利胆排石糖浆质量标准研究

李旎，陈抚州

南昌结石病专科医院，江西 南昌 330001

医疗机构制剂，是我国卫生产业的特色之一，是医院药学和药学服务的重要组成部分［1］。医疗机构中药制剂是中医临床经验积累的特殊产物,加强中药制剂质量管理，为医疗机构制剂临床疗效、风险评估、制剂安全使用等研究提供了有效的技术支撑［2］。

利胆排石糖浆为纯中药制剂，是由茵陈、虎杖、人工牛黄、枳壳等制成的糖浆剂，为南昌结石病专科医院制剂（赣药制字Z20090054）。具清热除湿、消炎利胆的功效，用于肝胆管结石、胆囊结石、甲肝黄疸等，经过几十年的临床应用，安全稳定，疗效确切。制剂原标准以虎杖药材中大黄素的薄层色谱鉴别及制剂通则中糖浆剂要求为主，为更好地控制制剂质量，现增加对人工牛黄、枳壳药材的薄层色谱鉴别及制剂中绿原酸的含量测定。

1 材料

1.1 仪器

LC-20AT 型液相色谱仪；岛津ODS-3 C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；超声波清洗器；分析天平；三用紫外线分析仪；台式高速离心机。

1.2 试剂与试药

对照品：胆酸（10078-201415）；新橙皮苷（111857-201804，99.4 %）；柚皮苷（110722-201815，91.7 %）；绿原酸（110753-201817，96.1 %）均来自中国食品药品检定研究院。甲醇（20115029），乙腈（21015166）均为色谱纯；其他试剂均为分析纯。利胆排石糖浆（201111、201112、210623、210624、210625）。

2 薄层色谱鉴别方法与结果

2.1 人工牛黄

用10 mL 量筒量取10 mL 样品，置于100 mL具塞锥形瓶中，加入30 mL 乙醇，密塞，摇匀，放入超声仪内，超声处理30 min，冷却后摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。采用同法对未添加人工牛黄的样品进行处理，得阴性对照液。称取适量的胆酸对照品，加入甲醇，制得浓度为每l mL 含l mg 的溶液，作为对照品溶液。吸取以上三种溶液各5 μL，点样于同一硅胶G 薄层板上，以正已烷-乙酸乙酯-甲醇-醋酸（20∶25∶3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，用10 %磷钼酸乙醇溶液做显色剂，均匀喷洒，放入恒温鼓风干燥箱中，于105 ℃加热至斑点清晰，在日光下观察色谱情况［3］。色谱图可见清晰的胆酸斑点，且分离度好，阴性无干扰，见图1。

图1 人工牛黄薄层色谱图：1～3.三批供试品；4.胆酸对照品；5.阴性样品

2.2 枳壳

用25 mL 量筒量取20 mL 样品，置于100 mL具塞锥形瓶中，加入20 mL 95%乙醇，密塞，摇匀，放入超声仪内，超声处理30 min，冷却后摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。采用同法对未添加枳壳药材的样品进行处理，制得阴性对照液。称取适量的新橙皮苷、柚皮苷的对照品，加入甲醇，得浓度为每l mL 各含l mg 的混合溶液，作为混合对照品溶液。分别吸取供上述三种溶液各3 μL，点于同一块硅胶G 薄层板上，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水（35∶17∶5）于10 ℃以下放置过夜的下层溶液，展开，取出晾干，均匀喷洒3%三氯化铝乙醇溶液，放入恒温鼓风干燥箱中，在100～105 ℃下加热数分钟后，于365 nm 紫外灯下观察色谱情况［4］。在色谱图中，可见清晰且分离度好的新橙皮苷和柚皮苷的斑点，阴性无干扰，见图2。

图2 枳壳薄层色谱图：1.阴性样品；2.新橙皮苷和柚皮苷混合对照溶液；3～5.三批供试品

3 含量测定方法与结果

3.1 色谱条件

色谱柱：岛津ODS-3 C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相A 为乙腈，流动相B 为0.1 %磷酸溶液，梯度洗脱，见表1；检测波长为327 nm；流速为1.0 mL/min；柱温40 ℃；进样为10 μL。

表1 洗脱程序

3.2 溶液制备

3.2.1 对照品溶液配制 取适量绿原酸对照品，精密称定，加入50 %甲醇，制成浓度为每1 mL 含绿原酸40 μg 的对照品溶液。

3.2.2 供试品溶液配制 取样品约5 g，精密称定，置50 mL 棕色容量瓶中，加入约40 mL 的50 %甲醇，密塞，超声处理30 min，放冷后，再用50 %甲醇溶液定容至刻度，摇匀后过滤，取续滤液为供试品溶液。

3.2.3 阴性对照溶液配制 照利胆排石糖浆制剂工艺，制备未添加茵陈药材的阴性样品，采用“3.2.2”项下方法处理，得阴性对照溶液。

3.3 专属性试验

按“3.1”项下色谱条件，分析供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液的测定结果，图谱表明方法专属性良好，见图3。

图3 绿原酸HPLC色谱图：A为对照品；B为供试品；C为阴性对照

3.4 线性试验

以甲醇为稀释剂对绿原酸对照品储备液（0.409 8 mg/mL）进行稀释，分别得浓度为：409.8 μg/mL、81.96 μg/mL、40.98 μg/mL、16.39 μg/mL、8.196 μg/mL 的对照品溶液，按“3.1”项下色谱条件测定。得峰面积（Y）-浓度（X，μg/mL）的回归方程Y=3.275 24×10-3X-29 311.4，r=0.999 9。表明绿原酸在8.196 μg/mL～409.8 μg/mL 浓度范围内，线性良好。

3.5 稳定性试验

按“3.1”项下色谱条件，分别于0 h、2 h、5 h、10 h、12 h、24 h 对同一供试品溶液进样分析，各时间段绿原酸峰面积RSD 为0.39%。结果可知，24 h内溶液稳定性良好。

3.6 重复性试验

采用“3.2.2”项下供试品溶液制备方法，对样品（批号210625）进行前处理，共制备6 份，按“3.1”项下色谱条件测定，测得样品中绿原酸的平均含量为0.269 5 mg/g，RSD 为2.44 %，重复性符合要求。

3.7 加样回收率试验

取已知含量的样品（批号210625）6 份各约5 g，精密称定，分别加入2 mL 浓度为0.658 5 mg/mL 的绿原酸对照品溶液,采用“3.2.2”项下供试品溶液制备方法，按“3.1”项下色谱条件测定，结果见表2。

表2 加样回收试验结果

3.8 样品的含量测定

采用“3.2.2”项下供试品溶液制备方法，分别将5 批利胆排石糖浆样品制成供试品溶液，测定制剂中绿原酸的含量，5 批样品的绿原酸含量范围为0.269 5 mg/g～0.359 4 mg/g。结果见表3。

表3 样品的含量测定结果（mg/g）

4 讨论

4.1 人工牛黄薄层鉴别摸索

胆酸为人工牛黄的主要成分，且性质比较稳定。薄层鉴别方法摸索中，考察了不同提取溶剂（三氯甲烷、95%乙醇）及不同提取方法（超声、回流）对色谱结果的影响，发现两种方法效果均较好，考虑到方法操作简便性、经济性和毒性等，选择以95%乙醇超声提取的方法［4］。

4.2 枳壳薄层鉴别摸索

现代药理学研究提示，枳壳主要含挥发油类和黄酮苷类橙皮苷等，具调节胃肠道平滑肌、升血压、强心、利尿、解热镇痛等作用［5］。

试验中，新橙皮苷和柚皮苷斑点位置相近，容易出现斑点粘连情况，重点摸索展开剂中三氯甲烷的比例，最终得斑点分离情况较好的展开剂为：三氯甲烷-甲醇-水（35∶17∶5），于10 ℃以下放置过夜的下层溶液。

4.3 绿原酸的含量测定

茵陈具有利湿退黄、解毒疗疮的作用，可用于阳黄及阴黄的治疗［6］。现代药理研究显示，有保肝利胆、退黄利湿、抗炎、抗病毒、抗肿瘤等药理活性，常用于肝胆疾病的治疗。其利胆成分主要是绿原酸、对羟基苯乙酮等［7-8］。HPLC 法因其高效、高分辨率等技术优势，已成为目前控制中药制剂有效成分的重要手段［9］。故选择对绿原酸的含量进行检测，可有效地控制质量，进一步保证药品疗效。通过紫外可见分光光度计对绿原酸对照品溶液波长进行扫描，最大吸收波长与《中国药典》一致，确定检测波长为327 nm。由于利胆排石糖浆为较黏稠液体，故选择以称重方式称取样品进行实验。

本研究所建立的方法专属性强、重复性好，可用于利胆排石糖浆的质量控制。