两种小反刍兽疫病毒检测试剂盒的比较分析

李媛

（广西壮族自治区北海市动物疫病预防控制中心 536000）

小反刍兽疫属于牛羊常见疾病，是由小反刍兽疫病毒侵入反刍动物体内后，引发腹泻、肺炎、口炎、发热等临床症状的一种传染性极强烈性疾病[1]，常呈现出地区性流行态势。该病好发动物为山羊、绵阳，此外牛、骆驼及猪也可发病[2]。该病发病率、致死率较高，近年来，小反刍兽疫在我国诸多地区均有发生，导致发生感染的地区遭遇不同程度的经济损失，目前已成为全球共同关注的常见传染病[3]。在出入境管理和日常动物疫病防疫中，对小反刍兽疫加强检测都是重中之重。酶联免疫吸附法（ELISA）是检测这一动物疫病的常用且有效的方法[4]，目前我国在该疫病检验中，所用的多为法国进口检测试剂盒，其价格较高，单次购买包装量大，这与我中心检测工作的实际需求并不相符。近年来，青岛立见诊断技术发展中心自主研发了小反刍兽疫病毒C-ELISA 抗体检测试剂盒，为探讨其应用价值，本研究选取北海市动物疫病预防控制中心采集的586 份血清标本，与法国所制试剂盒同时检测，以探讨自制试剂盒的应用价值，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 检验样品

选取广西市级动物疾病预防控制中心2018 年1 月至2019年10 月采集的田间牛羊血清样本586 份，这些样本均知悉来源，其中牛血清271 份，羊血清315 份，采集地区：上林县、隆安县、宾阳县、鹿寨县、马山县、融安县、柳城县、灵川县、阳朔县、全州县。

1.2 检测试剂盒

本研究所用小反刍兽疫病毒C-ELISA 抗体检测试剂盒为2种，其一为青岛立见诊断技术发展中心自主研发，简称：YN PPRV C-ELISA 试剂盒，其二为国际通用的PPRV C-ELISA 试剂盒（产自法国ID-VET 实验室），简称ID VET 试剂盒。

1.3 方法

1.3.1 血清样本检测

根据两种试剂盒的说明书，对选取的血清样本展开检测工作，注意严格根据说明书操作。所有血清样本均用这两种方法同时检测，检测中设立阴性对照组和阳性对照组，并根据说明书中标准，将586 份血清样本的检测结果，划分为++（强阳性）、+（弱阳性）、-（阴性）。

1.3.2 重复试验

在两种试剂盒检测后，从中随机抽取20 份标本，于相同条件下再次展开检测，作为重复试验，并将本次检测结果和初次检测结果进行对比。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 血清样本检测结果分析

由表1 可知，YN PPRV C-ELISA 试剂盒、ID VET 试剂盒对586 份血清样本的检测结果差异不显著（＞0.05）。

2.2 重复性试验结果分析

由表2、3 可知，在586 份样本中分别随机抽取20 份样本，经检测YN PPRV C-ELISA 试剂盒、ID VET 试剂盒重复试验结果和初次检测结果一致。

3 讨论

小反刍兽疫属于高度接触性传染病，是我国出入境动物必检的动物疫病检测项目。统计显示，初次爆发流行小反刍兽疫的动物群中死亡率可达50%～80%[5]，可见小反刍兽疫的破坏性。我国首次出现小反刍兽疫是在2007 年，首发于西藏地区，而2008 年和2010 年，西藏局部地区均有小反刍兽疫流行，在2013 年新疆部分地区出现小反刍兽疫，此后，其在全国快速扩散，至2014 年全国多数省份均出现小反刍兽疫。近些年来，我国一直表现出小反刍兽疫点发或散发的特点[6]。

现阶段，控制、净化小反刍兽疫是我国动物防疫工作的一个重点。国内现阶段对小反刍兽疫病毒检验的方法相对单一，诊断试剂类型较少，可选用的诊断试剂盒较少[7,8]，而国外虽然有许多已成熟检测试剂盒，但其价格较高，购买用时较长，有时难以满足动物防疫工作需求。因此，近年来，许多地区都在尝试自主研发小反刍兽疫病毒C-ELISA 检测试剂盒。

表1 血清样本检测结果分析[单位：n（%）]

表2 YN PPRV C-ELISA 试剂盒重复检测结果[单位：n（%）]

表3 ID VET 试剂盒重复检测结果[单位：n（%）]

北海市在动物疫病防控工作中对小反刍兽疫病毒C-ELISA检测试剂盒的需求较大，近年来应用较多的试剂盒为YN PPRV C-ELISA、ID VET 两种试剂盒。试剂盒的检测原理为试剂盒制作过程中，亲和层析纯化原核表达N 蛋白是包被抗原，是将活性单抗1A7 阻断，实施HRP 标记，为酶标二抗，对各反应条件进行优化，形成该病毒抗体阻断的ELISA 检测法[9]。为验证这两种试剂盒的准确性及实用价值，本研究将YN PPRV CELISA 试剂盒与ID VET 试剂盒的检测结果进行对比。经分析发现，YN PPRV C-ELISA 试剂盒、ID VET 试剂盒对586 份血清样本的检测结果差异不显著（＞0.05）。从这一结果可以看出，在对小反刍兽疫病毒检测时，YN PPRV C-ELISA 试剂盒的检查结果和ID VET 试剂盒十分接近，表明自主研发的检测试剂盒效能良好。与ID VET 试剂盒相比，YN PPRV C-ELISA试剂盒的价格大幅下降，且可小量采购，能满足动物疫病日常防控的需求，应用价值显著。

为进一步验证YN PPRV C-ELISA 试剂盒的准确性，本研究还对其可重复性展开分析。重复性试验发现，YN PPRV CELISA 试剂盒、ID VET 试剂盒重复检测与初次检测的结果均保持一致，重复性良好。由此可见，YN PPRV C-ELISA 试剂盒的检测结果稳定，可靠性强。另外，这一检测试剂盒操作更简便，对实验条件的要求相对较低，无需在严格无菌条件下操作，且具有较高的自动化程度，因此，在动物疫病防控中可将这一试剂盒用作大规模血清样品检测。

总而言之，YN PPRV C-ELISA 试剂盒、ID VET 试剂盒对小反刍兽疫病毒的检测结果十分接近，YN PPRV C-ELISA 试剂盒费用较为低廉，值得在动物检疫工作中推广。