妊娠高血压综合征患者血清高分子量脂联素水平对滋养细胞p53稳态的调节和继发妊娠子痫的影响

廖文珺 王 洁 (.惠州市惠东县人民医院，广东 惠州 56300；.惠州市惠东县第二人民医院，广东 惠州 5635)

妊娠期高血压是孕妇在妊娠期常患有的一种比较特殊的疾病，在我国近年来的调查研究表明，妊娠期高血压发病率较其他妊娠期疾病高，其对孕妇的生理以及心理均会产生极大的影响，严重者则会危机患者其他器官组织和腺体，从而影响胎儿的正常发育[1-2]。脂联素(ADP)作为一种由脂肪细胞特异性分泌的细胞因子，其在体内以三聚体、六聚体和高分子质量(HMW)多聚体等结构形式存在，HMW-ADP是其主要活性形式[3]。临床研究[4]发现，一些妊娠期高血压患者体内的ADP水平表现出了显著的降低，但目前国内外针对原发性高血压人群HMW-ADP的研究鲜见报道。凋亡是滋养细胞在应对应激反应时表现出的一种重要调节性死亡方式，该通路可由多种信号通路相互作用相互介导形成，其中p53作为最重要的一个调控因子，该因子的累积水平的升高常常伴随着凋亡水平升高，从而诱发子痫等一系列与妊娠相关的疾病[5]。本研究选取妊娠期高血压患者共计100例，从而研究妊高征患者血清HMW-ADP水平对滋养细胞p53稳态的调节和继发妊娠子痫发生的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料：选取2016年11月～2018年11月期间我科的妊娠期高血压患者共计100例，平均年龄为(24.35±6.98)岁。按照患者的患病程度将其分为轻度先兆子痫患者共计33例，患者平均年龄为(24.35±6.98)岁，怀孕时长为(31.98±2.15)周；中度先兆子痫患者共计33例，患者平均年龄为(26.09±4.31)岁，怀孕时长为(32.11±4.11)周；重度先兆子痫患者共计34例，患者平均年龄为(25.33±3.69)岁，怀孕时长为(31.76±3.21)周。以32例健康孕妇作为对照组。两组孕妇的年龄、体重以及身体其他指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)。纳入标准：患者均表现为妊娠期高血压；均为单胎发育；高血压孕妇未选择其他方式进行治疗；患者均为自愿参与本次调查研究，患者本人以及家属均签署知情同意书。排除标准：孕前患有高血压和肾脏相关等疾病；入选者临床资料信息不完整；无法积极配合本次研究。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2方法：清晨，取孕妇空腹状态下3 ml静脉血于抗凝管中，在温度为4℃的条件下按照2 500 r/min的速度离心处理10 min，取处理后的上清液贮存于温度为-80℃的超低温冰箱中备用；于清晨取所有孕妇尿液10 ml，根据试剂盒相关使用说明测定相关指标；当各孕妇胎盘经剖宫产娩出后，在无菌条件下剥离胎盘与母体分离面的膜状组织，靠近脐带插入点于分离面随机切取面积约为5 cm2的胎盘组织，组织厚度不能超过0.5 cm，液氮罐中速冻备用。胎盘病理免疫组织化表达，见图1。

1.3观测指标及方法

1.3.1各组孕妇血清HMW-ADP及血压等水平比较分析:采用NII356-ATA型全自动生化分析仪中测定各样品中的血清HMW-ADP、瘦素(LEP)、血清胱抑素C(CysC)和血清肌酐(Scr)水平；同时详细记录各组孕产妇收缩压(SBP)、舒张压(DBP)水平，计算平均动脉压(MAP)。

图1 胎盘病理免疫组织化表达(×200)

1.3.2各组孕妇滋养细胞p53 mRNA和蛋白表达水平比较分析:取各组患者生产后的胎盘组织，组织分离后将组织浸于预冷的生理盐水中清洗3次后，采用RNA抽提和RT-PCR法检测各组细胞TSG mRNA和蛋白表达水平。

1.3.3各组孕妇滋养细胞p53增殖和迁移能力比较:取各组患者生产后的胎盘组织，组织分离后将组织浸于预冷的生理盐水中清洗3次后，收集并重悬细胞，采用CCK-8法检测各组孕妇滋养细胞p53增殖情况；通过24孔、孔径8 μm的Transwell迁移实验检测细胞转移能力体外经典实验。

1.3.4各组孕妇继发妊娠子痫发生率和胎儿发育相关指标比较:统计各组孕妇继发妊娠子痫发生率以及各组孕产妇分娩后记录各组胎儿胎龄、体重、体重指数(BMI)及胎盘质量等指标。

1.3.5相关性分析：以血清HMW-ADP为因变量多元逐步回归分析及Spearman相关分析。

1.4统计学方法:采用SPSS20.0统计分析软件(美国IBM公司)进行单因素方差分析，t检验及χ2检验，相关性分析采用多元回归分析Spearman相关分析。

2 结果

2.1各组孕妇血清HMW-ADP及血压等水平比较:各组孕妇血清HMW-ADP及血压等水平相互比较均存在统计学差异(P<0.05)。其中对照组孕妇的HMW-ADP和LEP水平较轻度组、中度组和对照组高，而CysC和Scr则较低，并且随着孕妇患病程度加重，HMWA-ADP和LEP水平越来越低，CysC和Scr水平越来越高；患病组孕妇的SBP、DBP和MAP均表现为异常，随着孕妇患病程度加重，各压力指标也随之增大。见表1。

表1 各组孕妇血清HMW-ADP及血压等水平比较

2.2各组孕妇滋养细胞p53 mRNA和蛋白表达水平比较：患病组孕妇滋养细胞p53 mRNA和蛋白表达水平相互比较均存在统计学差异(P<0.05)，并且随着时间延长，各组水平表现出了增加的趋势，而对照组孕妇的p53 mRNA和蛋白表达水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。其中重度组孕妇的p53 mRNA和蛋白表达水平在0 h到72 h分别由(0.87±0.31)和(0.81±0.46)增加到了(1.24±0.33)和(1.14±0.25)，而轻度组孕妇仅由(0.44±0.08)和(0.57±0.23)增加到了(0.90±0.21)和(0.91±0.34)。见表2，图2，图3。

2.3各组孕妇滋养细胞p53增殖和迁移能力比较：各组组孕妇滋养细胞p53增殖和迁移能力相互比较均存在统计学差异(P<0.05)，并且随着时间延长，各组水平表现出了增加的趋势，另外，患病组细胞的增殖和迁移能力均小于对照组。其中重度组孕妇的p53增殖和迁移能力在0 h到72 h分别由(1.06±0.34)和(0.98±0.39)增加到了(1.51±0.98)和(1.55±0.62)，而轻度组孕妇则由(1.56±0.84)和(2.09±1.07)增加到了(3.53±1.49)和(3.21±1.98)。见表3。

表2 各组孕妇滋养细胞p53 mRNA和蛋白表达水平比较

图2 各组孕妇滋养细胞p53 mRNA表达条形图

图3 各组孕妇滋养细胞p53蛋白表达条形图

表3 各组孕妇滋养细胞p53增殖和迁移能力比较

2.4各组孕妇继发妊娠子痫发生率和胎儿发育相关指标比较：各组孕妇继发妊娠子痫发生率相比均存在统计学差异(P<0.05)。其中对照组继发妊娠子痫发生率为0%，而轻度组、中度组和重度组的发生率则分别为12.12%、23.33%和35.29%，表明患有妊娠高血压综合征的孕妇出现继发妊娠子痫的概率较健康孕妇高；各组胎儿发育相关指标胎龄、体重、BMI以及胎盘质量比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。

2.5以血清HMW-ADP为因变量的多元逐步回归结果分析：以血清HMW-ADP为因变量，LEP、CysC、Scr、SBP、DBP和MAP作为自变量，结果表明，血清HMW-ADP为因变量与LEP(OR=-0.002，95%CI：0.021～-0.004，P=0.001)、CysC(OR=-0.325，95%CI：-0.543～-0.091，P=0.004)、Scr(OR=-0.934，95%CI：0.345～1.823，P=0.012)、SBP(OR=0.321，95%CI：0.119～1.723，P=0.009)、DBP(OR=0.092，95%CI：0.076～1.931，P=0.002)和MAP(OR=0.173，95%CI：0.123～0.934，P=0.018)各指标之间存在密切的相关性，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表4 各组孕妇继发妊娠子痫发生率和胎儿发育相关指标比较

表5 以血清HMW-ADP为因变量的多元逐步回归结果

2.6血清HMW-ADP水平、滋养细胞p53稳态的调节、继发妊娠子痫发生与先兆子痫严重程度相关性分析：血清HMW-ADP水平与滋养细胞p53稳态的调节和继发妊娠子痫发生之间存在显著的相关性，轻度组、中度组和重度组与HMWA、p53 mRNA和p53蛋白水平以及继发妊娠子痫发生率之间均存在正相关关系(P<0.05)。见表6。

表6 血清HMW-ADP水平与滋养细胞p53稳态的调节、继发妊娠子痫发生与先兆子痫严重程度相关性分析(r值)

3 讨论

妊娠期高血压患者若不能得到及时诊断和有效治疗则存在迅速恶化的可能性，引发一系列不良妊娠结果，如胎盘早剥以及出血性休克等严重的并发症，同时还会导致胎儿发育不良[6-8]。因此，准确判断妊娠期高血压患者病情的发生和发展就尤为重要。脂联素是脂肪组织特异性分泌的一种胶原样细胞因子，HMW-ADP在体内主要参与糖脂代谢的调节以及免疫等重要的过程。妊娠期高血压的发生不但与肥胖、胰岛素抵抗和糖尿病等疾病的发生发展存在密切的相关性，同时还会调控妊娠期孕妇体内糖代谢过程[9-10]。妊娠期高血压患者胰岛素抵抗较健康孕妇显著增强，而HMW-ADP又能增强体内胰岛素的敏感性，因而HMW-ADP水平变化与妊娠期高血压之间存在密切的联系[11]。凋亡的发生是滋养细胞应对应激的一种重要调节性死亡方式，结合上述实验结果，妊娠期高血压会引发体内p53大量累积，滋养细胞p53稳态化就会失衡[12]。本研究结果显示，妊娠期高血压患者血清HMW-ADP水平会随着孕妇患病程度加重而降低，且p53 mRNA和蛋白表达水平失衡，继发妊娠子痫发生率越来越高，这样就表明低HMW-ADP水平可能参与了继发妊娠子痫的发生发展。

子痫的发病机制是较为复杂的，而其中一个最重要的发病机制就算胎盘缺血或者缺氧导致的，这一过程的发生会进一步引发胰岛素抵抗、氧化应激和免疫失衡，从而导致母体高血压的发生[13-15]。血清HMW-ADP与子痫的发病密切相关，在子痫前期的发病过程中起到了一定的作用。在整个妊娠过程中，任何一个阶段任何一个因素发生失调都可能导致滋养细胞p53功能出现异常而引发妊娠期间的相关疾病[16-18]。若胎盘滋养细胞p53侵袭不足就会引发孕妇自然流产、子痫前期以及胎儿宫内生长受限等病理疾病，而滋养细胞p53侵袭过度则会导致葡萄胎、绒癌以及胎盘部位滋养细胞肿瘤等[19-20]，因此，深入探索影响滋养细胞p53的生物学功能，也就有利于进一步揭示子痫前期的发病机制。

本研究结果显示HMW-ADP的变化参与了继发妊娠子痫的发生发展以及滋养细胞p53的平衡性，本研究结果在促进妊娠期高血压患者快速恢复的同时，也为该疾病的后续深入治疗研究奠定坚实的理论基础。