则，但涂片结果为阳性（32例）。仪器检测1100例标本，触发复检规则的有217例，复检率为19.7%（217/1100）。具体数据见表2。

表2.首批1100例样本检测结果(n)

假阴性标本主要为：红细胞形态异常（18例）、中性粒细胞胞浆中毒颗粒及空泡变性（6例）、杆状核比率增高的核左移（4例）、血小板聚集（4例）。

假阳性标本主要为：未成熟颗粒（39例）、原始细胞/异常淋巴细胞/（13例）、异型淋巴细胞（12例）、原始细胞（11例）、有核红细胞（6例）、碎片（4例）。

2.2 第二批300例样本检测结果

在验证复检规则的300例样本中，触发复检规则的有60例，复检率为19.3。数据见表3。

表3.第二批300例样本检测结果(n)

假阴性标本主要为：红细胞形态异常（6例）、中毒颗粒（2例）、核左移（1例）、血小板聚集（1例）。

假阳性标本主要为：未成熟颗粒（16例）、异型淋巴细胞（6例）、原始细胞/异常淋巴细胞/（3例）、有核红细胞（2例）。

2.3 结果综合描述

建立复检规则的假阴性率（2.9%<5%）、复检率（19.7<20%）及设置的复检规则运行后的假阴性率（3.3%<5%）及复检率（19.3<20%）均达到实验室预期目标，此次复检规则设置适宜，能满足现阶段实验室对血细胞分析复检的要求。

3.讨论

在此次基于CAL8000流水线复检规则的建立与验证过程中，本实验室仅第一次设置的规则就通过了验证，达到了预期目标。这是由于规则制定及审核的人员对仪器性能十分了解且前期一直按照旧版规则执行复检，积累了丰富的经验。否则可能需要设置多个版本来验证，才能选取出最适合的[6]。

假阴性率是复检规则设置中最重要的指标[4]。在本次实验中，对疾病诊断有重要意义的原始细胞未发生漏检；假阴性主要为红细胞的形态、粒细胞中毒颗粒、核左移、血小板聚集等。同临床相关科室探讨后，红细胞形态改变对贫血以及溶血性疾病诊断影响不大；中毒颗粒及核左移在感染、炎症相关诊断只是参考指标，影响不大；但血小板出现假性减少对临床影响很大，不可忽视。在临床工作中有多种原因导致血小板出现聚集，检验人员要重视核实标本和显微镜复核。

此次复检规则的建立结合了迈瑞CAL8000流水线上各仪器的性能，复检率和漏检率都比较低，具有临床可操作性和有效性。在今后的工作中，本实验室还将继续在此基础上，探索适用于血细胞分析流水线自动审核功能的复检规则。