P53、CDC7蛋白在多原发肺腺癌中表达的研究

张克剑，杨金礼，闫 阳，姜 慧，赵 辉

（吉林省肿瘤医院胸部肿瘤外一科，长春 130021）

多原发性肺癌 （multipleprimary lungcancer，MPLC）是指在同一患者肺内同时或先后发生两个或两个以上原发性恶性肿瘤[1]，分为同时性（synchronous）和异时性 （metachronous）两种。然而关于MPLC发病机制及诊断始终没有一个金标准，研究表明多原发肺癌的发生、发展和转移与P53基因突变及P53基因信号传导通路密切相关[2]，现以P53蛋白、CDC7蛋白在多原发肺腺癌原发灶中表达，探讨其与多原发肺癌临床病理学特征关系和发病机制。

1 资料和方法

1.1 一般资料

收集吉林省肿瘤医院2017年1月－2020年12月接受手术治疗且病理为腺癌（排除转移癌）的多原发肺癌患者56例（每例均有 2个或2个以上独立病灶），术前均未做任何治疗。56例中男20例，女36例；年龄 36～76岁，平均56岁。临床症状表现为无症状体检发现18例，咳嗽20例，胸痛8例，胸闷10例。同时性38例中病灶位于同侧右肺内的12例，同侧左肺内的10例，左右两侧肺内均有16例。异时性18例中病灶位于同侧右肺内的6例，同侧左肺内的4例，对侧肺内均有8例。

1.2 实验方法

病变组织、正常肺组织分别采用免疫组化二步法，P53蛋白、CDC7蛋白抗体的工作稀释度分别为1: 200、1: 100、1: 50，以半定量法判定结果。P53 主要表达于癌细胞核，CDC7主要表达于癌细胞胞浆，阳性细胞呈棕黄色或棕褐色颗粒。每例标本随机选取5个不同高倍视野（各计 100 个细胞），计算肿瘤细胞中 P53、CDC7表达的阳性细胞数。P53、CDC7蛋白阳性细胞的计算：1）首先，按阳性细胞数计分： 0%～5%为0分，5%＜1分＜25%，25%＜2分＜50%，50%＜3分＜75%，＞75%为4分。2）再按阳性细胞染色强度计分：无染色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，深棕黄/棕褐色为3分。两者之和所得总分进行判断，0-2分为阴性（-），3-7 分为阳性（+）。每例患者有2个病灶，将（-、-）记为阴性，（-、+）和（+、+）记为阳性结果。病变组织、正常肺组织行Western blotting检测肿瘤组织中P53蛋白、CDC7蛋白的表达。结果应用 Phoretix ID 软件灰度扫描，其数值为相应蛋白与内参蛋白（GAPDH）相除得到的相对光密度值。

1.3 统计学方法

所有数据采用统计学软件采用SPSS 17.0软件包分析，采用均数±标准差（±s）表示，组内两两比较采用t检验，百分率差异检验采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 56例NSCLC患者临床基线资料

见表1。

表1 56例NSCLC患者临床基线资料

2.2 P53、CDC7蛋白免疫组化检测结果

P53 表达阳性染色主要显示为细胞核呈棕色。56例肺癌组织中P53 阳性率为42%。56例正常肺组织中P53、CDC7蛋白不表达或几乎不表达。与正常肺组织相比，P53蛋白的表达水平差异有显著统计学意义（P＜0.01）。CDC7蛋白阳性染色主要显示为细胞核内出现棕黄色或棕褐色颗粒，阳性率为56%。与正常肺组织相比，CDC7蛋白的表达水平差异有显著统计学意义（P＜0.01）（见图1）。

图1 P53蛋白、CDC7蛋白在正常组织及肺癌组织中的表达

2.3 多原发肺癌中P53蛋白、CDC7蛋白的表达水平

见表2。

表2 多原发肺癌中P53蛋白、CDC7蛋白的表达水平

3 讨论

Spurgers等[3]研究发现高表达的CDC7和P53缺失相关，很多研究表明P53的缺失和靶基因的转录激活相关，P53能够选择性的抑制靶基因，影响细胞应答，而且这种抑制对于P53诱导的细胞凋亡和细胞周期阻滞是非常重要的。最近的研究表明很多涉及DNA复制的基因可能都受到P53抑制，包括CDC6、CDC2和 CDC7等。Bonte等[4]引对57个肿瘤细胞系进行对比之后发现，CDC7蛋白表达和P53突变之间具有显著相关性，过表达CDC7的细胞系中大约90%都伴有P53突变。许丹丹等[5]报道CDC7作为一种蛋白激酶，在正常细胞中表达很低，但在细胞周期中发挥重要的作用。随着研究的不断深入，越来越多的证据表明它与肿瘤密切相关。宁晖等[6]P53、HER2和K-ras在多原发性肺癌原发灶中过度表达率分别为 37.26%、47.06%和39.22%，38例正常肺上皮组织中P53、HER2、K-ras不表达或几乎不表达。

本研究通过检测多原发肺癌中P53、CDC7蛋白的表达水平，发现多原发肺癌患者肿瘤组织中P53蛋白和CDC7蛋白的表达均增高，但P53表达的水平与患者年龄、性别、吸烟史及肿瘤的分期无关（P＞0.05）。多原发肺癌患者肿瘤组织中CDC7蛋白表达的水平与患者年龄、性别及吸烟史因素无关（P＞0.05）。在多原发肺癌中P53、CDC7的表达均明显表达，说明在多原发肺癌的发生过程中至少存在2种蛋白的参与。P53、CDC7蛋白的共同表达，说明这两种蛋白可能有协同致癌作用。多原发肺癌患者肿瘤组织中CDC7蛋白表达的水平与患者病理分期因素有关，中晚期肺癌患者肿瘤组织中CDC7蛋白表达明显高于早期。在多原发肺癌中P53蛋白的表达水平的高低与淋巴结转移无明显关系，CDC7蛋白的表达水平的高低与淋巴结转移有明显关系，CDC7蛋白在有淋巴结转移的多原发肺癌组织中，阳性率明显高于无淋巴结转移者。这说明CDC7蛋白的表达水平高与患者术后预后有关，是多原发肺癌预后不良的指标。在多原发肺癌中CDC7的表达高低是否受P53蛋白的调节和影响，暂无法确定，有待于进一步研究。