生活饮用水水质微生物检验结果分析

文安敏

（贵州省遵义市播州区疾病预防控制中心，贵州遵义 563100）

现阶段，饮用水最迫切的安全问题是微生物污染问题，这也是世界范围的难题。消除安全问题最有效的方法为生活饮用水微生物检查。符合国家规定的饮用水都是经由相关处理，水中微生物达到一定标准，且人们能够安全饮用的水[1]。世界卫生组织调查发现，水污染导致世界上约12亿人发生了肠道传染性疾病，其中大约有400万人因为水污染疾病死亡，所以生活饮用水质量把控工作十分重要[2]。近几年，我国加强了生活饮用水质量监测工作，以确保生活饮用水中所含有的微生物含量符合国家标准；但是在输送等过程中也可能出现二次污染的问题，导致水中微生物含量超标，因此微生物检验是检验生活饮用水质量的重要方式，能够保证饮用水质量安全[3-4]。 滤膜法是一种行之有效的微生物检测方式，该方法操作极为便利，在检测前会对水质当中的杂质进行判别，但是检测结果的准确性较差[5]。为此，本次研究主要采用滤膜法与多管发酵法两种微生物检测技术对生活饮用水中微生物进行检测，并观察结果。

1 材料与方法

1.1 材料

研究抽取180份生活饮用水（枯水期90份，丰水期90份），时间段为2020年4月到2021年4月，样本检测遵循《生活饮用水标准检验方法水样收集和保存》[6]中记载的流程实施采集及保存，两组基线资料差异无统计学意义（P＞0.05）。将枯水期与丰水期的饮用水标本分别进行滤膜法实验（即对照组）与多管发酵法（即观察组）。

1.2 试剂与仪器

生物显微镜，型号XSP-12CA，上海光学仪器一厂；生物安全柜，型号BSC-1500IIB2-X，济南鑫贝西生物技术有限公司；高压蒸汽灭菌消毒器，型号BKQ-B50II，济南泰医生物技术有限公司；电热鼓风干燥箱，型号DHG-9240A，武汉若瑞德科技有限公司；电热恒温培养箱，型号DHP-9012，上海灯晟仪器制造有限公司；紫外光灯，型号BOT-IIA，北京士博瑞科技有限公司。

乳糖蛋白胨培养液（PB95789-250 g）、伊红美兰琼脂培养基（PA95908-250 g）、EC-MUG培养基（PC 95790-250 g）、革兰氏染色液（PB231292-100 mL×4）， 均为广东翁江化学试剂有限公司生产。

1.3 实验方法

1.3.1 滤膜法实验

在烧杯中放入滤膜，加入蒸馏水，将其煮至沸腾，循环沸腾3次之后，将其实施15 min的常规杀菌措施，再对烧杯实施清洁，保证无残留物后再次煮沸。将滤膜粗糙面向上，使用无菌镊子取出，再放在无菌滤床上。取出水样100 mL。开启阀门实施抽滤，过滤完成后实施5 s抽气，再关闭滤器阀门，使用灭菌镊子除去滤膜，放入品红硫酸钠培养基上，确保有细菌残留面朝上，在使用电热恒温培养箱进行 培养。

1.3.2 多管发酵法

把10 mL水样接种到10 mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1 mL水样接种到10 mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1 mL水样加入到9 mL灭菌生理盐水中稀释10倍，即0.1 mL水样与10 mL单料乳糖蛋白胨培养液混合，每一稀释度接种5管。从自来水厂出来的水，应当时常检测，或每天检测1次，可以与5份容积为10 mL水样品双料培养基相混合，每份与10 mL水样品相混。若检测水源发现严重污染，则要扩大稀释度，可以与1 mL、0.1 mL、0.01 mL，甚至0.1 mL、0.01 mL、0.001 mL相混，每稀释度对接5管，每种水样品共对接15管。与低于1 mL水样品对接时，稀释时，必须遵守逐步增加的原则，可进行10倍递增的稀释，再与1 mL对接，每上升 1次，更换1次1 mL灭菌刻度吸管。完成接种之后，将接种管置恒温培养箱，36 ℃培养24 h。在培养后，观察试管中是否有产酸产气，如所有乳糖蛋白胨培养管都不产酸产气，则报告大肠菌群阴性，若是阳性则将产酸产气管转种红美兰琼脂平板中，再使用培养箱36 ℃培养18～24 h，在完成培养后，密切观察菌落形态，如果发现紫黑色且有金属光泽、淡紫色且无金属光泽的菌落，则必须染色后镜检，在染色工作完成之后，镜检结果凸显革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液进行证实试验，置恒温培养箱36 ℃培养24 h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。再进行耐热大肠菌群及大肠埃希氏菌检测。

1.3.3 统计学方法

使用SPSS19.0统计软件处理数据。计数资料用（%）表示，采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 枯水期检出率比较

枯水期一般为每年12月至次年4月全年流水量最少的时期，此时间段的降雨量较为稀少、地表水流枯竭，主要依靠地下水补给水源。相对而言，水中菌群的活跃度降低、水中微生物不易繁殖。如表1所示，采用滤膜法与多管发酵法在检测枯水期饮用水样本时发现，两种方法对大肠菌群、杂菌的检出数量之间的差异较小（P＞0.05），与滤膜法（对照组）相比，多管发酵法（观察组）在大肠埃希菌、耐热大肠菌群的检出率偏高（P＜0.05）。

表1 枯水期检出率比较

2.2 丰水期检出率比较

丰水期一般为5月—9月，此时间段气温持续升高且多为雨水充沛或高山溶雪补给的时期，因此水中菌群异常活跃、导致微生物的大量繁殖，若未能彻底消毒，在饮用后可引起感染。如表2所示，在丰水期分别采用滤膜法与多管发酵法检测后，两种方法在大肠菌群、杂菌的检出数量之间无显著性差异 （P＞0.05），与滤膜法（对照组）相比，多管发酵法（观察组）在大肠埃希菌、耐热大肠菌群的检出数量较高（P＜0.05）。

表2 丰水期检出率比较

3 结论与讨论

水是一切生命活动的起源，是人类及动植物生命过程中不可缺少的一项重要资源，也是生物体重要的组成部分。社会的可持续发展离不开工业、农业及城市建设，就目前的情况来看，工业生产时排放未处理的废水、农业生产过程中大量使用农药和肥料，及城市垃圾、废气与污水等是造成水污染的主要原因，水质污染的情况也越发严重。水污染直接影响到饮用水源的水质，同时饮用水源中的微生物总含量超标也对人们的健康造成严重影响，水污染已成为威胁人类生命安全的重要问题。因此，有关部门还需加强对水源的保护，切实提高对饮用水质的检测技术，已保障生活饮用水的水质质量。

微生物检测是评价水源、生活饮用水水质情况的一项重要指标，加强对水质的监测、提高检测合格率，是保障居民用水安全，预防水源性疾病的重要手 段[7-8]。在日常饮水的微生物检测方法中，多管发酵法是研究水样大肠菌类的一种使用率较高的方法，能够有效检测水中的总大肠菌群。总大肠菌群的主要种类是革兰氏阴性菌，它是无芽孢杆菌，在36 ℃培养24 h的条件下，此类菌种会产生发酵乳糖并产酸产气，而其自身具有需氧、厌氧的属性，可利用培养基以及其他试剂实施培养及检测[9]。本实验中采用滤膜法及多管发酵法均能检出水源中大肠菌群和杂菌，且两种方法检出的数量之间存在显著差异性，但对于大肠埃希菌和耐热大肠菌群而言，多管发酵法检出的数量更高（P＜0.05）。

综上所述，在对饮用水质量进行控制的过程中采用合理的措施，可以促进饮用水的质量得到提升，保证人们的身体健康，使人们可以饮用质量合格的生活饮用水。