Ang1-7对高血压心肌肥厚的影响

马全萍，杨 慧，郭 影，燕 茹，杨 震 (.海原县人民医院心内科，宁夏 海原 75500；.宁夏医科大学总医院心脏中心内科，宁夏 银川 75000)

心肌肥厚是高血压、缺血性心肌病、瓣膜病等多种心血管疾病常见的并发症[1]。高血压参与心肌肥厚的主要途径是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)，其主要的效应激素是AngⅡ，AngⅡ诱导生理血管收缩、血压调节和细胞外基质蛋白的产生。此外，AngⅡ可刺激心肌细胞异常生长，许多研究支持AngⅡ诱导心肌细胞肥大反应的现象[2]。而使用RAAS抑制剂治疗的心力衰竭(心衰)患者显示心肌肥厚减少、心衰进展缓慢[3]。这些肥厚效应是由AT1Rs介导的，使用AT1R拮抗剂可有效预防心肌肥厚[4]。总之，心肌肥厚是机体对各种生理和病理刺激的复杂反应,适应性向心型肥厚是一个代偿过程，早期可抵消血流动力学超负荷。但当病理刺激因素长期持续存在时，向心型肥厚便变为偏心、适应不良，从而引起心力衰竭[5]。由此可见，早期干预高血压和对抗心肌肥厚对预防心力衰竭和心律失常都具有重要的意义。如果没有早期干预，心肌肥厚会导致心脏增大、心肌纤维化和恶性心律失常，而恶性心律失常是心脏肥厚和纤维化的常见并发症，最终导致心脏性猝死[6]。

血管紧张素1-7(Ang1-7)作为RAAS中AngⅡ的内源性拮抗因子，可诱导全身性和区域性血管舒张，利钠利尿，并对血管平滑肌细胞、心肌细胞和成纤维细胞以及肾小球和近端肾小管细胞产生抗增殖和抗生长作用[7-8]。有研究发现，在心脏重塑的关键组织学组成部分中，间质、斑片状或致密瘢痕的纤维化构成了心律失常的关键组织学基质[9]。在此理论基础上，我们就想通过外源性Ang1-7干预自发性高血压大鼠(SHR)的RAAS过度激活，观察Ang1-7对肥厚心肌肥厚和纤维化的影响作用，从而探讨Ang1-7对高血压心肌肥厚心律失常的预防价值。

1 材料和方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物：北京维通利华实验动物技术有限公司提供SPF级雄性WKY5只、SHR10只[周龄16周，动物许可证编号SCXK(京)2016-0006]，室温(23±2)℃,24 h自由摄食水。将5只WKY作为正常血压对照组(n=5)，10只SHR随机分为两组，每组5例：SHR+A组[Alzet微渗泵入Ang1-7，400 ng/(kg·min)[10]]和SHR+NS组[Alzet微渗泵入生理盐水，400 ng/(kg·min)]，连续28 d。

所有动物实验程序均经宁夏医科大学动物护理和使用委员会批准，所有手术均在麻醉下进行，全部实验均在宁夏医科大学总医院心血管病研究所完成。

1.1.2主要试剂：Ang1-7(5 ml/支)，美国Med ChemExpress(MCE)公司，Alzet微型渗透压泵(2 ml)，美国Alzet公司，Masso染色试剂盒。

1.2实验方法

1.2.1大鼠血压测定：所有动物在干预前利用卡尔文鼠尾动脉血压仪med lab尾套法测收缩压(SBP)。选择人少、安静、温暖的场所，提前使大鼠处于测量环境中，设置测试箱温度为35℃。尾套套至大鼠尾巴根部，阻力值升至260 mmHg以上检测无漏气，血流阻断良好，无干扰，即开始测量。每只动物测量3次，取其平均值，干预28 d后再重复上述方法测量并进行前后比较。

1.2.2心脏彩超测定:利用GE彩色多普勒超声仪完善心脏检查，测取前室间隔和左室后壁厚度进行比较，全程检查在吸入异氟烷麻醉下进行。

1.2.3Masson染色：心肌切片组织脱蜡：68℃烤片过夜，二甲苯(Ⅰ)、二甲苯(Ⅱ)各10 min。入水、核染、盐酸酒精分化、丽春红品红溶液染色、磷钼酸溶液染5 min。苯胺蓝复染5 min，乙醇处理1 min。脱水：低到高梯度乙醇各2 min,二甲苯(Ⅰ)2 min-二甲苯(Ⅱ)2 min。中性树胶封片，显微镜下观察心肌组织蓝染情况以判断纤维化程度。

2 结果

2.1血压变化： 干预前血压结果显示：与WKY组相比，SHR+NS组血压和SHR+A组血压均显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。SHR+NS组与SHR+A组之间血压比较，差异无统计学意义(P>0.05)。干预2周后即可见SHR+A组血压较安慰剂组显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)，28 d后血压结果显示：与WKY组相比，SHR+NS组血压和SHR+A组血压仍显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。与SHR+NS组相比，SHR+A组血压显著降低，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 研究期间SBP值变化(mmHg,n=5)

2.2心脏彩超变化：干预前SHR+NS和SHR+A的左室后壁、室间隔厚度相比，差异无统计学意义(P>0.05),与WKY组相比，SHR+NS和SHR+A的左室后壁、室间隔厚度均显著增加，差异有统计学意义(P<0.05),干预后与SHR+NS相比，SHR+A组左室后壁、室间隔厚度均显著减轻，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2、图1。

2.3Masso染色：Masson染色结果显示WKY组心肌红润，有少量蓝染组织，而SHR+NS组心肌组织大面积蓝染，红润心肌组织极少，经Ang1-7干预后的SHR+A组心肌蓝染程度介于二者之间，见图2。

表2 研究期间左室后壁和室间隔厚度变化

图1 不同病灶组织中ERCC1蛋白阳性率(×200)

注：A为WKY的心肌组织Masson染色结果；B为SHR+NS的心肌组织Masson染色结果；C为SHR+A的心肌组织Masson染色结果图2 各组心肌组织Masson染色(×400)

2.4电流-电压关系曲线：绘制某种电压门控离子通道的电流-电压关系曲线(I-V曲线)，可以显示其基本电压依赖特征，如通道的激活电压的范围和翻转电位等。如果通道对某种离子的选择性很高，则实际测到的通道电流的翻转电位就与理论算得该离子的平衡电位很接近。钠通道对钠离子具有高度选择性。利用系列阶跃电压刺激程序引发电压门控性钠离子电流，以各个电压下的钠电流最大值为纵坐标，各刺激电压为横坐标，即可绘制出电压门控性钠离子通道的I-V曲线。在本实验中，三组大鼠的激活电压均在-60 mV附近,-20～-30 mV时电流达到最大值。一般来说，翻转电位与细胞内外液钠离子浓度有关，在本实验所用试剂中，3组大鼠翻转电位均在+30～+40 mV之间。

3 讨论

高血压是高血压性心脏病最常见的原因，主要包括左室肥厚(LVH)，而LVH是房颤、室性心律失常和心源性猝死(SCD)的一个强大的、独立的预测因子[11]。最新研究显示，慢性间隙性低压低氧(CIHH)可减轻高血压心肌肥厚和心肌纤维化程度，可能与通过平衡RAS的ACE/Ang Ⅱ/AT1和ACE2/Ang1-7/Mas轴来减轻炎性反应、抑制氧化应激有关[12]。也有研究显示，慢性缺氧诱导的右心室结构重塑和纤维化可通过平衡大鼠局部ACE-AngI-AT1R/ACE2-Ang1-7-Mas轴减轻[13]。前期研究也发现，Ang1-7对高血压大鼠心肌细胞膜CX43表达有显著改善作用，这就提示Ang1-7可能具有预防肥厚心肌心律失常的价值[14]。

本研究中，通过给SHR大鼠皮下微渗泵入Ang1-7,干预高血压大鼠RAAS过度激活，比较分析WKY、SHR干预前后血压、心肌肥厚和纤维化变化，结果发现Ang1-7可显著减轻SHR的血压升高，改善SHR大鼠心肌肥厚和纤维化程度，从一定程度上预防了高血压心脏病的发生，大大降低了心律失常和SCD的风险，具有一定的临床应用价值。