中医药防治血脂异常的实验研究进展

耿秀超，王 梓，蔡紫赟，尹艳紫，张晓蕾，孙坤举，张雨豪，李 强，

血脂异常与脂肪肝、高血压、糖尿病及多种心脑血管疾病发生都密切相关，我国成人血脂异常患病率超过40%，且发病呈低龄化趋势[1]。中医学通常不采用“血脂”或“血脂异常”表述，而常将其引起的诸多症状归于各种内伤杂病。他汀类药物是临床调节血脂异常的一线用药，但不良反应限制了临床治疗效果[2-3]。中医药具有多靶点的作用优势，为其在安全性和有效性方面奠定了基础。但中药成分复杂，配伍方式多样，研究多停留在处方总结、疗效观察的层面。因此，如何选择和制备合适的实验模型，积极探索中医药在细胞、分子水平的研究，发挥中医药特色优势就显得尤为重要。本研究检索和整理了国内外相关文献，从实验研究的角度出发，对中药有效成分、中药复方治疗血脂异常实验研究及常见实验模型进行比较分析，以期为中医药防治血脂异常提供新思路。

1 体内实验常见模型

1.1 斑马鱼 斑马鱼是一种原产于南非地区的热带硬骨鱼，体积小，胚胎透明，易于大规模饲养，繁殖能力强且实验周期短，因其与人类同为脊椎动物，基因组序列与人类有着87%的高度相似性，被广泛作为高通量筛选药物的经典模型[4]。血脂构成、脂质吸收代谢、器官组织与人类基本一致，被大量应用于血脂异常的研究中。缺点是不能采血进行脂质分析，如采用活体荧光探针技术进行实验，对实验设备要求较高。

1.2 大鼠 大鼠具有成本低、抗病力强、实验操作简单且稳定性好等优点，已成为研究血脂异常使用率最高的一种动物[5]。大鼠血液丰富，一次采血可满足多项指标的检测要求。缺点是饲喂高胆固醇食物，易出现“厌食”，与人脂质代谢机制存在较大的差异，不宜作为抗动脉粥样硬化(AS)药物的筛选。

1.3 小鼠 小鼠血脂稳定，造模实验操作相对简单且成本低廉，具有很大优势，但由于小鼠可取血量少，使部分实验指标检测受限[6]。小鼠血浆缺乏血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)，对饮食中的血清总胆固醇(TC)和高糖无反应，建立动脉粥样硬化模型成功率低。

1.4 豚鼠 豚鼠的血浆脂蛋白构成、TC代谢和对药物治疗的反应与人类相似，主要体现在低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)/高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)比值高、肝中游离胆固醇浓度高于酯化胆固醇等方面[7]。性情温和，可取血量大，对高脂饲料尤为敏感，容易饲养。切除卵巢的豚鼠还可以较好地模拟绝经后女性的脂蛋白代谢。缺点是造模时间较长。

1.5 家兔 家兔脂蛋白代谢与人类相似，血浆中含有丰富的血浆胆固醇酯转移蛋白，对外源TC吸收率高，造模速度快，重复性好，是研究血脂异常和动脉粥样硬化最早的一种动物模型[8]。因家兔属于食草动物，与人类TC代谢机制并不完全一致，长期高脂饮食易出现腹泻、皮肤病等副作用。

2 体外实验常见模型

2.1 HepG2细胞模型 HepG2来源于人胚胎肝癌细胞，造模周期短、成本低，具有高分化性、稳定性、永生化和可反复冻存等特点，广泛应用于抗氧化、降脂保肝、抗肝癌和抗脂肪变性等研究[9]。又因其保留了完整的与人类生物代谢相关的酶，可正常表达与脂质代谢相关的mRNA转录水平及蛋白水平，目前也被广泛用于评价中药的调节血脂活性。

2.2 L-02细胞模型 L-02细胞是来自正常人胚胎肝组织且能够贴壁生长的细胞，能完全模拟人类脂质代谢过程[10]。HepG2 细胞来源于人肝胚胎肿瘤细胞，与正常人肝细胞有一定的差异，且病变仅仅为单纯脂肪变性，脂质氧化不明显，因此，L-02细胞更具可行性和说服性，已广泛用于肝药理活性、肝毒性和肝细胞脂代谢等研究[11]。但L-02细胞用油酸和脂肪乳诱导TC升高不明显，如果浓度过高，会加剧脂质积累和细胞代谢紊乱，转氨酶升高，造成细胞损伤[12]。

2.3 Changliver细胞模型 Changliver细胞是人永生化正常肝细胞株，具有人类肝细胞的特征，具有L-02细胞所没有的无限传代特点，培养方法与原代细胞相比简单，且不属于肿瘤细胞，实验结果更接近于由正常肝细胞发展而来的非酒精性脂肪肝(NAFLD)模型特点，是体外研究非酒精性脂肪性肝较为理想的细胞模型[13]。

2.4 3T3-L1细胞模型 3T3-L1前脂肪细胞是G.J.Todaro从Swiss系小鼠胚胎里3T3细胞中分离得到，需利用适当的诱导剂对其进行刺激，使其定向分化成充满脂滴的脂肪细胞才能进行下一步的实验探索。诱导分化前，3T3-L前脂肪细胞间质稀少，体积小，呈梭形，包浆中不含有三酰甘油(TG)的脂滴[14]。诱导分化后则变成成熟的脂肪细胞，贴壁完好，棱角分明，大量的TG脂滴积聚于细胞核的周围。3T3-L1脂肪细胞是目前国际上公认的可用于研究血脂异常、肥胖以及筛选降脂中药和抗肥胖药物的细胞模型[15]。

3 中医药治疗血脂异常的实验研究总结

3.1 单体 中药调节血脂在长期的临床实践中已被证实，随着现代药理学研究的不断深入，目前已知约130多种中草药具有调节血脂的作用，其中有效成分包含皂苷类、多酚类、多糖类、黄酮类、植物甾醇类、不饱和脂肪酸类、蒽醌类、生物碱类、蛋白质类共9大类，详见表1。其中证明对治疗血脂异常有效的定性实验占了绝大部分，尚缺乏定量实验和调节血脂中药之间的对比实验[16]。

表1 中药单体治疗血脂异常实验研究总结

3.2 复方 辨证论治、复方施药是中医诊疗特色。中药复方治疗具有多途径、多层次和多靶点的作用，当前中药复方治疗多以经典古方化裁和中成药为主。当代医家通过实验研究评价中药对血脂异常的干预效应，弥补了经验医学的短板，使中医药研究得到完善，为临床应用提供了新思路和新证据。详见表2。

4 小 结

选择理想的实验模型对寻找防治血脂异常的中药十分关键。血脂异常的动物模型可通过TC判断造模是否理想，尤其是斑马鱼模型进行高通量筛选，但动物模型多基于临床的主要症状构建，比如通过改善饮食而复制的动物模型，从形成时间和“饮食不节”“膏粱之疾”等病因病机角度与人类血脂异常形成相似，但忽视了其他因素对疾病的影响，中医很多临床症状(胸闷、心悸以及肢体麻木沉重等)在动物模型上都不能观察到。细胞实验虽然周期短，方便快捷，价格相对低廉，但生物体终究是一个有机整体，实验的结果不能充分证明药物在体内的效果。中医诊疗注重辨证施治，中药复方组成及剂量呈现很大的区别，药物有效成分作用部位、作用靶点研究不够深入，在今后的研究中要注重规范使用现代医疗检测方法，对实验结果进行系统分析，形成一个权威、统一的诊断和疗效评定标准。