MiRNA在复发性流产机制中的研究进展*

张雪梅 综述，王 虎，李佳平，石 琪△ 审校

(1.川北医学院附属医院遗传与产前诊断中心，四川 南充 637000；2.川北医学院附属医院妇产科，四川 南充 637000)

MiRNA是一类广泛存在于真核生物，高度保守的内源性非编码RNA分子，其长度为18～25个核苷酸单链。MiRNA自身不编码蛋白质，通过与靶mRNA的3′端非编码区完全或不完全互补配对结合，降解或抑制该mRNA的翻译，从而在转录后或翻译水平调控靶基因的表达，最终影响蛋白质编码，从RNA水平发挥其主要的生物功能。MiRNA参与调节胚胎发育，细胞发育、增殖、凋亡、分化，应激反应等多个生理过程[1-3]。

复发性流产(RAS)是指与同一性伴侣连续发生3次及以上的自然流产，RAS大多数为早期流产，少数为晚期流产[4]。RAS病因复杂，早期RAS常见原因有胚胎染色体异常、免疫功能异常、黄体功能不全、甲状腺功能低下等因素，但仍有部分RAS病因不明，发病机制不清楚，因此使之成为妇产科中较棘手的疾病[4]。近年来随着分子生物学的不断发展，越来越多的研究发现miRNA在RAS发病机制中起着重要作用，从miRNA基因水平认识到RAS具有遗传易感性，其发生发展与叶酸代谢水平、细胞凋亡、子宫内膜容受性及母胎界面环境关系密切，因此系统探讨miRNA在RAS发病机制中的研究进展，有望为RAS病因提供更好的思路、理论依据，为其预防、治疗提供新的靶点。

1 MiRNA基因多态性

1.1MiRNA调控RAS遗传易感性 MiRNA在转录后基因表达调控中起关键作用，其基因编码序列单核苷酸(SNP)存在多态性，多项研究认为与RAS发生相关。如构建双基因座单倍型，使pri-miR-125a两个常见的多态性基因(AT、GC)作用于miR-125a，使其表达下调，能抑制靶基因LIFR和ERBB2的表达功能，使胚胎植入和蜕膜化发生改变，最终促进RAS的发生[5]。MiR-423编码区的SNP位点rs6505162C>A与RAS相关，通过双荧光素酶测定方法证实，pre-miR-423中的CC/TT单倍型通过降低miR-423的表达，调控其靶基因 MESDC1的水平，从而增强了RAS的遗传易感性[6]。MiR-323b编码区的rs56103835T>C基因型增加RAS的风险，WANG等[7]同样用双荧光素酶测定方法证实，pre-miR-323b中的 TC 单倍型，影响miR-323b的成熟，下调其靶基因Pax8表达，促进细胞凋亡，增加流产风险。有报道称，miR-10a的rs3809783编码区A等位基因比T等位基因更能抑制细胞增殖和迁移能力，当A>T时出现RAS的风险增大[8]。有研究认为，miR-149T>C,miR-150G>A及miR-1179A>T多态性在胚胎着床过程中调控基因表达，是RAS的遗传决定因素。由此可见miRNA与RAS遗传易感性关系密切[9-10]。

1.2MiRNA影响RAS叶酸代谢 RAS与血液同型半胱氨酸(Hcy)升高相关，认为Hcy可作为风险标志物，RAH等[11]发现，miR-27a的单倍型基因A>G多态性能使血液Hcy、叶酸水平升高，不仅能降低RAS的风险，还能改变妊娠结局。研究发现，miR-604A>G 和miR-938G>A多态性调控亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)的水平，与RAS存在显著相关性[12]。有报道称，叶酸与miRNA存在相互作用，miRNA能影响叶酸水平，而低水平叶酸能上调miR-222-3p、miR-141-3p 和 miR-34b-5p的表达，改变靶基因的表达导致胎盘功能障碍，出现流产等不良妊娠结局[13]。

通过基因多态性的研究，RAS患者进行基因遗传分析，对病因有新的认识，对疾病的预测及风险评估提供了新思路，因此，对RAS患者进行miRNA基因多态性检测，可能更有针对性地改善妊娠结局，能更好地预测妊娠结局，在时间和经济上减少损失。同时指导我们在基因多态性方面需有更深入的研究，从分子遗传学方面改善RAS患者的妊娠结局。

2 MiRNA调控细胞凋亡

MiRNA的促细胞凋亡功能在RAS中有较多研究，通过作用不同的靶基因调控不同的信号通路，最终调节滋养细胞的增殖及凋亡，在RAS事件中起重要作用。如miR-365上调可使其直接靶标SGK1下调，使相应蛋白表达水平改变，从而调控滋养细胞周期的进程和凋亡，最终促进了RAS的发生。因此，有学者考虑将miR-365作为RAS的预后生物标志物和治疗靶标的潜在效用[14]。通过对临床标本的分析及体外研究，又发现miR-520表达上调时，其作用的靶因子PARP1降低，促进了DNA损伤诱导的细胞凋亡，以调节RAS的进展[15]。WANG等[16]通过对差异表达的大量miRNA的靶基因进行GO分析，发现这些靶基因可通过KEGG、ErbB、黏着斑、p53等多种信号传导途径发挥作用，参与滋养细胞增殖、凋亡，甚至血管发育和血管生成等调节。一些常见的miRNA在RAS机制中具体的靶向促细胞凋亡途径见表1。

表1 MiRNA在RAS中促凋亡途径

3 MiRNA影响RAS子宫内膜容受性

良好的子宫内膜容受性是胚胎植入成功的先决条件，因此子宫内膜容受性差是胚胎着床失败的主要原因之一。AKBAR等[26]通过动物实验发现下调miR-183-5p能介导子宫内膜细胞中CTNNA2的水平升高，从而改变雌激素水平，影响子宫内膜容受性，其认为miRNA通过转录后修饰在子宫内膜容受性中发挥着重要作用。研究发现miR-200c 靶向作用于FUT4，抑制其表达，导致子宫内膜容受性功能障碍；miR-200c 降低糖蛋白 CD44 上的α1，3-岩藻糖基化，使 Wnt/β-catenin 信号通路失活，影响子宫内膜容受性，出现反复流产[27]。因此，miRNA可调节子宫内膜容受性，影响妊娠结局，导致RAS。

4 MiRNA影响RAS母胎界面环境

4.1MiRNA与胎盘氧化应激 胎盘是一种母胎屏障，为发育中的胎儿提供其所需的所有营养，miRNA在胎盘发育和循环建立中发挥重要调节作用。近年来，母胎医学成为研究热点，发现miRNA在母胎界面的组织中存在表达差异，也有学者展开了miRNA在母胎界面的调节与RAS的研究[28]。

研究发现miRNA除了在滋养细胞增殖、迁移和凋亡过程中有重要作用，同时通过氧化应激反应调节胎盘的发育，影响母胎界面循环建立，发生特异性改变，导致许多胎盘源性疾病的发生[29-30]。ALEXANDER等[31]认为miRNA影响母胎界面平衡可导致RAS，如miR-335、miR-29b、miR-182、miR-338、miR-144等，通过调控抗氧化基因，使母胎界面抗氧化系统的平衡被破坏，发生氧化应激反应，影响滋养细胞的增殖，促进RAS的发生。MiRNA调控滋养细胞氧化应激，影响母胎界面的内环境平衡，增加流产的风险。

4.2MiRNA与免疫耐受 人类白细胞抗原G(HLA-G)作为一种促进妊娠耐受的分子，被认为在母胎界面滋养细胞中发挥重要作用，是确保成功妊娠的关键指标之一，参与了妊娠期母胎界面免疫反应的重要编程，然而HLA-G的转录后水平受miRNA调节[32]。WANG等[33]通过研究发现，miR-133a参与了孕妇的免疫耐受，为了探索RAS的发病机制，进一步研究了miR-133a对HLA-G表达的调节，结果证实miR-133a与HLA-G 3′非转录区(UTR)结合，相互作用，最终miR-133a通过减少翻译调节HLA-G表达，促进RAS的发生。另外，在低氧条件下，miR-365的表达显著上调，其靶向HLA-G 3′UTR，抑制HLA-G表达，打破母胎界面免疫耐受的平衡，影响胎盘发育[34]。

自然杀伤(NK)细胞作为关键的调节细胞，对母胎界面耐受有重要影响，上调miR-30e可通过靶向PRF1降低PB-NK细胞和D-NK细胞的细胞毒性，从而抑制辅助性T细胞1(Th1)耐受表型并诱导Th2免疫优势，可能有助于创造母胎界面的微免疫耐受环境[35]。MiR-155是对妊娠免疫适应的关键调节因子，通过作用调节性T细胞实现强大的妊娠耐受性和防止胎儿丢失[36]。M1巨噬细胞是母胎界面的重要免疫细胞成分，miR-146a-5p靶向 M1 巨噬细胞调控滋养细胞功能，在RAS机制中发挥重要功能[37]。

综上所述，RAS发病机制复杂，但从miRNA角度已有了些研究，从基因水平到分子生物水平，从研究成熟的细胞凋亡途径到目前研究热度较高的胎盘源性疾病角度，不仅指导了对RAS的深入认识，丰富了产前诊断内容，而且对疾病预测和辅助生殖的风险评估提供了新的思路，部分miRNA甚至有望成为RAS的干预靶点。MiRNA在肿瘤等其他疾病方面已有较多研究，并能起到预防性治疗，但在产科RAS方面仍需要更多的研究及探索，希望能对其治疗有一定突破，真正解决我们对其发病机制研究的初衷，将其与精准医学结合，给更多RAS家庭带来福音。