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集落刺激因子1、肺癌食管癌缺失基因1、磷酸酯酶与张力蛋白同源物在骨肉瘤中的表达及对患者预后的预测价值

2022-09-15丁涛张强

癌症进展 2022年15期
关键词:阳性细胞软骨阳性

丁涛,张强

延安市人民医院骨科,陕西 延安 716000

骨肉瘤是临床常见的非血液系统原发性骨肿瘤,任何年龄段均可发病,但多见于青少年[1]。骨肉瘤好发于四肢长骨的干骺端,如股骨远端、胫骨近端等部位,易在早期出现肺转移,进展快,预后差。疼痛、关节活动障碍和肌肉萎缩为骨肉瘤常见的临床表现,且随着肿瘤的转移还可影响患者呼吸系统等多个重要系统的功能。随着新辅助化疗技术的发展,保肢手术联合新辅助化疗在骨肉瘤的治疗中取得了较为理想的效果,但由于骨肉瘤发病机制的多因性和复杂性,如何对骨肉瘤进行早期诊断、鉴别诊断、寻找临床预后的分子标志物成为临床面临的难点[2]。研究指出,集落刺激因子 1(colony-stimulating factor 1,CSF1)、肺癌食管癌缺失基因1(deleted in lung and esophageal cancer 1,DLEC1)、磷酸酯酶与张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)与部分肿瘤的发生发展有关[3-4],但目前关于CSF1、DLEC1、PTEN对骨肉瘤细胞增殖及患者预后影响的研究较少。因此,本研究探讨CSF1、DLEC1、PTEN在骨肉瘤患者中的表达及对患者预后的影响,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年2月至2019年2月延安市人民医院收治的骨肉瘤患者。纳入标准:①经病理学检查确诊为骨肉瘤;②经影像学检查明确无远处转移;③既往未进行任何治疗;④临床资料完整。排除标准:①合并其他恶性肿瘤;②存在肝肾功能严重障碍;③妊娠期女性;④存在严重感染性疾病、血液系统疾病;⑤合并精神疾病,依从性差;⑥随访资料不完整。根据纳入和排除标准,本研究共纳入62例骨肉瘤患者,其中男37例,女25例;年龄12~63岁,平均(24.38±5.19)岁;分化程度:低分化26例,中分化20例,高分化16例;Enneking分期:ⅡA期24例,ⅡB期38例。另选取同期延安市人民医院收治的软骨瘤患者。纳入标准:①经病理检查确诊为软骨瘤;②临床资料完整。排除标准:①合并恶性肿瘤;②存在肝肾功能严重障碍;③存在严重感染性疾病、血液系统疾病。依据纳入和排除标准,本研究共纳入43例软骨瘤患者,其中男28例,女15例;年龄15~71岁,平均(26.29±4.53)岁。两组患者性别、年龄比较,差异均无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准通过,所有患者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化法检测CSF1、DLEC1、PTEN蛋白的表达情况

取62例骨肉瘤患者的骨肉瘤组织和43例软骨瘤患者的软骨瘤组织,10%甲醛固定,组织切片后脱蜡、水化。采用免疫组化链霉抗生物素蛋白-过氧 化 物 酶(streptavidin-peroxidase,SP)法 检 测CSF1、DLEC1、PTEN蛋白的表达情况,兔抗人CSF1多克隆抗体购自武汉博士德生物技术公司,兔抗人DLEC1多克隆抗体购自Proteintech公司,兔抗人PTEN多克隆抗体购自福建迈新生物工程有限公司,试剂盒、二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色剂均由河北博海生物工程开发有限公司提供。用已知阳性组织切片作为阳性对照,以磷酸盐缓冲液(phosphate buffered solution,PBS)代替一抗作为阴性对照。实验过程严格按照说明进行,检测完成后由2名高年资医师采用双盲法阅片。依据阳性细胞所占比例及染色强度进行结果判定[5-6]:无阳性细胞计0分,阳性细胞所占比例<10%计1分,阳性细胞所占比例10%~50%计2分,阳性细胞所占比例>50%计3分;无着色计0分,淡黄色染色计1分,棕黄色染色计2分,棕褐色染色计3分。将阳性细胞所占比例评分和染色强度评分相乘,≤3分判定为阴性,≥4分判定为阳性。

1.3 随访

采用电话或定期门诊复查的方式对骨肉瘤患者进行为期2年的随访,记录骨肉瘤患者的生存情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件对所有数据进行统计分析,计量资料以均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验;计数资料以例数和率(%)表示,组间比较采用χ2检验;绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线,计算曲线下面积(area under the curve,AUC),评估 CSF1、DLEC1、PTEN单独及联合检测对骨肉瘤患者预后的预测价值;以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CSF1、DLEC1、PTEN表达情况的比较

骨肉瘤组织中CSF1蛋白的阳性表达率明显高于软骨瘤组织,DLEC1、PTEN蛋白的阳性表达率均明显低于软骨瘤组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。(表1)

表1 骨肉瘤组织和软骨瘤组织中CSF1、DLEC1、PTEN蛋白表达情况的比较[n(%)]

2.2 CSF1、DLEC1、PTEN单独及联合检测对骨肉瘤患者预后的预测价值

随访2年,62例骨肉瘤患者死亡23例,生存39例,总生存率为62.90%(39/62)。ROC曲线显示,CSF1+DLEC1+PTEN检测预测骨肉瘤患者预后的AUC为0.886(95%CI:0.802~0.970),高于三者单独检测。(表2、图1)

表2 CSF1、DLEC1、PTEN单独及联合检测对骨肉瘤患者预后的预测价值

图1 CSF1、DLEC1、PTEN单独及联合检测预测骨肉瘤患者预后的ROC曲线

3 讨论

骨肉瘤是较为常见的间叶组织原发恶性骨肿瘤,统计数据显示,骨肉瘤发病例数占骨肿瘤的20.0%,占恶性骨肿瘤的76.2%[7]。目前骨肉瘤的病因尚未明确,相关研究显示,下肢负重骨在射线、遗传、病毒感染、急性型骨炎等因素的诱发下,细胞结构会发生突变,从而形成肿瘤[8]。近年来,随着分子生物学的发展,寻求骨肉瘤生物学特性相关的分子靶点成为治疗骨肉瘤的新突破[9]。

本研究结果显示,骨肉瘤组织中CSF1蛋白的阳性表达率明显高于软骨瘤组织,DLEC1、PTEN蛋白的阳性表达率均明显低于软骨瘤组织,表明CSF1、DLEC1、PTEN参与了骨肉瘤的发生发展过程,可作为骨肉瘤的早期预测指标。CSF1是一种具有谱系特异性的细胞因子,可由多种细胞产生,包括成纤维细胞、内皮细胞、激活的巨噬细胞、淋巴细胞及多种肿瘤细胞等[10]。CSF1不仅能诱导巨噬细胞的增殖分化,且在多种肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,包括调节细胞生长、促进细胞黏附和迁移、促进肿瘤新生血管生成等[11]。DLEC1具有抑制肿瘤细胞生长的功能,相关研究发现,DLEC1在前列腺癌的肿瘤细胞系中表达明显缺失或下调,去甲基化后可以恢复表达,可明显抑制肿瘤细胞的生长、抑制集落形成并降低细胞的侵袭性[12]。PTEN是一种具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因,PTEN基因突变被证实与骨肉瘤的发病机制密切相关,PTEN缺失、突变可降低磷酸酶活性,强化肿瘤细胞的增殖能力[13]。相关研究指出,部分细胞因子在肿瘤细胞迁移侵袭及上皮-间充质转化过程中发挥重要作用[14-15]。且进一步ROC曲线分析结果显示,CSF1+DLEC1+PTEN检测预测骨肉瘤患者预后的AUC为0.886(95%CI:0.802~0.970),高于三者单独检测。提示CSF1、DLEC1、PTEN可作为骨肉瘤患者预后评估的重要指标,可将上述指标联合检测用于辅助性评估骨肉瘤患者的预后。

综上所述,骨肉瘤组织中CSF1阳性表达率较高 ,DLEC1、PTEN阳性表达率较低,CSF1、DLEC1、PTEN联合检测对骨肉瘤患者的预后有一定的评估价值。

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