急性心肌梗死患者血浆miR-542-5p表达水平与心肌损伤程度的相关性分析

李雨浓，韦伟，周音频

急性心肌梗死（AMI）是心肌组织急性缺血缺氧导致的心肌坏死性疾病，长期供氧不足与耗氧增加导致氧供需失衡[1]，临床表现多为严重的心绞痛症状，口服硝酸酯类药物不能缓解[2]。冠状动脉（冠脉）粥样斑块的形成被认为是AMI病变形成的基础，在AMI发生前多经历心肌缺血缺氧的病理改变及血栓形成，最终形成冠脉完全阻塞，出现心肌坏死症状[3]。目前临床评估AMI的实验室指标多为心肌损伤的血清标记物，如肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌肌钙蛋白（cTn）和乳酸脱氢酶（LDH）等，其中cTn是人体心肌收缩时重要的血清调节蛋白复合物，已成为诊断心肌损伤的金标准[4,5]。在慢性心力衰竭、慢性肾病、手术、高强度运动后均可引发心脏损伤，进而表现出较高水平血清标记物异常，导致其特异性较低，因此需具有较高诊断特异性与灵敏度的生物标记物进行补充[6]。有研究发现，miR-542-5p在体内通过cAMP通路影响心肌肌丝蛋白进而调节心肌收缩功能，miR-542-5p异常增高表明患者体内存在较多活性氧，加剧细胞损伤，因此miR-542-5p的异常表达水平可能影响了心肌细胞纤维化与心肌损伤过程[7]。因此，本研究选取我院收治的108例AMI患者为研究对象，探讨AMI患者的miR-542-5p表达水平与心肌损伤的相关性，以期为AMI患者的预防、诊治提供补充依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取重庆大学附属涪陵医院心血管内科于2019年5月至2021年5月收治的诊断为AMI患者108例为研究对象。根据Killip分级进行分组：1级：无明确心力衰竭（心衰）现象；2级：有左心衰症状，肺部有啰音，肺野＜50%；3级：发生急性肺水肿，全肺有大小干、湿啰音；4级：发生心源性休克，同时患者出现肺水肿；患者的一般资料见表1，患者及家属均知情同意，本研究经我院伦理委员会审批通过。

1.2 诊断标准观察组患者符合AMI相应诊断标准[8]，临床表现为原有心绞痛症状复发且加剧，即突然性剧烈持久的胸骨后或心前区压榨性疼痛，有濒死感，对硝酸甘油的作用效果变差或无效。影像学改变主要为新出现Q波、ST段抬高以及ST-T动态演变。

1.3 纳入与排除标准纳入标准：①符合上述AMI相应诊断标准并行冠脉造影；②既往无慢性心力衰竭、慢性肾病、心肌炎、高血压性心脏病等器质性疾病；③患者知情同意并自愿参与本研究。排除标准：①合并慢性肾功能不全；②近期有外伤及重大手术史；③合并肝癌、胃癌、肺癌等恶性肿瘤患者；④入院2 d内放弃治疗的患者。

1.4 观察指标血浆样本的采集与保存：所有纳入受试者均于入院次日静脉采血5 ml至EDTA抗凝试管中，以3000转/min转速离心10 min，取上层血浆至3 ml EP管中，密封存于-20℃环境保存。心肌损伤标志物含量测定：严格按照试剂盒说明操作，采用ELIISA法检测CK、CK-MB、LDH水平，免疫比浊法测定高敏肌钙蛋白I（hs-cTnI）水平。miR-542-5p表达水平测定：取250 ul血浆加入750 μl TRIzol，混匀后加入50 pm线虫celmir-39充分振荡，至蛋白复合物解离。继续加入200 μl氯仿，充分振荡后常温下静置10 min，以12 000转/min，4℃下离心10 min，取上清液置于试管中，依次加入2 μl糖原、600 μl异丙醇，混匀后密封存于-20 ℃环境过夜。以12 000转/min，4℃下离心10 min，弃上清，对沉淀物用95%酒精溶液反复清洗，加入10 μl DEPC混匀得到RNA样本。采用实时聚合酶链反应仪对逆转录后的样本测定miR-542-5p相对表达水平。

1.5 统计学分析本研究数据均采用SPSS 22.0进行统计分析，其中计量资料采用（均值±标准差）的形式呈现，统计分析采用t检验进行分析；计数资料采用频数（%）形式呈现，采取χ2检验进行统计分析，相关性分析采用Spearman相关性分析方法进行统计分析。制作ROC曲线进行指标预测效能评价。

2 结果

2.1 四组患者临床资料对比根据AMI严重程度分级，将患者分为四组，分别为35例、33例、26例和14例，对比四组受试者的一般资料，四组在性别、年龄及合并症方面无明显差异（P＞0.05），具有可比性，表1。

2.2 四组血清CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平对比四组受试者血清学指标CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI检测对比发现，患者各指标水平均随着Killip分级等级的增加而逐渐升高，且数据差异具有统计学意义（P＜0.05），提示心肌损伤越严重，上述血清学指标增高越显著；反之，CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平越高，AMI患者心肌损伤程度越严重，表2。

表2 四组血清CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平对比

2.3 四组患者的外周血浆miR-542-5p表达水平对比对四组患者的外周血浆中miR-542-5p表达水平进行测定，结果显示，随着Killip分级的增加，miR-542-5p表达水平均不断增加，差异具有统计学意义（P＜0.05），图1。

图1 四组患者的外周血浆miR-542-5p表达水平比较

2.4 miR-542-5p表达与CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平相关性分析将外周血浆中miR-542-5p表达水平与血清中CK、CK-MB、LDH及hs-cTnI水平进行相关性分析，miR-542-5p表达水平与四项血清学指标水平均呈显著性正相关，其中CK（r=0.508）、CK-MB（r=0.507）、LDH（r=0.501）、hs-cTnI（r=0.493），具有统计学意义（P＜0.001），图2。

图2 相关性分析

2.5 效能评价分析利用外周血浆中miR-542-5p表达水平预测评估AMI的发生，可见曲线下面积为0.656（95%CI：0.604～0.712，P＜0.001），约登指数最大值为0.196，对应最佳截断值为2.026，灵敏度0.592，特异度为0.604，图3。

图3 miR-542-5p表达水平预测AMI发生的关系

3 讨论

AMI是目前心血管疾病死亡率与发病率较高的主要原因，其发生时可引起患者心衰及缺血症状的发生[9,10]。缺血再灌注是目前临床治疗AMI较有效的方法之一，可一定程度上改善患者预后。早期的突发性血运重建会导致血流的突发性损伤，引起缺血再灌注损伤[11]。目前对于AMI及缺血再灌注对心肌的损伤具体机制仍不清晰，因此，通过进一步了解AMI心肌损伤的机制对认识及早期诊断心肌损伤对AMI的临床治疗具有重要意义。

既往研究报道，当心肌缺血缺氧发生时，与心肌损伤相关的酶分子释放入血液循环，引发心肌损伤相关酶的异常的高水平[12]。CK、CKMB、hs-cTnI是目前临床用于评估心肌损伤的重要实验室标记物，CK-MB主要参与心肌细胞的能量代谢，hs-cTnI对保持心肌细胞的完整性具有重要的意义，然而CK-MB在AMI诊断方面缺陷较为明显[13,14]。AMI患者发生胸痛的4 h内cTnT在的诊断敏感性仅50%，有较低的早期诊断特异性[15]，因此阻碍了CK-MB的进一步应用。

miRNA是一类单链非编码RNA，在心肌细胞凋亡、坏死、自噬等过程中参与了重要的调控作用[16]。大量研究显示，miRNA通过活化调控血管内皮细胞参与心肌细胞损伤，miR-138可通过JNK/c-jun细胞信号通路对缺氧导致的凋亡具有显著的保护作用，抑制miR-92a的表达对损伤的心肌细胞具有一定的保护作用[17,18]。有资料显示，miR-145-5p可通过负性调控CD40产生对心肌细胞的凋亡与炎症反应的作用，进而保护缺血损伤的心肌组织[19,20]。本研究初步探讨了miR-542-5p在AMI患者中的表达，结果提示miR-542-5p在AMI患者体内存在较高的表达水平。因此，本研究比较AMI患者miR-542-5p表达与CK、CKMB、LDH及hs-cTnI水平相关性，制作ROC曲线对其预测AMI的发生的效能进行评价。结果显示，miR-542-5p表达水平均与四项血清学指标水平呈显著性正相关，同时ROC曲线提示预测较为准确，曲线下面积0.656，95%CI：0.604～0.712，P＜0.001，约登指数最大值为0.196，对应最佳截断值为2.026，灵敏度0.592，特异度为0.604，提示AMI患者miR-542-5p表达水平与心肌损伤程度密切相关，原因可能为心肌缺血缺氧时，增高的miR-542-5p水平抑制了心肌细胞的线粒体功能，导致心肌萎缩，心脏预后变差。另有文献报道，miR-542-5p可能是通过抑制心肌细胞的自噬相关机制进而影响心肌细胞功能；因本研究仍处于研究初步阶段，且样本量较少，更深层次的发生机制需进一步研究明确。

综上所述，AMI患者血清学指标CK、CKMB、LDH及hs-cTnI水平随心肌损伤加重而增加，同时血浆中miR-542-5p水平也增加，提示miR-542-5p可作为诊断AMI患者心肌损伤程度的标志物，为临床AMI患者的预防、诊治提供补充依据。