血清GDNF、IL-2在儿童注意缺陷多动障碍中的表达及临床意义

黎鹏，王菊红

1.宝鸡市中医医院儿科，陕西宝鸡 721000；

2.宝鸡市妇幼保健院儿童免疫内分泌科，陕西宝鸡 721000

注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder，ADHD)是一种常见的儿童疾病，影响6%～10%的学龄儿童，其症状主要表现为持续的注意力不集中，伴或不伴多动症，容易出现冲动行为[1-2]。其中多动症是儿科心理学家和精神科医生治疗时最常见的疾病，该病将影响儿童的智力发育，将会是造成儿童成长过程中学业失败、情绪困难、青春期和成年期同伴关系不佳的重要风险因素[3-4]，甚至可能对社会产生一定程度的危害。因此寻找早期判断ADHD的生物指标，对儿童的健康成长具有重要意义。胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)属于神经营养因子家族中的一员[5]，与转化生长因子(transforming growth factor，TGF)-β密切相关。GDNF作为一种多效性因子在肠道神经系统的形成、突触可塑性、神经嵴细胞的迁移、肾脏的形成和胎儿生殖细胞的维持等多个发育过程中都是必不可少的[6]。白细胞介素-2(interleukin-2，IL-2)是一种炎症细胞因子，由抗原激活的T细胞分泌[7]。IL-2最初被鉴定为是一种T细胞生长因子，现在大量研究结果证明其具有广泛的作用，有研究表明IL-2可以通过多种途径参与神经细胞功能的调控，与多种疾病的发生、发展有关[8]。目前有关GDNF、IL-2在ADHD患儿血清中的表达及相关临床研究较少。因此，本研究通过检测ADHD患儿血清中GDNF、IL-2表达变化，分析两者在ADHD中的作用及关系，初步探讨其可能的潜在价值和临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019年7月至2020年5月在宝鸡市中医医院和宝鸡市妇幼保健院就诊的85例ADHD儿童纳入ADHD组，其中男性51例，女性34例；年龄5～12岁，平均(7.65±0.74)岁。将确诊儿童分为注意力缺陷(PIT)为主型组(n=28)、多动-冲动(HIT)为主型组(n=21)、混合型(CT)组(n=36)。纳入标准：(1)儿童ADHD诊断标准按照美国《精神障碍诊断与统计手册(第5版)》[9]；(2)就诊前未使用治疗ADHD的药物；(3)初次确诊为ADHD患儿。排除标准：(1)有家族遗传史者；(2)有过敏性疾病、内分泌代谢性等疾病者；(3)有先天性精神障碍、智力障碍者；(4)临床资料不完整者。选取同期体检的健康儿童60例为对照组，其中男性35例，女性25例；年龄5～11岁，平均(7.55±0.81)岁。本研究经两家医学伦理委员会批准，所有样品采集均取得受试者家长知情同意，符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》。

1.2 方法

1.2.1 标本采集及检测ADHD组儿童于入院次日清晨采集空腹静脉血5 mL，对照组儿童于体检当日采集空腹静脉血5 mL，将其放入离心机，采用3 000 r/min离心处理10 min后取上层血清置于-80℃保存备用。

1.2.2 血清GDNF、IL-2水平检测分别使用人GDNF ELISA试剂盒(货号：ab100525，Abcam公司)试剂盒、人IL-2 ELISA试剂盒(货号：ab281169，Abcam公司)试剂盒，采用ELISA法检测各组受检者血清中GDNF、IL-2表达水平，具体操作步骤按照ELISA试剂盒说明书进行。

1.3 统计学方法应用SPSS22.0软件进行数据统计学分析。计数资料比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间两两比较采用t检验，多组比较采用单因素方差分析；采用Pearson相关系数法分析GDNF与IL-2表达的相关性；利用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)评价血清GDNF、IL-2水平对ADHD的诊断价值；通过Logistic回归分析法分析ADHD的影响因素。均以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组受检者的一般资料比较两组受检者的性别、年龄、身高、体质量、BMI、分娩方式比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，但两组受检者在家庭教育方式是否粗暴、是否为单亲、儿童是否孤独方面比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组受检者的一般资料比较[例(%)，±s]

表1 两组受检者的一般资料比较[例(%)，±s]

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2.2 两组受检者的血清GDNF和IL-2水平比较ADHD组儿童血清中GDNF、IL-2表达水平明显高于对照组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 两组受检者的血清GDNF、IL-2水平比较(±s)

表2 两组受检者的血清GDNF、IL-2水平比较(±s)

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2.3 不同ADHD分型患者血清GDNF和IL-2水平比较HIT组患者血清GDNF水平高于CT组，CT组高于PIT组，差异均有统计学意义(P＜0.05)；CT组IL-2水平高于HIT组，HIT组高于PIT组，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表3。

表3 不同ADHD分型患者血清GDNF和IL-2表达水平比较(±s)

注：与CT组比较，aP＜0.05；与PIT组比较，bP＜0.05。

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2.4 ADHD儿童血清中GDNF和IL-2表达 的相关性Pearson相关系数法分析结果显示，ADHD儿童血清中GDNF、IL-2表达呈明显正相关(r=0.363，P＜0.05)，见图1。

2.5 血清中GDNF、IL-2水平对ADHD的诊断价值血清GDNF、IL-2水平预测ADHD的曲线下面积(area under the ROC curve，AUC)分别为0.639(95%CI：0.555～0.717)、0.922(95%CI：0.865～0.960)，对应的敏感性分别为54.12%、80.00%，特异性分别为66.70%、98.33%，血清GDNF、IL-2水平联合预测ADHD的AUC为0.927(95%CI：0.872～0.964)，敏感性为84.71%，特异性为95.00%，见图2。

2.6 影响ADHD发生的因素以是否发生ADHD为因变量，以血清GDNF、IL-2水平、年龄、身高、体质量、BMI、分娩方式、家庭教育方式粗暴、父母关系、儿童孤单为自变量，经Logistic回归分析结果显示，血清GDNF、IL-2水平、家庭教育方式粗暴、父母关系、儿童孤单均是发生ADHD的危险因素(P＜0.05)，见表4。

表4 影响ADHD发生的多因素Logistic回归分析

3 讨论

ADHD是一种非常普遍的神经发育障碍，其特征是注意力不集中、多动和冲动。患有多动症的儿童经常表现出认知、情感和运动控制方面的困难[10]。ADHD的病因复杂，研究表明遗传以及外界环境等均是影响疾病的因素[11-12]。ADHD最常用的治疗方法是采用精神药物和进行行为管理。虽然二者都可以非常有效地减少ADHD的症状，但它们也有一定的局限性，例如对治疗无反应和负面副作用等[13]。因此寻找早期判断ADHD儿童的指标，对儿童的生命健康具有重要意义。

GDNF是一种糖基化二硫键连接的同源二聚体蛋白，是TGF-β的成员[14]。各种研究已经阐明GDNF的异常表达与多种人类疾病有关。GDNF配体家族及其不同的受体系统目前被认为是神经系统中主要的神经营养网络之一，对各种神经元和胶质细胞的发育、维持和功能具有重要作用[15]。本研究中ADHD儿童血清中GDNF表达水平均显著高于对照组，且HIT组患者血清GDNF水平高于CT组，CT组高于PIT组，提示GDNF可能在ADHD的发展过程中起重要作用，对ADHD的临床分型有重要价值；ROC结果显示，血清GDNF水平预测ADHD的曲线下面积为0.639(95%CI：0.555～0.717)，对应的敏感度为54.12%，特异度为66.70%，表明GDNF可在一定程度上对ADHD进行诊断。

IL-2是一种多效性炎症细胞因子，由位于人4号染色体4q27位点的基因编码，分子量约为45.5 kDa[16]，在免疫炎症反应过程中有重要调节作用，有研究发现IL-2可以调节中枢神经系统内神经递质多巴胺代谢[17-18]。本研究中，ADHD儿童血清IL-2水平显著高于对照组，且CT组IL-2水平高于HIT组，HIT组高于PIT组，表明IL-2可能参与ADHD的发生发展进程，且对判定ADHD临床分型有重要临床意义；研究进一步发现，血清中GDNF与IL-2表达水平呈明显正相关，提示GDNF与IL-2相互影响，进而协同影响ADHD发病进程，但其具体影响机制有待进一步研究。ROC结果显示，IL-2水平预测ADHD的曲线下面积为0.922(95%CI：0.865～0.960)，对应的敏感度为80.00%，特异度为98.33%，与GDNF二者联合预测ADHD儿童的AUC为0.927(95%CI：0.872～0.964)，敏感度为84.71%，特异度为95.00%，特异度为89.25%，提示二者联合诊断高于单独诊断，可以更好地筛查ADHD儿童。Logistic回归分析结果显示，血清GDNF、IL-2水平、家庭教育方式粗暴、父母关系、儿童孤单均是发生ADHD的危险因素，提示GDNF、IL-2共同参与ADHD的发生发展，且二者水平升高会增加ADHD的发生风险，对GDNF、IL-2水平进行早期监控可能有助于诊治ADHD。

综上所述，GDNF和IL-2在ADHD儿童血清中均呈现高表达，二者呈显著正相关，提示二者可能参与ADHD的发生、发展，可作为ADHD的早期诊断及病情评估的生物学指标，具有重要的临床意义。