散发性甲状腺髓样癌组织中Asporin蛋白的临床价值

占少华，矫祯浩，葛 微，王天笑

(1.北京大学第三医院 检验科，北京 100191；2.中国医学科学院基础医学研究所 北京协和医学院基础学院 免疫学系,北京 100005; 3.北京大学肿瘤医院 头颈外科，北京 100142)

甲状腺髓样癌(medullary thyroid cancer，MTC)是一种恶性的神经内分泌肿瘤，由甲状腺C细胞恶性增殖产生，约占所有甲状腺癌的2%～3%[1]。根据疾病的遗传特性，MTC可分为遗传性和散发性两大类。尽管局限性不伴有远处转移的散发性MTC具有良好的预后，10年生存率能够达到70%～80%，但是MTC细胞侵袭性高，很多患者初诊时已是晚期，传统的“手术+放化疗模式”获益有限，10年生存率降到仅有10%[2]。因此，临床上迫切需要找到新的肿瘤标志物，用来早期诊断和监测散发性MTC的恶性发展。本研究旨在探讨Asporin作为早期诊断和监测散发性MTC新的潜在肿瘤标志物的价值。

1 材料与方法

1.1 材料：主要试剂：兔二步法检测试剂盒(中杉金桥)；Anti-Asporin 抗体 (Abcam公司)；TMTsixplexTM标签试剂盒(Thermo Fisher Scientific公司)。

1.2 方法

1.2.1 串联质谱标签(tandem mass tag，TMT)定量标记的蛋白质组学实验：收集北京大学肿瘤医院头颈外科2016年1月至2016年10月手术的3例散发性MTC癌和癌旁患者组织，并进行TMT定量标记的蛋白质组学实验，所得的组学数据已上传到蛋白质鉴定数据库(proteomics identification database，PRIDE)网站(编号：PXD005898)。

1.2.2 免疫组织化学：收集北京大学肿瘤医院头颈外科2008年1月至2015年12月手术的42例散发性MTC患者石蜡切片，免疫组化实验按照说明书操作。

1.3 统计学分析:运用SPSS 19.0软件。单因素的计数资料和单因素的定量资料使用非参数秩和Mann-WhitneyU检验。接受者操作特性曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)通过灵敏度和1-特异性进行绘制。

2 结果

2.1 蛋白质组学的生物信息学分析:Funrich 3.1.3软件对鉴定的388个差异表达蛋白进行基因本体富集分析(Gene Ontology，GO)，发现这些差异表达蛋白主要富集于与肿瘤密切相关的生物学过程(图1A～D)。

2.2 Asporin在散发性MTC癌组织中高表达:Asporin蛋白在MTC癌组织中表达高于癌旁组织，且主要表达于癌细胞的细胞质、细胞膜和细胞外基质中(图2A～C)。ROC曲线分析发现Asporin在鉴别散发性MTC癌和癌旁组织准确度为0.935，特异性为0.74，敏感性为0.929(图2D)。

2.3 Asporin与肿瘤的淋巴结转移正相关:MTC癌组织中高表达的Asporin与淋巴结转移正相关(P<0.05)，而与年龄、性别、腺外侵犯、多灶性、结节性甲状腺肿、肿瘤直径、肿瘤大小分类和AJCC分期不相关(表1)。

表1 Asporin蛋白表达水平和临床病例资料的相关性分析Table 1 Correlations of Asporin expression with clinicopathological characteristics

续表1

3 讨论

Asporin(基因名：ASPN)最早发现于2001年[3]，研究发现Asporin在结直肠癌、胃癌、胰腺导管腺癌、晚期结直肠癌和乳腺癌癌组织或血清中高表达[3]，具体分子机制研究发现，Asporin可通过TGF-β信号通路抑制三阴性乳腺癌(ER、PR和HER2)均为阴性的发生发展[3]。在结直肠中，Asporin可分别通过TGF-β或EGFR信号通路抑制或促进癌细胞的侵袭和转移[3]。此外，Asporin还可直接与CD44结合促进硬化性胃癌和胰腺癌的恶性发展[3]，但Asporin在散发性MTC中的作用及分子机制尚未见报道。

本研究发现散发性MTC癌组织中高表达Asporin，且癌组织中高表达的Asporin与肿瘤的淋巴结转移正相关，可望作为早期诊断和监测散发性MTC新的潜在肿瘤标志物。但是，Asporin作用的具体分子机制仍有待进一步研究。

A.cellular component enrichment analysis；B.biological process enrichment analysis；C.biological pathway enrichment analysis；D.molecular function enrichment analysis图1 差异表达蛋白的GO分析Fig 1 Gene Ontology analysis of differentially expressed proteins

A.protein-protein interaction network analysis, and upregulated or downregulated proteins are shown in red and green, respectively；B.immunohistochemical image of Asporin；C.histopathological scoring of Asporin, P<0.01；D.ROC analysis图2 Asporin蛋白在散发性MTC癌组织中高表达Fig 2 Asporin up-regulated in sporadic MTC tumorous tissue